一种人神经祖细胞分化方法及其在毒性测试中的应用技术

本发明专利技术属于细胞生物学技术领域，提出了一种人神经祖细胞分化方法及其在毒性测试中的应用，包括如下步骤：S1:使用预冷枪头吸取Matrigel，加入至预冷的Advanced DMEM/F12培养基稀释，制成Matrigel包被液，并将Matrigel包被液预冷；S2:将预冷Matrigel包被液转移至培养皿中，并放置于培养箱中静置，得Matrigel包被培养皿；S3:将融合度达到70

【技术实现步骤摘要】
一种人神经祖细胞分化方法及其在毒性测试中的应用


[0001]本专利技术属于细胞生物学
，具体涉及一种人神经祖细胞分化方法及其在毒性测试中的应用。

技术介绍

[0002]化学品安全涉及食品、环境和职业安全等领域，环境化学物污染、职业环境化学物超标、食品安全和环境相关健康问题等已成为目前社会经济发展的重大问题。传统化学品安全性评价以动物实验评价为主，具有花费高、时间长、种属差异以及动物福利等问题。动物替代试验方法应用是目前国际上化学品安全性评价的一种趋势和策略，可以减少实验动物使用、降低花费、缩短时间和提高评价效率等。目前已经有多个国家包括欧盟、美国、日本和中国等建立各自的替代实验方法研究中心。已有大量的替代方法经过开发验证，极大的减少了动物的使用和评价速度。
[0003]神经发育毒性评价由于其复杂性和特殊性，目前尚未有好的替代方法进行评价。传统的神经发育毒性需要涉及大量动物的使用，需要花费大量的成本和时间。美国环境保护署(OPPTS 870.630)和经济合作与发展组织(OECD TG 426)均有发布DNT研究指南，并且由美国环保本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人神经祖细胞分化方法，其特征在于，包括如下步骤：S1:使用预冷枪头将Matrigel吸取，加入至预冷的Advanced DMEM/F12培养基稀释，制成Matrigel包被液，并将Matrigel包被液预冷；S2:将预冷Matrigel包被液转移至培养皿中，并放置于培养箱中静置，得Matrigel包被培养皿；S3:将融合度达到70
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80％的hNPC细胞，使用PBS洗涤，再使用Accutase消化酶进行消化，之后采用PBS冲洗转入离心管中；S4:将离心管中的细胞离心去上清，采用NPC维持培养基并加入ROCK inhibitor重悬细胞后，接种于Matrigel包被培养皿中进行培养；S5:第二天吸弃Matrigel包被培养皿中液体，换新鲜的神经元分化培养基进行培养，每两天换液一次，培养至第七天出现神经元特征。2.如权利要求1所述的人神经祖细胞分化方法，其特征在于，NPC维持培养基的制备方法如下：步骤一：将Advanced DMEM/F12培养基与Neurobasal培养基按照体积比为1:1进行混合，得混合培养基；步骤二：向混合培养基内添加1％的胎牛血清、0.4μg/mL皮质醇、B27添加剂、20ng/mL表皮生长因子、20ng/mL成纤维生长因子、100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素，制得成品。3.如权利要求2所述的人神经祖细胞分化方法，其特征在于，神经元分化培养基的制备方法如下：步骤A、Advanced DMEM/F12培养基与Neurobasal培养基按照体积比为1:1进行混合，得混合培养物；步骤B、向混合培养物内添加2％的胎牛血清、B27 plus添加剂，40ng/mL成纤维生长因子、2mmol/L谷胱甘肽、200μmol/L维生素C、100U/mL青霉素和100...

【专利技术属性】
技术研发人员：章征保，杨颖，李庆，黄志彪，罗振奎，陈美芬，张秋欢，梁扬盛，彭宝莹，
申请(专利权)人：广东省疾病预防控制中心，
类型：发明
国别省市：