一种分析灵敏度高的乙肝病毒核酸检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种分析灵敏度高的乙肝病毒核酸检测试剂盒，涉及生物检测技术领域。所述检测试剂盒包含PCR反应液、内标、PCR酶混合液、定量参考品A、定量参考品B、定量参考品C、定量参考品D、阳性对照品、阴性对照品。所述PCR反应液中加入了海藻糖、甘油等PCR增强剂和酶稳定剂，提高试剂的分析灵敏度。本发明专利技术乙肝病毒核酸检测试剂盒，显著改善了试剂盒的分析灵敏度。度。

【技术实现步骤摘要】
一种分析灵敏度高的乙肝病毒核酸检测试剂盒


[0001]本专利技术涉及生物检测
，具体涉及一种分析灵敏度高的乙肝病毒核酸检测试剂盒。

技术介绍

[0002]聚合酶链式反应(PCR，Polymerase chain reaction)是利用DNA双链复制的原理，在生物体外大量扩增特定DNA片段的分子生物学技术，其特点是可以以微量的DNA为模板，快速扩增得到大量拷贝。
[0003]实时荧光定量PCR(real
‑
time PCR)是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。 Real
‑
time PCR是在PCR扩增过程中，通过荧光信号，对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期，模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，所以成为定量的依据。
[0004]TaqMan荧光探针是PCR扩增时，在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5'－3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与 PCR产物形成完全同步。
[0005]目前，进行PCR扩增反应一般需要较高的样本浓度，而样本浓度较低时需要重复进行检测或使用精确度更高的数字PCR方法。数字PCR试剂耗材本身价格较高，因此，加大了使用成本。于是，提高荧光探针法的分析灵敏度，控制最低检出量，能够极大的节约成本。

技术实现思路

[0006]本专利技术提供了一种分析灵敏度高的乙肝病毒核酸检测试剂盒。本专利技术检测试剂盒可以提高试剂的分析灵敏度。
[0007]为实现上述目的，本专利技术的乙肝病毒核酸检测试剂盒是通过以下技术方案实现的：
[0008]本专利技术提供一种分析灵敏度高的乙肝病毒核酸检测试剂盒，包括PCR 反应液、内标、PCR酶混合液、定量参考品A、定量参考品B、定量参考品C、定量参考品D、阳性对照品、阴性对照品，其中PCR反应液的成分和含量如下：
[0009][0010]进一步的，所述PCR酶混合液的成分和含量如下：
[0011][0012]所述阴性对照品为不含乙肝病毒靶基因序列的病毒样颗粒。
[0013]所述阳性对照品为含有乙肝病毒靶基因序列的阳性病毒样颗粒。
[0014]所述内标为含如下序列的质粒： cactcacagttaatgagaaaagaagattgcaattgattatgcctgccaggttttatccaaaggttaccaaatatttac cattggataagggtattaaaccttattatccagaacatctagttaatcattacttccaaactaga
[0015]所述定量参考品A、定量参考品B、定量参考品C、定量参考品D为含有乙肝病毒靶基因序列的阳性病毒样颗粒，其序列为 tgttaatttggaagatccagcgtctagagacctagtagtcagttatgtcaacactaatatgggcctaaagttcaggc aactcttgtggtttcacatttcttgtctcacttttggaagagaaacagttatagagtatttggtgtctttcggagtgtgga ttcgcactcctccagc。
[0016]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0017]本专利技术通过在PCR反应液中添加海藻糖、甘油等组分，起到PCR增强剂和酶保护剂的作用，能够提高试剂的分析灵敏度。
具体实施方式
[0018]为了使本专利技术实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面将结合具体实施例进行详细描述。
[0019]对照例：市面上某知名厂家的乙肝病毒核酸检测试剂盒，其组成成分包括PCR反应液、内标、PCR酶混合液、定量参考品A、定量参考品B、定量参考品C、定量参考品D、阳性对照品、阴性对照品。
[0020]阴性对照品：不含乙肝病毒靶基因序列的病毒样颗粒。
[0021]阳性对照品：含有乙肝病毒靶基因序列的阳性病毒样颗粒。
[0022]实施例1：
[0023]本实施例的乙肝病毒核酸检测试剂盒PCR反应液、内标、PCR酶混合液、定量参考品A、定量参考品B、定量参考品C、定量参考品D、阳性对照品、阴性对照品，其中：
[0024]PCR反应液包含如下组分：
[0025][0026]PCR酶混合液包括：
[0027][0028]本实施例的检测方法：
[0029]使用荧光定量PCR仪(ABI7500)进行检测，检测方法为荧光探针法，具体为：试剂复溶，分装到8连管中，从临床样本中提取DNA，分别加入到上述分装好的试剂中，进行检测。
[0030]实施例2：
[0031]本实施例的乙肝病毒核酸检测试剂盒PCR反应液、内标、PCR酶混合液、定量参考品A、定量参考品B、定量参考品C、定量参考品D、阳性对照品、阴性对照品，其中：
[0032]PCR反应液包含如下组分：
[0033][0034]PCR酶混合液包括：
[0035][0036][0037]检测方法同实施例1的检测方法。
[0038]实施例3：
[0039]本实施例的乙肝病毒核酸检测试剂盒PCR反应液、内标、PCR酶混合液、定量参考品A、定量参考品B、定量参考品C、定量参考品D、阳性对照品、阴性对照品，其中：
[0040]PCR反应液包含如下组分：
[0041][0042]PCR酶混合液包括：
[0043][0044]检测方法同实施例1的检测方法。
[0045]分析灵敏度试验：
[0046]在实验前需先将所有试剂室温放置，待其温度平衡至室温，取对照组试剂震荡混匀，取对照例、实施例1、实施例2和实施例3试剂震荡混匀，分装到8连管中，从临床样本中提
取DNA，分别加入到上述分装好的实施例1、实施例2和实施例3和对照例试剂中。
[0047]取国家认可的灵敏度参考品(1000IU/mL)，然后使用阴性血清按照 1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64的比例稀释，形成一系列的浓度梯度。每个浓度梯度重复检测20次，以满足95％阳性检出率的最低浓度水平作为估计检出限。具体检测结果如下：
[0048]表1对照组试剂检测结果
[0049][0050]表2实施例1试剂检测结果
[0051][0052][0053]表3实施例2试剂检测结果
[0054][0055][0056]表4实施例3试剂检测结果
[0057][0058]由实验结果可以得出，实施例2的PCR乙肝病毒核酸检测试本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分析灵敏度高的乙肝病毒核酸检测试剂盒，其特征在于，包括PCR反应液、内标、PCR酶混合液、定量参考品A、定量参考品B、定量参考品C、定量参考品D、阳性对照品、阴性对照品，其中PCR反应液的成分和含量如下：PCR酶混合液的成分和含量如下：2.根据权利要求书1所述的一种分析灵敏度高的乙肝病毒核酸检测试剂盒，其特征在于，阴性对照品为不含乙肝病毒靶基因序列的病毒样颗粒。3.根据权利要求书1所述的一种分析灵敏度高的乙肝病毒核酸检测试剂盒，其特征在于，所述阳性对照品为含有乙肝病毒靶基因序列的阳性病毒样颗粒。4.根据权利要求书1所述的一种分析灵敏度高的乙肝病毒核酸检测试剂盒，其特征在于，所述内标为含如下序列的质粒：cactcacagttaatgagaaaagaagattgcaattgattatgcctgccaggtttt...

【专利技术属性】
技术研发人员：李淑君，谢清华，胡晓飞，董雯，
申请(专利权)人：山东博弘基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：