一种用于酒醅微生物宏蛋白组学检测的蛋白提取方法技术

本发明专利技术属于白酒酒醅技术领域，公开了一种用于酒醅微生物宏蛋白组学检测的蛋白提取方法，称取酒醅样品，并加入酚抽提取液和蛋白酶抑制剂；冰上超声破碎；用玻棒去除谷壳；对溶液进行离心，用移液器吸取中层溶液，转移至新的离心管中；在两次转移得到的溶液混合中加入等体积的酚

【技术实现步骤摘要】
一种用于酒醅微生物宏蛋白组学检测的蛋白提取方法


[0001]本专利技术属于白酒酒醅
，尤其涉及一种用于酒醅微生物宏蛋白组学检测的蛋白提取方法。

技术介绍

[0002]中国白酒的酿造依赖酒醅(发酵中的粮谷)微生物的协同发酵。揭示酒醅微生物群落演替对白酒香味物质形成的影响是酿酒领域的研究热点和重点。但现阶段针对酒醅微生物的研究主要集中于宏基因组层面，宏蛋白组学研究进展相对缓慢。蛋白质是基因功能的最终执行者，宏蛋白组学的研究结果是对环境微生物群落活动的直接表征。酒醅微生物宏蛋白组学研究的匮乏阻碍对白酒发酵机理的深入认识。
[0003]微生物宏蛋白组学旨在从蛋白质水平揭示环境样品微生物的多样性及其生理功能。得益于质谱技术的快速发展，微生物宏蛋白组学被广泛应用于海洋、肠道和土壤等生态环境的研究中。然而由于环境样品的理化性质复杂多样，目前尚未形成统一的蛋白质提取方法。普遍情况下，环境样品须经液氮研磨预处理使其蛋白充分释放后才能获得较好的提取效果。但不同与普通的环境样品，白酒酒醅是由高粱、小麦和稻米等粮谷发酵形成的产物，其中混杂大量的粮谷蛋白，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于酒醅微生物宏蛋白组学检测的蛋白提取方法，其特征在于，所述用于酒醅微生物宏蛋白组学检测的蛋白提取方法，包括：步骤一，称取酒醅样品，放入灭菌离心管中；并向灭菌离心管中加入酚抽提取液和蛋白酶抑制剂，终浓度为1mM；步骤二，冰上超声破碎，超声结束后，用玻棒将上层漂浮的谷壳去除，同过程重复1次；谷壳去除完成后，对溶液进行离心；离心完成后，用移液器吸取中层溶液，转移至新的离心管中；同法重复1次，将两次转移的溶液混合；步骤三，在步骤二中两次转移得到的溶液混合中加入等体积的酚
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Tris
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HCl饱和溶液，并进行混均；对混合溶液进行离心，收集酚上层；再加入预冷0.1M醋酸铵
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甲醇溶液，过夜沉淀，离心，收集沉淀；步骤四，加入预冷甲醇进行清洗，轻微混合；并进行离心，收集沉淀，重复一次；以丙酮代替甲醇重复上述过程两遍，充分去除甲醇；去除甲醇完成后，收集沉淀；在常温下进行干燥，溶解于样品裂解液中，室温溶解一定时间；步骤五，将溶液在室温下进行离心，取上清，并再次离心取上清；上清即为样品的总蛋白溶液，进行蛋白浓度测定并分装后储存于一定温度下备用。2.如权利要求1所述用于酒醅微生物宏蛋白组学检测的蛋白提取方法，其特征在于，所述步骤一中，称取酒醅样品质量为1g。3.如权利要求1所述用于酒醅微生物宏蛋白组学检测的蛋白提取方法，其特征在于，所述步骤一中，灭菌离心管中加入酚抽提取液和蛋白酶抑制剂，使其终浓度为1mM，具体过程为：称取1g酒醅样品，放入灭菌离心管中；加入2mL酚抽提取液[蔗糖0.70mol/L、NaCl 0.01mol/L、EDTA
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2Na 0.04mol/L、二硫苏糖醇0.01mol/L、Tris
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HCl(pH6.8)0.13mol/L、Tris
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HCl(pH8.8)0.38mol/L]，加入蛋白酶抑制剂(苯甲基磺酰氟)使其终浓度为1mM。4.如权利要求1所述用于酒醅微生物宏蛋白组学检测的蛋白提取方法，其特征在于，所述步骤二中...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘茂柯，刘成元，田新惠，唐玉明，冯军，张涛，王思思，倪先林，郭小蛟，
申请(专利权)人：四川省农业科学院水稻高粱研究所，
类型：发明
国别省市：