基于细胞的用于测定肉毒杆菌毒素活性的方法技术

本发明专利技术涉及用于确定肉毒杆菌毒素活性的细胞和抗体，以及使用它们测定活性的方法。当前，在肉毒毒素效力的测量领域中，需要开发基于细胞的效力测定法(CBPA)来代替小鼠LD50生物测定法(mLD50)。本发明专利技术用于肉毒杆菌毒素活性测定的细胞和抗体是CBPA替代mLD50的细胞和抗体，与用于测定肉毒杆菌毒素活性的常规SiMa细胞相比，该细胞系具有明显更短的分裂时间并且对肉毒杆菌毒素的敏感性明显高于亲本细胞系，因此非常适合检测毒素以及确定基于细胞的肉毒杆菌毒素活性。使用本发明专利技术的细胞和抗体的CBPA测定可望成为一种高度可靠和可重复的基于细胞的肉毒杆菌毒素的效价测定方法。于细胞的肉毒杆菌毒素的效价测定方法。于细胞的肉毒杆菌毒素的效价测定方法。

【技术实现步骤摘要】
基于细胞的用于测定肉毒杆菌毒素活性的方法
[0001]本申请是申请日为2019年8月19日，申请号为CN 2019800908385、专利技术名称为“基于细胞的用于测定肉毒杆菌毒素活性的方法”的申请的分案申请。


[0002]本专利技术涉及用于确定肉毒杆菌毒素活性的细胞和抗体，以及使用它们确定活性的方法。

技术介绍

[0003]目前，小鼠LD
50
生物测定(mLD
50
)是一种普遍接受的用于检测食品，临床或环境样品中残余肉毒杆菌毒素(BoNT/A)的方法。特别地，制药行业使用mLD
50
作为标准分析方法来测量用于美容或临床应用的肉毒杆菌毒素滴度。然而，由于使用 mLD50的肉毒毒素滴度测定受到测试机构/设施和研究人员的高度影响，因此难以准确、可重复地定量肉毒毒素的生物学功效。因此，为了最大程度地减少实验中使用的动物的数量和痛苦并标准化测量肉毒毒素滴度的方法，举行了ZEBET会议以鼓励开发替代性的mLD50测量方法(Altern Lab Anim.2010 Aug；38(4):3本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种从亲代neuro
‑
2a细胞中克隆获得的细胞系(登录号：KCTC AC28106)，其中所述克隆细胞系具有同质细胞群；其中所述克隆细胞系包含对约25pM或更小浓度的BoNT/A引起的A型肉毒杆菌毒素(BoNT/A)中毒敏感的细胞，并且细胞相较于亲本neuro
‑
2a细胞对BoNT/A、BoNT/B、BoNT/C和BoNT/F表现出更高的敏感性，相较于亲本neuro
‑
2a细胞对5pM至200pM浓度的BoNT/D的敏感性相同，并且对10pM至400pM浓度的BoNT/E的无敏感性。2.如权利要求1所述的细胞系，其在至少第5代或更多传代数的细胞中表现出约0.1nM或更小的BoNT/A中毒。3.如权利要求1所述的细胞系，其在第15代细胞中表现出约0.1nM或更小的BoNT/A中毒。4.如权利要求1所述的细胞系，其用于测定肉毒杆菌毒素的活性或检测肉毒杆菌毒素。5.如权利要求1所述的细胞系，其为N2
‑
42F细胞系(登录号：KCTC 13712BP)。6.一种基于细胞的测定肉毒杆菌毒素活性的方法，包括以下步骤：(a)培养权利要求1至5中任一项所述的细胞系；(b)用肉毒杆菌毒素处理细胞系；和(c)通过特异性结合SNAP25
FL
或SNAP25
197
的抗体测定细胞系中的SNAP25
FL
或SNAP25
197
。7.如权利要求6所述的方法，其中所述细胞系在涂有聚
‑
D
‑
赖氨酸的固体基质中培养。8.如权利要求6所述的方法，其中所述肉毒杆菌毒素为肉毒杆菌毒素血清型A。9.如权利要求6所述的方法，其中测量SNAP25
FL
或SNAP25
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是用于测定由肉毒杆菌毒素引起的内源性神经分泌蛋白的裂解。10.一种基于细胞的检测肉毒杆菌毒素的方法，包括以下步骤：(a)培养权利要求1至5中任一项所述的细胞系；(b)用肉毒杆菌毒素处理细胞系；(c)通过特异性结合SNAP25
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的抗体测定细胞系中的SNAP25
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；和(d)当检测到抗体
‑
SNAP25
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复合物时，确定样品中存在肉毒杆菌毒素。11.如权利要求10所述的方法，其中所述细胞系在涂有聚
...

【专利技术属性】
技术研发人员：李治建，严智炫，V，
申请(专利权)人：秀杰股份公司，
类型：发明
国别省市：