制导和导航控制蛋白及其制备和使用方法技术

本申请提供了一种具有N

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】制导和导航控制蛋白及其制备和使用方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]根据35U.S.C.119(e)，本申请要求于2019年11月6日提交的美国临时申请序列号No.62/931,307、于2020年3月3日提交的美国临时申请序列号62/984,731和于2020年3月17日提交的美国临时申请序列号62/991,042的申请日的优先权，其全部公开内容通过引用并入本文。


[0003]本申请涉及用于免疫疗法的多特异性抗体的
，更具体地涉及制备和使用针对免疫细胞和肿瘤细胞的表面分子具有多种结合活性的制导和导航控制(GNC)抗体。

技术介绍

[0004]癌症通过获得突变而发展，这些突变使癌细胞能够在逃避免疫监视和应答的同时转化、增殖和转移。用于治疗癌症的抗体疗法具有多种不同的机制。例如，靶向肿瘤细胞上过度表达的生长受体(EGFR、HER2等)的单克隆抗体可用于阻断肿瘤细胞增殖。使用抗体阻断抑制性T细胞检查点信号(抗PDL1、抗PD1、抗CTLA4)是一种防止肿瘤细胞减弱免疫应答的策略，否则免疫应答将设法控制其生长。另一种治疗策略是抑制血管生成(例如，抗VEGF)，其中氧气和营养物的减少会减缓肿瘤细胞的生长。单克隆抗体和抗体－药物缀合物(ADC)最初可有效控制肿瘤。然而，对抗体疗法的癌症抗性经常通过逃避机制发生，如胞外结构域脱落、受体下调和受体突变(Miller等人，Clin Cancer Res.(临床癌症研究)2017；Reslan等人，Mabs.(单克隆抗体)2009；Loganzo等人，Mol Cancer Ther.(分子癌症治疗)2016)。例如，对抗HER2 mAb曲妥珠单抗的抗性可通过HER2的胞外结构域脱落或通过HER2上的曲妥珠单抗表位的封闭而发生(Fiszman和Jasnis，International Journal of Breast Cancer(国际乳腺癌杂志)，2011)。
[0005]组合多种治疗机制(包括化学疗法、放射疗法和抗体疗法)的组合疗法已成为主流治疗策略。在本文中，多特异性抗体将不同的抗体疗法和机制组合成单一药剂(Boumahdi和de Sauvage.Nat Rev Drug Discov.(自然药物发现)2020)。

技术实现思路

[0006]以下概述仅是说明性的，并不旨在以任何方式进行限制。除了上述说明性方面、实施例和特征之外，通过参考附图和以下详细描述，其他方面、实施例和特征将变得显而易见。
[0007]一方面，本申请提供了可同时结合效应细胞和靶细胞的制导和导航控制(GNC)蛋白。GNC蛋白可以是单体或单体的二聚体。GNC蛋白可以是抗体或抗体样蛋白。GNC蛋白可具有至少5个或至少6个结合结构域。
[0008]在一个实施方案中，本申请提供了具有N
‑
末端和C
‑
末端的多特异性抗体样蛋白，其从N
‑
末端到C
‑
末端依次包含N
‑
末端的第一结合结构域(D1)、包含轻链部分的第二结合结
构域(D2)、Fc区、第三结合结构域(D3)和C
‑
末端的第四结合结构域(D4)。轻链部分包括共价连接到C
‑
末端的第五结合结构域(D5)、共价连接到N
‑
末端的第六结合结构域(D6)、或两者。D1、D2、D3、D4、D5和D6各自针对肿瘤抗原、免疫信号抗原或其组合具有结合特异性。
[0009]肿瘤抗原可以是组织抗原、新抗原、肿瘤特异性抗原(TSA)、肿瘤相关抗原(TAA)或其组合。
[0010]D2可以包括C
H1
。在一个实施方案中，D2中的轻链部分可以包括C
L
。在一个实施方案中，轻链部分可以包括Cκ/Cλ。
[0011]D2可以包括二聚体。
[0012]在一个实施方案中，D2可以包括Fab区。在一个实施方案中，Fab区可在V
L
和V
H
之间具有二硫键。在一个实施方案中，D2可以包括V
L
和V
H
。
[0013]在一个实施方案中，D2可以包括受体。在一个实施方案中，受体可以为NKG2D。在一个实施方案中，D2可以包括连接到C
H1
和C
L
的NKG2D。在一个实施方案中，D2可具有与SEQ ID NO.155
‑
116具有至少50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％的序列同一性的氨基酸序列。
[0014]D2可以通过铰链与Fc区连接。
[0015]Fc区可包括无效突变，其可具有减少或消除效应子功能的作用。在一个实施方案中，Fc区可以是野生型Fc。在一个实施方案中，Fc区可包括无效Fc的LALAKA突变。在一个实施方案中，无效Fc的LALAKA突变可包括L234A/L235A/K322A(Eu编号)突变。在一个实施方案中，Fc区可包含G237A(Eu编号)突变。在一个实施方案中，Fc区可包含N297A(Eu编号)突变。在一个实施方案中，Fc区可以包括糖基化的Fc。在一个实施方案中，Fc区可以是非糖基化Fc以降低效应子功能。
[0016]在一个实施方案中，本申请可提供具有N
‑
末端和C
‑
末端的多特异性抗体样蛋白，其从N
‑
末端到C
‑
末端的依次包含N
‑
末端的第一结合结构域(D1)、包含连接到C
L
和C
H1
的二聚体的第二结合结构域(D2)、包含CH2和CH3的Fc区(其中CH2通过铰链连接到CH1)、第三结合结构域(D3)和C
‑
末端的第四结合结构域(D4)。轻链部分可具有共价连接到C
‑
末端的第五结合结构域(D5)、共价连接到N
‑
末端的第六结合结构域(D6)、或两者。D1、D2、D3、D4、D5和D6各自针对肿瘤抗原、免疫信号抗原或其组合可具有结合特异性。
[0017]D2中的二聚体可以包括分别与C
L
和C
H
连接的V
L
和V
H
对，在这种情况下，D2结构域可以是Fab区，GNC蛋白可以是多特异性抗体单体或多特异性抗体。
[0018]在一个实施方案中，多特异性抗体样蛋白可以是五特异性或六特异性的。
[0019]在一个实施方案中，D2中的轻链部分可以具有共价连接到C
‑
末端的第五结合结构域(D5)，并且多特异性抗体样蛋白是五特异性的。在一个实施方案中，轻链部分可以具有共价连接到N
‑
末端的第六结合结构域(D6)，并且多特异性抗体样蛋白是五特异性的。在一个实施方案中，轻链部分可以具有共价连接到C
‑
末端的第五结合结构域(D5)本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种具有N
‑
末端和C
‑
末端的多特异性抗体样蛋白，其从N
‑
末端到C
‑
末端依次包含N
‑
末端的第一结合结构域(D1)、包含轻链部分的第二结合结构域(D2)、Fc区、第三结合结构域(D3)和C
‑
末端的第四结合结构域(D4)，其中所述轻链部分包括共价连接到C
‑
末端的第五结合结构域(D5)、共价连接到N
‑
末端的第六结合结构域(D6)、或两者，以及其中D1、D2、D3、D4、D5和D6各自针对肿瘤抗原、免疫信号抗原或其组合具有结合特异性。2.根据权利要求1所述的多特异性抗体样蛋白，其中所述D2包括与CL和CH1连接的二聚体。3.根据权利要求1所述的多特异性抗体样蛋白，其中所述D2包括Fab区。4.根据权利要求1所述的多特异性抗体样蛋白，其中所述D2包括受体。5.根据权利要求1所述的多特异性抗体样蛋白，其中所述D2包括NKG2D。6.根据权利要求1所述的多特异性抗体样蛋白，其中所述轻链部分包括与C
‑
末端共价连接的第五结合结构域(D5)，并且其中所述多特异性抗体样蛋白是五特异性的。7.根据权利要求1所述的多特异性抗体样蛋白，其中所述轻链部分包括与N
‑
末端共价连接的第六结合结构域(D6)，并且其中所述多特异性抗体样蛋白是五特异性的。8.根据权利要求1所述的多特异性抗体样蛋白，其中所述轻链部分包括与C
‑
末端共价连接的第五结合结构域(D5)和与N
‑
末端共价连接的第六结合结构域(D6)，并且其中所述多特异性抗体样蛋白是六特异性的。9.根据权利要求1所述的多特异性抗体样蛋白，其中所述D1、D2、D3、D4、D5和D6独立地为scFv结构域、受体或配体。10.根据权利要求1所述的多特异性抗体样蛋白，其中所述D2针对CD3或肿瘤相关抗原(TAA)具有结合特异性。11.根据权利要求1所述的多特异性抗体样蛋白，其中所述D1、D2、D3、D4、D5和D6独立地针对选自T细胞上的受体、免疫检查点受体、共刺激受体、淋巴细胞或骨髓细胞的受体、肿瘤相关抗原(TAA)、组织抗原、新抗原、肿瘤特异性抗原(TSA)、糖蛋白或其组合的抗原具有结合特异性。12.根据权利要求11所述的多特异性抗体样蛋白，其中所述T细胞上的受体的结合结构域与所述肿瘤相关抗原(TAA)的结合结构域相邻。13.根据权利要求11所述的多特异性抗体样蛋白，其中所述T细胞上的受体的结合结构域与所述淋巴细胞或骨髓细胞的受体的结合结构域相邻。14.根据权利要求11所述的多特异性抗体样蛋白，其中所述T细胞上的受体包括CD3、T细胞受体或其复合物。15.根据权利要求11所述的多特异性抗体样蛋白，其中所述免疫检查点受体包含为PD
‑
L1、PD
‑
1、TIGIT、TIM
‑
3、LAG
‑
3、CTLA4、BTLA、VISTA、PDL2、CD160、LOX
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...

【专利技术属性】
技术研发人员：丹尼斯，
申请(专利权)人：四川百利药业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：