一种诱导脐带间充质干细胞分泌细胞因子的组合物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种诱导脐带间充质干细胞分泌细胞因子的组合物，包括以下重量份的成分：L

【技术实现步骤摘要】
一种诱导脐带间充质干细胞分泌细胞因子的组合物及其应用


[0001]本专利技术涉及干细胞领域，尤其涉及一种诱导脐带间充质干细胞分泌细胞因子的组合物及其应用。

技术介绍

[0002]脐带间充质干细胞是一种来源丰富、易于分离培养的干细胞，其具有自我更新和多向分化潜能，可向多个方向进行分化，如成骨细胞、软骨细胞、类肝细胞、神经细胞和心肌细胞等，且无伦理方面的争议。与其他来源的间充质干细胞比较有较明显的临床应用优势，目前脐带间充质干细胞已经在临床应用领域取得了显著的成果。
[0003]随着脐带间充质干细胞应用需求的增加，体外扩增脐带间充质干细胞成为常用的技术手段，在培养过程技术人员发现培养液中含有多种脐带间充质干细胞分泌的细胞因子，这些细胞因子也被分离出来，在创伤修复，美容护肤等领域获得了广泛的应用。常规方法培养脐带间充质干细胞，培养液中细胞因子含量较低，为了提高细胞因子的含量，需要在培养过程中对脐带间充质干细胞进行低氧处理，但是脐带间充质干细胞低氧处理需要特殊的设备如低氧细胞培养箱。而且低氧处理过程中需要消耗大量的氮气，导致成本进一步升高，使得其推广应用受到一定的限制。因此有必要研究一种提高脐带间充质干细胞因子含量的方法，无需低氧处理，降低脐带间充质干细胞因子的生产成本。

技术实现思路

[0004]为了克服现有技术的不足，本专利技术的目的之一在于提供一种诱导脐带间充质干细胞分泌细胞因子的组合物，能促进脐带间充质干细胞分泌细胞因子，提高细胞因子的产量。
[0005]本专利技术的目的之二在于提供一种诱导脐带间充质干细胞分泌细胞因子组合物的应用。
[0006]本专利技术的目的之一采用如下技术方案实现：
[0007]一种诱导脐带间充质干细胞分泌细胞因子的组合物，包括以下重量份的成分：L
‑
谷氨酰胺3.5
‑
5.5份、铁苋菜提取物1.4
‑
3.8份、维生素C7.5
‑
10份、石杉碱甲3.2
‑
5.1份、胰岛素10
‑
15份。
[0008]优先地，所述诱导脐带间充质干细胞分泌细胞因子的组合物包括以下重量份的成分：L
‑
谷氨酰胺4.5份、铁苋菜提取物2.6份、维生素C 8份、石杉碱甲4.4份、胰岛素12份。
[0009]优先地，所述诱导脐带间充质干细胞分泌细胞因子的组合物还包括DMEM/F12培养基，所述培养基的用量为150
‑
170份。
[0010]优先地，所述铁苋菜提取物为规格20:1的比例提取物，提取物的平均粒径为80
‑
120目。
[0011]本专利技术的目的之二采用如下技术方案实现：
[0012]所述诱导脐带间充质干细胞分泌细胞因子的组合物的应用，包括以下步骤：
[0013](1)向DMEM/F12培养基中加入L
‑
谷氨酰胺、铁苋菜提取物、维生素C、石杉碱甲、胰
岛素，混合均匀得到诱导培养基，保存在4℃，备用
[0014](2)取原代分离的脐带间充质干细胞接种在完全培养基中进行传代培养，将收获的P2
‑
P7代细胞去除完全培养基后接种在步骤(1)的诱导培养基中，诱导培养64
‑
72h后收集上清液；
[0015](3)将收集的上清液离心后过滤处理，得到脐带间充质干细胞因子浓缩液。
[0016]优选地，传代培养和诱导培养的条件为：5％CO2，37℃。
[0017]优选地，步骤(2)中将生长密度达到70
‑
80％的P2
‑
P7代细胞弃去完全培养基，然后用PBS清洗三遍，再接种至诱导培养基中。
[0018]优选地，脐带间充质干细胞在完全培养基和诱导培养基中的接种密度均为1
‑5×
104个/mL。
[0019]相比现有技术，本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供一种诱导脐带间充质干细胞分泌细胞因子的组合物，组合物中的铁苋菜提取物、石杉碱甲和其他成分协同作用，无需低氧培养环境，有效提高脐带间充质干细胞分泌细胞因子的能力，提高了细胞因子的产量，为脐带间充质干细胞因子在临床或美妆领域的应用提供充足的来源。
[0020]本专利技术还提供了上述诱导脐带间充质干细胞分泌细胞因子组合物的具体应用，诱导过程简单易于操作，降低了脐带间充质干细胞因子的生产成本，有助于脐带间充质干细胞因子商业化的生产和推广应用。
附图说明
[0021]图1为本专利技术实施例1，对比例1至3中经诱导培养后脐带间充质干细胞因子的含量。
具体实施方式
[0022]下面，结合附图以及具体实施方式，对本专利技术做进一步描述，需要说明的是，在不相冲突的前提下，以下描述的各实施例之间或各技术特征之间可以任意组合形成新的实施例。
[0023]实施例1
[0024]一种诱导脐带间充质干细胞分泌细胞因子的组合物，由以下重量份的成分组成：DMEM/F12培养基160份、L
‑
谷氨酰胺4.5份、铁苋菜提取物2.6份、维生素C 8份、石杉碱甲4.4份、胰岛素12份；铁苋菜提取物为规格20:1的比例提取物，提取物的平均粒径为80
‑
120目。
[0025]上述诱导脐带间充质干细胞分泌细胞因子的组合物的应用，包括以下步骤：
[0026](1)向DMEM/F12培养基中加入L
‑
谷氨酰胺、铁苋菜提取物、维生素C、石杉碱甲、胰岛素，混合均匀得到诱导培养基，保存在4℃，备用
[0027](2)取原代分离的脐带间充质干细胞接种在8mL完全培养基(DMEM/F12培养基，5％FBS、人血清白蛋白0.5mg/mL、胰岛素5μg/mL、50U/ml青霉素)中，接种密度为1
×
104个/mL，在5％CO2，37℃的培养箱中进行传代培养，将生长密度达到70％的P2代细胞弃去完全培养基，然后用PBS清洗三遍，再接种至10mL诱导培养基中，接种密度为1
×
104个/mL，在5％CO2，37℃的培养箱中诱导培养64h后收集上清液；
[0028](3)将收集的上清液离心后先经0.22μm的滤膜过滤处理，然后通过30KD超滤膜收
集透析液，将透析液通过90D的超滤膜，收集截留液，得到脐带间充质干细胞因子浓缩液。
[0029]实施例2
[0030]一种诱导脐带间充质干细胞分泌细胞因子的组合物，由以下重量份的成分组成：DMEM/F12培养基150份、L
‑
谷氨酰胺3.5份、铁苋菜提取物1.4份、维生素C7.5份、石杉碱甲3.2份、胰岛素10份；铁苋菜提取物为规格20:1的比例提取物，提取物的平均粒径为80
‑
120目。
[0031]上述诱导脐带间充质干细胞分泌细胞因子的组合物的应用，包括以下步骤：
[0032](1)向DMEM/F12培养基中加本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种诱导脐带间充质干细胞分泌细胞因子的组合物，其特征在于，包括以下重量份的成分：L
‑
谷氨酰胺3.5
‑
5.5份、铁苋菜提取物1.4
‑
3.8份、维生素C7.5
‑
10份、石杉碱甲3.2
‑
5.1份、胰岛素10
‑
15份。2.根据权利要求1所述诱导脐带间充质干细胞分泌细胞因子的组合物，其特征在于，包括以下重量份的成分：L
‑
谷氨酰胺4.5份、铁苋菜提取物2.6份、维生素C 8份、石杉碱甲4.4份、胰岛素12份。3.根据权利要求1所述诱导脐带间充质干细胞分泌细胞因子的组合物，其特征在于，还包括DMEM/F12培养基，所述培养基的用量为150
‑
170份。4.根据权利要求1所述诱导脐带间充质干细胞分泌细胞因子的组合物，其特征在于，所述铁苋菜提取物为20:1的比例提取物，提取物的平均粒径为80
‑
120目。5.如权利要求3所述诱导脐带间充质干细胞分泌细胞因子的组合物的应用，其特征在于，包括以下步骤：...

【专利技术属性】
技术研发人员：岳俊丽，陈敏，
申请(专利权)人：岳俊丽，
类型：发明
国别省市：