一种抑菌剂对青钱柳茎段组织培养萌发诱导的方法技术

本发明专利技术公开了一种抑菌剂对青钱柳茎段组织培养萌发诱导的方法，包括以下步骤青钱柳茎段的获取、茎段预处理、茎段消毒、不同采集月份对茎段的萌发诱导、植物生长调节剂对茎段的萌发诱导、植菌清对茎段抑菌效果及萌发诱导的影响；钱柳茎段的获取试验材料来自贵州省生物研究所苗圃地5年生青钱青柳幼嫩茎段；茎段预处理采集上述不同月份生长茂盛、无病虫害的茎段（弃掉顶芽，留顶芽以下2

【技术实现步骤摘要】
一种抑菌剂对青钱柳茎段组织培养萌发诱导的方法


[0001]本专利技术涉及青钱柳植物组织培养
，具体为一种抑菌剂对青钱柳茎段组织培养萌发诱导的方法。

技术介绍

[0002]青钱柳(Cyclocarya paliurus)，为胡桃科(Juglandaceae) 青钱柳属(Cyclocarya)的落叶乔木，又名一串钱、摇钱树、麻柳、青钱李，树干挺拔通直，是我国重点保护的特有珍稀濒危植物之一，主要分布在江西、浙江、湖南、贵州、福建、四川等省份的山区。因其树形似柳，果实似铜钱，色青而下垂，且富含多糖、黄酮类化合物、齐墩果酸、萜类化合物、有机酸、生物碱以及甾醇等多种有效成分，具有降血糖、降血压、降血脂、增加机体免疫力、抗氧化、抗衰老、抗肿瘤等作用，还被制成保健茶，深受广大消费者认可，是集药用、保健、材用、观赏等多种功效于一体，具有很高的开发应用价值，青钱柳野生资源稀少，其种子败育严重，空壳率高，种壳坚硬厚实，深休眠特性，种子播种育苗时间长且萌发率仅为0.1％
‑
0.5％，加上青钱柳扦插育苗普遍存在插穗死亡率高、生长缓慢、生根难、生根率不高等问题，存在明显繁育障碍。这些缺点严重限制了青钱柳的育苗进程和产业化推广，制约了青钱柳的开发利用。
[0003]组织培养技术具有繁殖速度快、不受季节和环境条件限制等优点, 较其他繁殖方法是一种更加高效的繁殖方法，它不仅可以解决种子萌发困难、萌发率低及优良特性保持等的诸多问题，而且可以克服扦插繁殖速度慢、难生根、繁殖率低的缺点，是快速繁殖优良植物品种的一条重要途径，具有广阔的商业化前景。目前，前人开展了大量关于青钱柳组织培养技术的研究，并获得了再生植株，但仍存在茎段消毒困难、褐化现象严重、萌发率、增殖率、愈伤组织分化率、生根率低及苗木质量差等问题。
[0004]因此，本专利技术在前人研究的基础上，以青钱柳幼嫩茎段为外植体，继续优化消毒方法、基本培养基成分及植物生长调节剂，并探讨植菌素添加至培养基中的方式，通过降低茎段感染率和提高萌发率，为青钱柳扩繁、种质资源保存和产业化生产等研究提供技术支撑。

技术实现思路

[0005]本专利技术要解决的技术问题是克服现有的缺陷，提供一种抑菌剂对青钱柳茎段组织培养萌发诱导的方法，有助于降低茎段污染率，提高茎段萌发率高，为后续青钱柳侧芽增殖、扩繁体系的建立和种质资源保存等研究提供技术基础，可以有效解决
技术介绍
中的问题。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种抑菌剂对青钱柳茎段组织培养萌发诱导的方法，包括以下步骤青钱柳茎段的获取、茎段预处理、茎段消毒、不同采集月份对茎段的萌发诱导、植物生长调节剂对茎段的萌发诱导、植菌清对茎段抑菌效果及萌发诱导的影响；
[0007](1)青钱柳茎段的获取：试验材料来自贵州省生物研究所苗圃地5年生青钱柳幼嫩
茎段；
[0008](2)茎段预处理：采集步骤(1)中生长茂盛、无病虫害的茎段 (弃掉顶芽，留顶芽以下2
‑
5节段)，每节剪成长约10cm，留一腋芽，去掉叶片，浸泡在1000倍50％可湿性多菌灵粉剂溶液中置于磁力搅拌器上搅拌10分钟，用软毛牙刷和清洁剂刷洗茎段上的杂质，然后转移至自来水下流水冲洗10分钟；
[0009](3)茎段消毒：将步骤(2)中外植体转移至超净工作台上，经 75％乙醇处理0
‑
30秒，0.2％HgCl2处理2
‑
12分钟，2％NaClO处理2
‑
6 分钟，无菌水清洗5遍备用；
[0010](4)不同采集月份对茎段的萌发诱导：采取3月、4月、5月、 6月和7月的幼嫩茎段作为外植体，经步骤(2)、(3)处理后，接种至1/2MS基本培养基中，培养基中添加BA(0.5
‑
2.0mg/L)，IBA (0.1
‑
0.2mg/L)，琼脂(6.0g/L)，蔗糖(30.0g/L)，谷氨酰胺(0.5 g/L)，培养20
‑
30天；
[0011](5)植物生长调节剂对茎段的萌发诱导：采集4
‑
5月幼嫩茎段作为外植体，经步骤(2)、处理后，接种至1/2MS基本培养基中，培养基中添加BA(0.5
‑
2.0mg/L)，KT(0
‑
2.0mg/L)，TDZ(0
‑
0.5mg/L)， IBA(0.1
‑
0.5mg/L)，NAA(0.1
‑
0.5mg/L)，2,4
‑
D(0.1
‑
0.5mg/L)， GA3(0
‑
0.5mg/L)进行不同组合，培养20
‑
30天；
[0012](6)植菌清对茎段抑菌效果及萌发诱导的影响：以7月的幼嫩茎段为外植体，经75％乙醇处理30秒，然后0.2％HgCl2处理10分钟，无菌水清洗5遍，剪成长约5cm，每节留一侧芽，接种至1/2MS基本培养基中，培养基添加BA(0.5mg/L)、IBA(0.1mg/L)和不同浓度植菌清的添加方式，具体操作如下：
[0013]①
植菌清倒在培养基表面：茎段平放至培养基中，再向培养基中分别加入5ml浓度为1ml/L、2ml/L、3ml/L植菌清，以覆盖茎段一半为宜；
[0014]②
植菌清添加在培养基中：茎段浸泡在2ml植菌清溶液中10秒，取出斜插至培养基中，培养基中分别添加1ml/L、2ml/L、3ml/L 植菌清，培养20
‑
30天，统计茎段污染率和萌发率。
[0015]还包括步骤(4)、步骤(5)和步骤(6)培养基中均添加蔗糖(30 g/L)、琼脂(6g/L)，谷氨酰胺(0.5g/L)，聚乙烯吡咯烷酮PVP(0.25 g/L)，培养基灭菌(121℃，20分钟)前pH值调节为5.90
±
0.1，培养条件为25
±
2℃，光照条件2000
‑
2500Lux，16h/d。
[0016]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本萌发诱导的方法，具有以下好处：
[0017]1、5月幼嫩茎段是青钱柳茎段萌发诱导适宜的外植体；幼嫩茎段经预处理后，经75％乙醇30秒，0.2％HgCl
2 10分钟处理较其他组，茎段污染率较低为34.8％，萌发率较高71％；幼嫩茎段接种至1/2MS 基本培养基、BA(0.5mg/L)，IBA(0.1mg/L)，蔗糖(30g/L)，琼脂(6g/L)，谷氨酰胺(0.5g/L)，PVP(0.25g/L)其萌发率最高为92.6％，且能有效控制茎段的褐化。
[0018]2、茎段平放在培养基上，加入5ml浓度为2ml/L的植菌清溶液以覆盖茎段一半，此方法能显著降低茎段感染率，萌发率可达90％以上。
[0019]3、此方法较其他繁殖方法具有培育周期短、条件可控性强、茎段感染率低和茎段萌发率高等优势，为青钱柳优良性状保留、扩繁技术研究和推广等提本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抑菌剂对青钱柳茎段组织培养萌发诱导的方法，其特征在于：包括以下步骤青钱柳茎段的获取、茎段预处理、茎段消毒、不同采集月份对茎段的萌发诱导、植物生长调节剂对茎段的萌发诱导、植菌清对茎段抑菌效果及萌发诱导的影响；（1）青钱柳茎段的获取：试验材料来自贵州省生物研究所苗圃地5年生青钱柳幼嫩茎段；（2）茎段预处理：采集步骤（1）中生长茂盛、无病虫害的茎段（弃掉顶芽，留顶芽以下2
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5节段），每节剪成长约10 cm，留一腋芽，去掉叶片，浸泡在1000倍50%可湿性多菌灵粉剂溶液中置于磁力搅拌器上搅拌10分钟，用软毛牙刷和清洁剂刷洗茎段上的杂质，然后转移至自来水下流水冲洗10分钟；（3）茎段消毒：将步骤（2）中外植体转移至超净工作台上，经75%乙醇处理0
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30秒，0.2% HgCl2处理2
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12分钟，2% NaClO处理2
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6分钟，无菌水清洗5遍备用；（4）不同采集月份对茎段的萌发诱导：采取3月、4月、5月、6月和7月的幼嫩茎段作为外植体，经步骤（2）、（3）处理后，接种至1/2 MS基本培养基中，培养基中添加BA（0.5
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2.0 mg/L），IBA（0.1
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0.2 mg/L），琼脂（6.0 g/L），蔗糖（30.0 g/L），谷氨酰胺（0.5 g/L），培养20
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30天；（5）植物生长调节剂对茎段的萌发诱导：采集4
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5月幼嫩茎段作为外植体，经步骤（2）、处理后，接种至1/2 MS基本培养基中，培养基中添加BA（0.5
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2.0 mg/L），KT（0
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2.0 mg/L），TDZ（0
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【专利技术属性】
技术研发人员：刘盈盈，吴高殷，张珍明，罗文敏，牟桂婷，吴先亮，
申请(专利权)人：贵州省生物研究所，
类型：发明
国别省市：