一种百子莲根尖的愈伤组织诱导及增殖的方法技术

本发明专利技术公开了一种百子莲根尖的愈伤组织诱导及增殖的方法，通过以百子莲无菌苗幼根的根尖为外植体，使用含PIC、KT、NAA的MS培养基诱导愈伤组织，解决了组织培养时间受限的问题，实现了80％～100％的高诱导率；并通过含6

【技术实现步骤摘要】
一种百子莲根尖的愈伤组织诱导及增殖的方法


[0001]本专利技术涉及一种百子莲根尖的愈伤组织诱导及增殖的方法。

技术介绍

[0002]早花百子莲(Agapanthus praecox，以下简称百子莲)，是石蒜科(Amaryllidaceae)百子莲属(Agapanthus)的多年生草本植物，原产非洲南部区域，喜阳光丰沛、气候温和的环境。百子莲根系发达，肉质根茎强壮，可以有效地防风固沙、减少水土流失和降低环境污染，有着重要的生态功能。近年来，百子莲作为新优花卉资源在我国东部和南部的辽阔疆域大幅推广应用，在花境、花海、公园绿地、屋顶花园和道路隔离带等各类园林中大放异彩，有着较大的发展潜力和应用空间。
[0003]百子莲于2002年引入我国亚热带地区后，因受积温影响不易结实，其分株繁殖速度慢且长势不一致。组织培养成苗时间短、繁殖速率快，广泛应用在百子莲优良性状保持、优质种苗高效生产、诱变育种和转基因遗传改良等领域，是商业化水平最高的植物离体繁殖方法之一。目前百子莲组织培养主要分为器官发生和体细胞胚胎发生两种途径，每种途径又分为直接发生和间接发生两种方式。愈伤组织的诱导是间接器官发生和间接体胚发生的关键环节。因此，快速获得状态良好、活力旺盛的愈伤组织对百子莲组织培养具有重要意义。
[0004]目前百子莲多用小花梗进行愈伤组织诱导，该外植体消毒操作简单，脱分化容易，但采集时间严重受花期制约，每年仅6月份前后的百子莲花蕾期可以取材，外植体取材周期较短，且花苞开裂后会大大增加灭菌的难度，降低诱导效率。
[0005]中国专利申请号201910060531.2公开一种以百子莲叶片作为外植体诱导胚性细胞的方法，然而百子莲叶片作为外植体也可以诱导愈伤组织，取材相对方便，但是分化程度较高，含有的酚类物质较多也易导致褐化，增加组培难度。而单子叶植物花卉百子莲具有根系发达这一特点，以无菌苗根尖为外植体进行愈伤组织诱导，脱分化容易并可实现随时取材，能够克服小花梗采集受花期制约及叶片容易污染褐化等瓶颈问题，有效扩充了外植体来源，大大提高了愈伤组织诱导效率。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是克服现有组织培养外植体来源受限的难题，提供一种以百子莲根尖作为外植体诱导、增殖愈伤组织的方法。本专利技术以根尖作为外植体，能够突破原有以小花梗及叶片作为外植体，其采集时间有限、诱导率低的局限性。本专利技术进一步优化了激素配比，将纳米材料GQDs应用于植物组培中，提高增殖速率，拓宽了纳米材料在植物组织培养中的应用。
[0007]本专利技术通过以下技术方案实现研究目的：
[0008]本专利技术提供了一种百子莲根尖的愈伤组织诱导及增殖的方法，包括如下步骤：
[0009]A、无菌苗的获得：取百子莲种子进行消毒处理后，接种到种子萌发培养基，萌发后
转入生根培养基，获得无菌苗；
[0010]B、愈伤组织的诱导：取步骤A获得的无菌苗的根尖的小段作为外植体，将外植体接种于愈伤组织诱导培养基中诱导培养；
[0011]C、愈伤组织的增殖：取经步骤B诱导后获得的愈伤组织放置在增殖培养基中增殖培养，获得愈伤组织块。
[0012]所述增殖培养基的组分包括：2.17～4.33g
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L
‑1MS固体培养基、2.0～3.0％(w/v)蔗糖、0.5～1.5mg
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L
‑16
‑
BA、0.05～0.25mg
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L
‑1NAA、0.05～0.4g
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L
‑1GQDs、0.2～0.3％(w/v)植物凝胶，pH为5.8～6。
[0013]优选的，所述增殖培养基的配方为：4.33g
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L
‑1MS固体培养基、3.0％(w/v)蔗糖、1.0mg
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‑16
‑
BA、0.1mg
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‑1NAA、0.05g
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L
‑1GQDs、0.3％(w/v)植物凝胶，pH为5.8。
[0014]步骤A中，消毒方法具体为，无菌水清洗，然后无菌水浸泡20～30min，75％(v/v)酒精表面杀菌50～90s，之后无菌水冲洗，之后采用NaClO和纳米银水溶液处理，再用无菌水冲洗4～6次。
[0015]所述NaClO和纳米银水溶液处理的步骤具体为，10～20％NaClO表面杀菌10～20min，无菌水冲洗，再用20～60mg
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L
‑1纳米银水溶液处理10～20min，无菌水冲洗。
[0016]所述种子萌发培养基的组分包括：2.17～4.33g
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L
‑1MS固体培养基、2.0～3.0％(w/v)蔗糖、0.6～1.0％(w/v)琼脂，所述培养基pH为5.8～6。
[0017]优选的，所述种子萌发培养基的组分包括：4.33g
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L
‑1MS固体培养基、3.0％(w/v)蔗糖、0.8％(w/v)琼脂，所述培养基pH为5.8。
[0018]所述生根培养基的组分为：2.17～4.33g
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L
‑1MS固体培养基、2.0～3.0％(w/v)蔗糖、0.1～0.2mg
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‑1IBA、0.5～0.8％(w/v)琼脂，pH为5.8～6。
[0019]优选的，所述生根培养基的组分为：2.17g
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L
‑1MS固体培养基、3.0％(w/v)蔗糖、0.15mg
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‑1IBA、0.5％(w/v)琼脂，pH为5.8。
[0020]所述愈伤组织诱导培养基的组分包括：2.17～4.33g
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L
‑1MS固体培养基、2.0～3.0％(w/v)蔗糖、2.0～3.0mg
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L
‑1PIC、1.0～1.5mg
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L
‑1KT、0.05～0.1mg
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L
‑1NAA、0.2～0.4％(w/v)植物凝胶，pH为5.8～6。
[0021]进一步，所述愈伤组织诱导培养基配方为：4.33g
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L
‑1MS固体培养基、3.0％(w/v)蔗糖、2.0mg
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L
‑1PIC、1.5mg
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‑1KT、0.1mg
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L
‑1NAA、0.3％(w/v)植物凝胶，pH为5.8。
[0022]所述步骤A中，所述百子莲的种子为当年采收的千粒重6.60～6.80g的饱满干燥种子。干瘪潮湿的种子不易萌发且内生菌复杂，较难获得无菌苗；所述百子莲为2～3年生百子莲。
[0023]所述步骤B中，外植体为从距离根尖1.0～1.5cm处垂直横切获得的组织块。
[0024]种子萌发和生根的条件为：温度23～27℃，相对湿度65～85本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种百子莲根尖的愈伤组织诱导及增殖的方法，其特征在于，包括如下步骤：A、无菌苗的获得：取百子莲种子进行消毒处理后，接种到种子萌发培养基，萌发后转入生根培养基，获得无菌苗；B、愈伤组织的诱导：取步骤A获得的无菌苗的根尖的小段作为外植体，将外植体接种于愈伤组织诱导培养基中诱导培养；C、愈伤组织的增殖：取经步骤B诱导后获得的愈伤组织放置在增殖培养基中增殖培养，获得愈伤组织块。2.根据权利要求1所述的愈伤组织诱导及增殖的方法，其特征在于，增殖培养基的组分包括：2.17～4.33g
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‑1MS固体培养基、2.0～3.0％(w/v)蔗糖、0.5～1.5mg
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‑16
‑
BA、0.05～0.25mg
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‑1NAA、0.05～0.4g
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‑1GQDs、0.2～0.3％(w/v)植物凝胶，pH为5.8～6。3.根据权利要求1所述的愈伤组织诱导及增殖的方法，其特征在于，步骤A中，消毒方法具体为无菌水清洗，然后无菌水浸泡20～30min，75％(v/v)酒精表面杀菌50～90s，之后无菌水冲洗，之后采用NaClO和纳米银水溶液处理，再用无菌水冲洗4～6次。4.根据权利要求3所述的愈伤组织诱导及增殖的方法，其特征在于，所述NaClO和纳米银水溶液处理的步骤具体为，10～20％NaClO表面杀菌10～20min，无菌水冲洗，再用20～60mg
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‑1纳米银水溶液处理10～20min，无菌水冲洗。5.根据权利要求1所述的愈伤组织诱导及增殖的方法，其特征在于，所述种子萌发培养基...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭祥鑫，申晓辉，陈冠群，唐倩雯，李清韵，申瑞雪，孙华乐，
申请(专利权)人：上海上房园林植物研究所有限公司，
类型：发明
国别省市：