一种用于细胞内靶向线粒体的转运载体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种用于细胞内靶向线粒体的转运载体及其制备和在蛋白质复合物分析中的应用。在该方法中，设计制备具有靶向线粒体功能的载体，使其与细胞共同孵育后经细胞内吞，在内吞过程中载体途径其他亚细胞器后靶向递送交联剂至细胞内特定亚细胞器

【技术实现步骤摘要】
一种用于细胞内靶向线粒体的转运载体及其应用


[0001]本专利技术涉及一种用于细胞内靶向线粒体的转运载体及其制备和在蛋白质复合物分析中的应用，属于生物分析


技术介绍

[0002]线粒体作为细胞必不可少的能量中心，参与细胞增殖，死亡和分化。蛋白质复合物是细胞和线粒体的基本组成部分，是生物途径的执行者。研究线粒体蛋白质复合物，对线粒体中蛋白质复合物进行时空动态变化规律的分析，对于解析蛋白质复合物在生物途径中如何发挥作用至关重要。传统技术如Cryo
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EM，X射线，NMR可以提供处于晶体状态的线粒体蛋白复合物的结构信息，酵母双杂交和免疫沉淀(IP)已规模化研究蛋白质相互作用信息的成熟工具。传统技术已成功实现高分辨的蛋白结构解析，蛋白质复合物相互作用的高覆盖解析，但目前传统的方法在进行蛋白质构象和蛋白质相互作用分析前样品制备较为复杂，需纯化结晶获得纯度高的蛋白质复合物，或对细胞进行基因改造以高表达富集蛋白。综上因素，传统方法在活细胞中进行实时瞬时和动态蛋白质相互作用组的分析存在一定困难。
[0003]交联质谱法(XL本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种包裹有交联剂的转运载体，其特征在于：以聚丙交酯
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乙交酯与靶向基团键合或掺杂的聚丙交酯
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乙交酯
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聚乙二醇共混物作为载体骨架，以含有载体骨架和交联剂的溶液为原料，通过乳液蒸发或者纳米沉淀法制备成球，获得包裹有交联剂的载体；以亲脂性和强正电的多肽、或离域亲脂阳离子、或其他强正电化合物中的一种或二种以上为靶向线粒体的靶向基团，靶向基团通过物理包埋或化学键合的方式修饰于载体上；载体内包裹了用于蛋白质复合物分析的交联剂。2.如权利要求1所述的靶向载体，其特征在于：以蓖麻油聚氧乙烯醚为交联剂增溶解试剂，或交联剂直接溶解于载体骨架的溶解剂中；以二氯甲烷和/或者乙腈作为溶解载体骨架的溶解剂，混合形成载体制备的原料溶剂。3.如权利要求1所述的靶向载体，其特征在于：载体骨架共混物中聚丙交酯
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乙交酯为分子量5000
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100000的聚丙交酯
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乙交酯；聚丙交酯
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乙交酯中丙交酯与乙交酯的摩尔比为50：50到85：15；靶向基团键合或掺杂的聚丙交酯
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乙交酯
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聚乙二醇中聚丙交酯
‑
乙交酯为分子量5000
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100000的聚丙交酯
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乙交酯，聚乙二醇的分子量为2000
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30000，聚丙交酯
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乙交酯
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聚乙二醇中丙交酯
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乙交酯的摩尔比为50：50到85：15，靶向基团与聚丙交酯
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乙交酯
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聚乙二醇的质量比1：100
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100：1；载体骨架共混物中其中聚丙交酯
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乙交酯与靶向基团键合或掺杂的聚丙交酯
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乙交酯
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聚乙二醇质量比例为99％
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1％。4.如权利要求1所述的靶向载体，其特征在于：所述交联剂包括：其两侧基团均为可与蛋白上氨基反应的琥珀酰亚胺基团、卤代芳烃、亚胺酸酯；或均为可与蛋白上巯基反应的马来酰亚胺基团、2
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巯基吡啶、硫代磺酸盐、卤代乙酰基，吡啶基二硫化物；或均为可与蛋白上羧基反应的碳化二亚胺、异氰酸盐；或均为可与蛋白上糖链反应的酰肼基团；或均为可与蛋白质中的氨基酸残基发生反应的非特异反应基团的苯基叠氮基团、双吖丙啶；所述的交联剂其两侧基团分别为上述任一反应基团。5.如权利要求4所述的靶向载体，其特征在于：所述交联剂中连接两侧反应基团的交联臂为碳数目范围为1
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100碳氢链，交联剂的臂长提供了距离约束，使之交联在交联臂所覆盖的距离范围内的蛋白质氨基酸位点；其中交联臂上可接枝有富集基团，其中富集基团可为生物素；交联臂也可嵌入可切割位点，在一定条件下交联臂两端可以断开，其中一种可切割位点可为质谱条件下可切割的低能量切割键，嵌入含有可切割位点的基团可为天冬氨酸和脯氨酸间的肽键，固定电荷的硫离子，亚砜和尿素连接的丁酸酯中一种或二种以上，此切割键的断裂条件为这些低能量的切割键在二级碎裂时优先断开；其中一种可切割位点为化学条件下切割键，此切割键的断裂条件为如二硫键在还原剂存在下切割。6.如权利要求1所述的靶向载体，靶向基团包括：同时具有正电荷和亲脂性的氨基酸残基的以线粒体为靶点的肽，其中提供正电性的氨基酸残基为精氨酸(R)和/或赖氨酸(L),其中提供亲脂性的氨基酸残基为苯基丙氨酸(phenylalanine,F)和/或环己基丙氨酸(cyclohexylalanine,Fx)，多肽的氨基酸残基数量范围为2
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100；具体为SS
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31肽(D
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Arg
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Dmt
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Lys
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Phe
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NH2)，或离域亲脂阳离子，具体为三苯基膦(triphenylphosphine,TPP)和/或地喹氯铵(d...

【专利技术属性】
技术研发人员：张丽华，陈玉宛，杨开广，赵群，周雯，李欣蔚，赵丽丽，高航，张玮杰，赵宝锋，梁振，张玉奎，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：