工程化免疫细胞、纳米凝胶及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了工程化免疫细胞、纳米凝胶及其制备方法和应用，该制备方法将PD

【技术实现步骤摘要】
工程化免疫细胞、纳米凝胶及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及工程化免疫细胞、纳米凝胶及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]从活体组织中分离出的肿瘤浸润T细胞或是基因改造后的患者外周血淋巴细胞能分别通过T细胞受体(TCR)或嵌合抗原受体(CAR)特异性识别肿瘤抗原。在过继细胞疗法(ACT)中，这些肿瘤特异性细胞在体外激活、增殖后被回输至患者体内，对癌细胞进行杀伤。目前，以CAR
‑
T疗法为代表的ACT在某些血液癌症患者中取得了喜人的临床疗效，但其对实体瘤的疗效依旧不尽如人意。其中，免疫抑制的肿瘤微环境(TME)是ACT治疗实体瘤的主要挑战之一。
[0003]在TME中，肿瘤细胞利用各种机制如分泌可溶性抑制因子或直接物理接触来抑制T细胞的功能。最有效的方法之一是上调肿瘤细胞自身程序性细胞死亡配体1(PD
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L1)的表达。PD
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L1与细胞毒性T淋巴细胞(CTL)所表达的程序性细胞死亡受体1(PD
‑
1)结合，从而“劫持”免疫检查点通路，抑制T细胞的抗肿瘤功能。免疫检查点抑制剂可以逆转来自肿瘤细胞的免疫抑制，从而提高外源性ACT细胞和内源性肿瘤特异性CTL的治疗效果。
[0004]针对PD
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1或PD
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L1的单克隆抗体(aPD1和aPDL1)目前正被广泛地运用在临床研究中，以期增强内源性CTL的功能。虽然免疫检查点抑制剂在一部分病人中取得了持久的抗肿瘤效果，但患者对ICI的整体反应率较低，患者的总体生存率仍然不高。对于外源性ACT T细胞而言，尽管免疫检查点抑制剂可以有效延长其功能，但是临床治疗效果一般。此外，大剂量或长时间使用免疫检查点抑制剂可能导致全身性毒副反应，引起胃肠道、内分泌腺、皮肤和肝脏等器官系统的严重不良反应。一些患者甚至在长期用药后对免疫检查点抑制剂产生耐药性或并发自身免疫性疾病。
[0005]有研究尝试通过基因工程使CAR
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T细胞自分泌免疫检查点抑制剂，或将T细胞PD
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1受体的胞内抑制域替换为增殖增强域，来提高CAR
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T细胞的治疗效果。然而，CAR
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T细胞可能会在患者体内不受控制的增殖，产生安全隐患。
[0006]生物材料已被用于增加TME中免疫检查点抑制剂的局部浓度，提高治疗效果，同时减少非肿瘤部位的不良副作用。以PD
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1单抗为代表的免疫检查点抑制剂可以通过不同的递送平台，以“货物”的形式运送到TME或肿瘤附近。此外，免疫检查点抑制剂还可以充当配体用于增强纳米粒的靶向性，作为运载工具的重要元件或作为联合治疗的组成部分。然而，这些方法主要是增强内源性T细胞的功能而不是提高ACT T细胞的抗肿瘤功效。此外，免疫检查点抑制剂从这些递送平台中释放出来的机制和ACT T细胞的激活和功能没有关联性，不能在T细胞最需要药物支持的时间和部位发挥作用。
[0007]最近，利用T细胞作为药物载体引起了人们的兴趣。当ACT T细胞浸润到肿瘤组织中时，偶联在T细胞表面的纳米颗粒也可以进入TME。这种方法使辅助药物可以和ACT T细胞时空共存，增加药物的有效剂量并增强T细胞的抗肿瘤功能。免疫调节药物如细胞因子白介素15和小分子药物已被偶联到T细胞表面，并在临床前研究中改善了疗效。

技术实现思路

[0008]在一个方面，本专利技术提供了一种纳米凝胶的制备方法，其特征是，包括如下步骤：
[0009]1)、配置连接剂溶液；
[0010]2)、向单抗溶液中加入步骤1)所述的连接剂溶液进行混合反应，得到纳米凝胶。
[0011]在一些实施方式中，所述单抗包括PD
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1单抗、CTLA
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4单抗、TNFα单抗。
[0012]在一些实施方式中，所述连接剂包括DTSSP或两端带有能够与抗体反应的化学官能团的分子。
[0013]在一些实施方式中，所述单抗和所述连接剂的摩尔比为(1：25～1：200)；反应时间为1～2小时。
[0014]在一些实施方式中，还包括步骤3)，向步骤2)得到的纳米凝胶中加入DBCO
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PEG
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NHS溶液，并在摇床上进行反应，得到DBCO
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aPD1
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NGs。
[0015]在一些实施方式中，还包括步骤3)，向步骤2)得到的纳米凝胶中加入DSPE
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PEG
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NHS溶液，并在摇床上进行反应，得到DSPE
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aPD1
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NGs。
[0016]在另一个方面，本专利技术还提供了上述所述的纳米凝胶的制备方法所制备的纳米凝胶。
[0017]在另一个方面，本专利技术还提供了一种工程化免疫细胞，使上述所述的DBCO
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aPD1
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NGs与叠氮化物标记的工程化免疫细胞通过点击化学反应相结合，使纳米凝胶锚点在工程化免疫细胞表面。
[0018]在一些实施方式中，所述工程化免疫细胞由以下方法制备而成：
[0019]1)、配置DSPE
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PEG
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N3溶液；
[0020]2)、向工程化免疫细胞重悬液加入至步骤1)所述的DSPE
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PEG
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N3溶液中进行混合反应，得到表面连有DSPE
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PEG
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N3的工程化免疫细胞；
[0021]3)、将表面连有DSPE
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PEG
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N3的工程化免疫细胞重悬于培养基中，同时向培养基中加入所述DBCO
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aPD1
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NGs进行孵育，待孵育结束后，收集表面结合有DBCO
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aPD1
‑
NGs的工程化免疫细胞。
[0022]在另一个方面，本专利技术还提供了一种工程化免疫细胞，使上述所述的DSPE
‑
aPD1
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NGs与工程化免疫细胞共孵育相结合，使纳米凝胶锚点在工程化免疫细胞表面。
[0023]在一些实施方式中，所述工程化免疫细胞由以下方法制备而成：
[0024]1)、工程化免疫细胞重悬在培养基中；
[0025]2)、向步骤1)的培养基中加入所述的DSPE
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aPD1
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NGs进行孵育，待孵育结束后，收集表面结合有DSPE
‑
aPD1
‑
NGs的工程化免疫细胞。
[0026]在一些实施方式中，所述工程化免疫细胞包括T细胞、NK细胞或巨噬细胞。
[0027]在另一个方面，本专利技术还提供了抑制剂，包括上述所述的工程化免疫细胞。
[0028]在另一个方面，本专利技术还提供了药物组合物，包括上述所述的工程化免疫细胞和药学本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种纳米凝胶的制备方法，其特征是，包括如下步骤：1)、配置连接剂溶液；2)、向单抗溶液中加入步骤1)所述的连接剂溶液进行混合反应，得到纳米凝胶。2.权利要求1所述的纳米凝胶的制备方法，其特征是，所述单抗包括PD
‑
1单抗、CTLA
‑
4单抗、TNFα单抗。3.权利要求2所述的纳米凝胶的制备方法，其特征是，所述连接剂包括DTSSP或两端带有能够与抗体反应的化学官能团的分子。4.权利要求1所述的纳米凝胶的制备方法，其特征是，所述单抗和所述连接剂的摩尔比为(1：25～1：200)；反应时间为1～2小时。5.权利要求1～4任一项所述的纳米凝胶的制备方法，其特征是，还包括步骤3)，向步骤2)得到的纳米凝胶中加入DBCO
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PEG
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NHS溶液，并在摇床上进行反应，得到DBCO
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aPD1
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NGs。6.权利要求1～4任一项所述的纳米凝胶的制备方法，其特征是，还包括步骤3)，向步骤2)得到的纳米凝胶中加入DSPE
‑
PEG
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NHS溶液，并在摇床上进行反应，得到DSPE
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aPD1
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NGs。7.权利要求1～6任一项所述的纳米凝胶的制备方法所制备的纳米凝胶。8.一种工程化免疫细胞，其特征是，使权利要求5所述的DBCO
‑
aPD1
‑
NGs与叠氮化物标记的工程化免疫细胞通过点击化学反应相结合，使纳米凝胶锚点在工程化免疫细胞表面。9.权利要求8所述的工程化免疫细胞，其特征是，所述工程化免疫细胞由以下方法制备而成：1)、配置DSPE
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PEG
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N3溶液；2)、向工程化免疫细胞重悬液加入至步...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑毅然，陈星烨，
申请(专利权)人：苏州大学，
类型：发明
国别省市：