一种肌肉干细胞的分离培养方法技术

本发明专利技术提供了一种肌肉干细胞的分离培养方法。包括以下步骤：S1：对肌肉样本进行消毒、清洗，得到肌肉组织；S2：加入消化酶对肌肉组织进行消化处理，得到单细胞混合物；S3：将单细胞混合物接种在细胞培养容器内，加入细胞培养基进行差速贴壁培养，得到纯化的肌肉干细胞；S4：对纯化的肌肉干细胞进行传代培养。通过该方法可获得大量稳定表达肌肉干细胞标志物Pax7的肌肉干细胞，同时保持体外增殖以及自我更新的能力，激发了其分化潜能，可以广泛应用于细胞治疗、组织工程、分子生物学等研究领域。分子生物学等研究领域。

【技术实现步骤摘要】
一种肌肉干细胞的分离培养方法


[0001]本专利技术涉及干细胞培养
，尤其涉及一种肌肉干细胞的分离培养方法。

技术介绍

[0002]肌营养不良症是由编码细胞骨架和膜蛋白的基因的功能丧失突变引起的，最常见的为杜氏肌营养不良症(DMD)。骨骼肌由大的多核纤维组成，其细胞核不能分裂。由于无法由数亿个有丝分裂后细胞核中恢复正确的基因表达，肌营养不良症成为了最难治疗的疾病之一。
[0003]骨骼肌自身具有很强的组织扩张和修复潜力，这依赖于常驻的肌肉干细胞(Muscle stem cells,MuSCs)，也称为“卫星细胞”(Satellite cells,SCs)，即位于基底层和肌纤维膜之间的肌源性祖细胞。未受伤肌肉中静止的SCs在受伤或疾病时被激活(Sara Ancel,Stuelsatz Pascal,Feige N Jerome.Muscle stem cell quiescence:controlling stemness by staying asleep.Trends Cell Biol.2021 Jul；31(7):556...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种肌肉干细胞的分离培养方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：对肌肉样本进行消毒、清洗，得到肌肉组织；S2：加入消化酶对肌肉组织进行消化处理，得到单细胞混合物；S3：将单细胞混合物接种在细胞培养容器内，加入细胞培养基并进行差速贴壁培养，得到纯化的肌肉干细胞；S4：对纯化的肌肉干细胞进行传代培养。2.如权利要求1所述的一种肌肉干细胞的分离培养方法，其特征在于，步骤S2中，所述消化酶包括分散酶和胰酶替代物，所述分散酶为I型胶原蛋白酶和中性蛋白酶II的混合酶。3.如权利要求2所述的一种肌肉干细胞的分离培养方法，其特征在于，步骤S2中，I型胶原蛋白酶的终浓度为0.1％～0.5％、中性蛋白酶II的终浓度为2～5mg/mL、胰酶替代物的终浓度为1％～5％。4.如权利要求3所述的一种肌肉干细胞的分离培养方法，其特征在于，步骤S2中，消化时间为0.5～1小时，消化温度为37℃。5.如权利要求1所述的一种肌肉干细胞的分离培养方法，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：牟晓东，戴晓宇，付强，邓恩杰，白希，
申请(专利权)人：重庆市铂而斐细胞生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：