本发明专利技术公开用于骨质损伤修复的上清凝胶干细胞培养基及制备方法，所述培养基包括：体积比为1:0.2～0.5：0.01～0.05的IMDM培养基、骨髓间充质干细胞悬浮液和神经诱导化合物溶液。该制备方法包括如下步骤：步骤SS1：按体积比为1:0.2～0.5：0.01～0.05分别制备IMDM培养基、骨髓间充质干细胞悬浮液和神经诱导化合物溶液；步骤SS2：将所述步骤SS1制备的神经诱导化合物溶液加入所述步骤SS1制备的IMDM培养基中，制备诱导培养基溶液；步骤SS3：将所述步骤SS1制备的骨髓间充质干细胞悬浮液加入所述步骤SS2制备的诱导培养基溶液中混合，制得上清凝胶干细胞培养基。本发明专利技术彻底解决诱导获得定向分化效率高、存活率高的骨髓去分化间充质干细胞以供应骨质损伤修复而非表层创面愈合的技术需求。技术需求。
【技术实现步骤摘要】
用于骨质损伤修复的上清凝胶干细胞培养基及其制备方法
[0001]本专利技术涉及一种用于骨质损伤修复的上清凝胶干细胞培养基及其制备方法，属于生物材料
技术介绍
[0002]创面的愈合过程是一个复杂的过程，它涉及到皮肤缺损部位的再上皮化、肉芽组织的增生、炎症反应、血管增生和创面的重塑等过程，其中任何一个过程出现问题，都会导致创面愈合障碍。现有技术中公开号为CN105797205A的中国专利公开干细胞培养上清凝胶，具体公开该上清凝胶由干细胞培养上清和甲基纤维素组成，溶剂为水，干细胞培养上清是将间充质干细胞使用不含血清的干细胞培养基培养后收集纯化得到。该上清凝胶用于皮肤创面修复，效果显著且不留瘢痕。但是其使用的不含血清的干细胞培养基主要配方为：人血清白蛋白：4g/L
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10g/L，甘氨酸：30.00mg/L，非必需氨基酸：1mg/L
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50mg/L，重组人胰岛素：1mg/L
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10mg/L，人转铁蛋白：5mg/L
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20mg/L。该不含血清的干细胞培养基缺乏针对诱导获得定向分化效率高、存活率高的骨髓去分化间充质干细胞以供应骨质损伤修复而非表层创面愈合的技术需求进行设计专门的干细胞培养基。
技术实现思路
[0003]本专利技术所要解决的技术问题是克服现有技术的缺陷，提供一种用于骨质损伤修复的上清凝胶干细胞培养基及其制备方法。
[0004]为解决上述技术问题，本专利技术提供用于骨质损伤修复的上清凝胶干细胞培养基，其特征在于，所述培养基包括：体积比为1:0.2～0.5：0.01～0.05的IMDM培养基、骨髓间充质干细胞悬浮液和神经诱导化合物溶液。
[0005]作为一种较佳的实施例，每500mL的所述IMDM培养基由以下浓度的组分组成： 重组人胰岛素 1mg/mL； 重组转铁蛋白 2.5μg/mL； 维生素C 16.1μg/mL； 人白蛋白 1mg/mL； 纤维细胞生长因子 10ng/mL； 充足人血小板源性生长因子 10ng/mL； 促生长因子IGF
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1 10ng/mL； 转化生长因子TGF
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β 10ng/mL； 纤维连接蛋白 10ng/mL； 胎球蛋白 1mg/mL； β
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细胞素10μg/mL； β
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巯基乙醇l 50μM ；ALK抑制剂 1～3mmol/L。
[0006]作为一种较佳的实施例，所述骨髓间充质干细胞悬浮液按如下方法制备：将5g的人骨髓组织剪碎，用5～10ml的0.2％的II型胶原酶消化，获得骨髓间充质干细胞悬浮液。
[0007]作为一种较佳的实施例，所述人骨髓组织与0.2％的II型胶原酶的配比方式为5g：5～10ml。
[0008]作为一种较佳的实施例，所述神经诱导化合物溶液包括PD98059和JW55；所述PD98059在神经诱导化合物溶液中的浓度为3～7μM，所述JW55在神经诱导化合物溶液中的浓度为12～16μM。
[0009]本专利技术还提出用于骨质损伤修复的上清凝胶干细胞培养基的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤SS1：按体积比为1:0.2～0.5：0.01～0.05分别制备IMDM培养基、骨髓间充质干细胞悬浮液和神经诱导化合物溶液；步骤SS2：将所述步骤SS1制备的神经诱导化合物溶液加入所述步骤SS1制备的IMDM培养基中，制备诱导培养基溶液；步骤SS3：将所述步骤SS1制备的骨髓间充质干细胞悬浮液加入所述步骤SS2制备的诱导培养基溶液中混合，制得上清凝胶干细胞培养基。
[0010]作为一种较佳的实施例，所述步骤SS1中的所述骨髓间充质干细胞悬浮液的制备方法包括：将人骨髓组织剪碎，用0.2％的II型胶原酶消化，获得骨髓间充质干细胞悬浮液。
[0011]作为一种较佳的实施例，所述人骨髓组织与0.2％的II型胶原酶的配比方式为5g：5～10ml。
[0012]作为一种较佳的实施例，所述0.2％的II型胶原酶的消化条件为：15～37℃的水浴中1～3h。
[0013]作为一种较佳的实施例，所述步骤SS3中的混合条件为：20～37℃的水浴中3～5h后，然后转4℃水浴保存。
[0014]本专利技术所达到的有益效果：本专利技术针对现有技术缺乏针对诱导获得定向分化效率高、存活率高的骨髓去分化间充质干细胞以供应骨质损伤修复而非表层创面愈合的技术需求进行设计专门的干细胞培养基，提出采用IMDM培养基、骨髓间充质干细胞悬浮液和神经诱导化合物溶液研发用于骨质损伤修复的上清凝胶干细胞培养基及其制备方法，通过诱导培养基溶液保证基于骨髓去分化间充质干细胞传代培养的定向分化和存活率，使得制备的骨髓间质干细胞培养上清凝胶用于骨质损伤修复，效果显著，消除传统缝合手术造成的二次骨裂风险，彻底解决诱导获得定向分化效率高、存活率高的骨髓去分化间充质干细胞以供应骨质损伤修复而非表层创面愈合的技术需求。
具体实施方式
[0015]下面对本专利技术作进一步描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本专利技术的技术方案，而不能以此来限制本专利技术的保护范围。
[0016]实施例1本专利技术提出用于骨质损伤修复的上清凝胶干细胞培养基，所述培养基包括：体积比为1:0.2～0.5：0.01～0.05的IMDM培养基、骨髓间充质干细胞悬浮液和神经诱导化合物溶液。
[0017]作为一种较佳的实施例，每500mL的所述IMDM培养基由以下浓度的组分组成： 重组人胰岛素 1mg/mL； 重组转铁蛋白 2.5μg/mL； 维生素C 16.1μg/mL； 人白蛋白 1mg/mL； 纤维细胞生长因子 10ng/mL； 充足人血小板源性生长因子 10ng/mL； 促生长因子IGF
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1 10ng/mL； 转化生长因子TGF
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β 10ng/mL； 纤维连接蛋白 10ng/mL； 胎球蛋白 1mg/mL； β
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细胞素10μg/mL； β
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巯基乙醇l 50μM ；ALK抑制剂 1～3mmol/L。
[0018]作为一种较佳的实施例，所述骨髓间充质干细胞悬浮液按如下方法制备：将5g的人骨髓组织剪碎，用5～10ml的0.2％的II型胶原酶消化，获得骨髓间充质干细胞悬浮液。
[0019]作为一种较佳的实施例，所述神经诱导化合物溶液包括PD98059和JW55；所述PD98059在神经诱导化合物溶液中的浓度为3～7μM，所述JW55在神经诱导化合物溶液中的浓度为12～16μM。
[0020]实施例2 本专利技术还提出用于骨质损伤修复的上清凝胶干细胞培养基的制备方法，包括如下步骤：步骤SS1：按体积比为1:0.2～0.5：0.01～0.05分别制备IMDM培养基、骨髓间充质干细胞悬浮液和神经诱导化合物溶液；所述步骤SS1中的所述骨髓间充质干细胞悬浮液的制备方法包括：将5g的人骨髓组织剪碎，用5～10ml的0.2％的II型胶原酶在15～37℃的水浴中消化1～3h本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.用于骨质损伤修复的上清凝胶干细胞培养基，其特征在于，所述培养基包括：体积比为1:0.2～0.5：0.01～0.05的IMDM培养基、骨髓间充质干细胞悬浮液和神经诱导化合物溶液。2.根据权利要求1所述的用于骨质损伤修复的上清凝胶干细胞培养基，其特征在于，每500mL的所述IMDM培养基由以下浓度的组分组成： 重组人胰岛素 1mg/mL； 重组转铁蛋白 2.5μg/mL； 维生素C 16.1μg/mL； 人白蛋白 1mg/mL； 纤维细胞生长因子 10ng/mL； 充足人血小板源性生长因子 10ng/mL； 促生长因子IGF
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1 10ng/mL； 转化生长因子TGF
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β 10ng/mL； 纤维连接蛋白 10ng/mL； 胎球蛋白 1mg/mL； β
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细胞素10μg/mL； β
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巯基乙醇l 50μM ；ALK抑制剂 1～3mmol/L。3.根据权利要求1所述的用于骨质损伤修复的上清凝胶干细胞培养基，其特征在于，所述骨髓间充质干细胞悬浮液按如下方法制备：将人骨髓组织剪碎，用0.2％的II型胶原酶消化，获得骨髓间充质干细胞悬浮液。4.根据权利要求3所述的用于骨质损伤修复的上清凝胶干细胞培养基，其特征在于，所述人骨髓组织与0.2％的II型胶原酶的配比方式为5g：5～10ml。5.根据权利要求1所述的用于骨质损伤修复的上清凝胶干细胞培养基，其特征在于，所述神经诱导化合物溶液包括PD98059和...
【专利技术属性】
技术研发人员：王凌鸿，谢海涛，杨璐，
申请(专利权)人：赛尔生命科技深圳有限公司，
类型：发明
国别省市：
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