抗CD19抗体及其使用和制备方法技术

一种对人CD19具有结合特异性的分离的单克隆抗体(mAb)或其抗原结合片段，其中分离的mAb或抗原结合片段包含与选自SEQ ID NO.1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、91或93的序列具有同一性的氨基酸序列，其中同一性不小于95％。95％。95％。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗CD19抗体及其使用和制备方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]根据35U.S.C.119(e)，本申请要求2020年3月3日提交的美国临时申请序列号62/984,731的优先权，其全部公开内容通过引用并入本文。


[0003]本公开一般涉及生物治疗
，更具体地涉及制备和使用多特异性抗体。

技术介绍

[0004]淋巴瘤占美国每年诊断的所有癌症的4.3％，B细胞恶性肿瘤占所有淋巴瘤诊断的约90％。CD19是在不同分化阶段由B淋巴细胞表达的免疫球蛋白超家族的B淋巴细胞特异性成员，从V(D)J重排开始直到B细胞成熟为浆细胞，此时CD19的表面表达似乎丧失。虽然CD19广泛用作泛B细胞标志物，但发现CD19在许多形式的白血病和淋巴瘤中高度表达，具有B细胞起源的特征。30多年来，CD19一直是免疫疗法发展的焦点。制药公司正在积极地追求抗CD19策略，因为它们有希望直接靶向对应于早期B细胞分化阶段的那些B细胞恶性肿瘤。靶向CD19已被批准为一种优异的免疫治疗策略，特别是当靶向CD22(由B细胞恶性肿瘤表达的另一种泛B细胞标志物)的抗体治疗不成功时。
[0005]CD19是正常B细胞和B细胞起源癌症的重要细胞表面标志物。因此，非常希望有一种靶向CD19的抗体用于抗癌治疗。文献中的报道表明，难以鉴定也与食蟹猴中发现的CD19交叉反应的抗CD19抗体，这一特性极大地促进了治疗药理学和毒理学研究。历史抗体BU12已经显示具有对人CD19的高亲和力和对食蟹猴CD19的交叉反应性，然而该抗体是从小鼠杂交瘤中发现的并且不包含人框架序列。因此，BU12的人源化变体对于治疗用途是高度理想的。

技术实现思路

[0006]本申请提供了抗CD19肽、蛋白质、蛋白质复合物、抗体及其制备和使用方法。
[0007]在一个方面，本申请提供了对人CD19具有结合特异性的肽。在一个实施方案中，该肽具有与SEQ ID NO.1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、91或93具有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％的序列同一性的氨基酸序列。
[0008]在一个实施方案中，该肽为scFv肽。在一个实施方案中，scFv肽可具有对人CD19的结合亲和力，KD不大于1nM、2nM、3nM、5nM、10nM、15nM、20nM、30nM、40nM或50nM。
[0009]在一个方面，本申请提供了对人CD19具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段。在一个实施方案中，分离的抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO.1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、91或93具有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％的序列同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗体包括分离的单克隆抗体(mAb)。
[0010]在一个实施方案中，抗体为双特异性抗体。在一个实施方案中，抗体为多特异性抗体。在一个实施方案中，抗体为三特异性抗体、四特异性抗体、五特异性抗体或六特异性抗
体。
[0011]在一个实施方案中，抗体包括scFv，其中scFv包含与SEQ ID NO.1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、91或93具有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％的序列同一性的氨基酸序列。
[0012]在一个实施方案中，抗体包括Fab，其中Fab包含与SEQ ID NO.1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、91或93具有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％的序列同一性的氨基酸序列。
[0013]在一个实施方案中，本申请提供了一种多特异性抗体样蛋白。在一个实施方案中，蛋白质包含肽，该肽具有与SEQ ID NO.1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、91或93具有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％的序列同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，多特异性抗体样蛋白具有N
‑
末端和C
‑
末端，从N
‑
末端到C
‑
末端依次包含N
‑
末端的第一结合结构域(D1)、包含轻链部分的第二结合结构域(D2)、Fc区、第三结合结构域(D3)和C
‑
末端的第四结合结构域(D4)。轻链部分包含共价连接到C
‑
末端的第五结合结构域(D5)、共价连接到N
‑
末端的第六结合结构域(D6)或两者，且D1、D2、D3、D4、D5和D6各自对肿瘤抗原、免疫信号传导抗原或其组合具有结合特异性。
[0014]在一个实施方案中，多特异性抗体样蛋白为五特异性的。在一个实施方案中，抗体样蛋白包含包括D1、D2、D3、D4和D6的结合结构域。
[0015]在一个实施方案中，多特异性抗体样蛋白为六特异性的。
[0016]在一个实施方案中，D1包含肽，该肽包含与SEQ ID NO.1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、91或93具有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％的序列同一性的氨基酸序列。
[0017]在一个实施方案中，D1包含肽，该肽具有与SEQ ID NO.7或19具有95％的序列同一性的氨基酸序列。
[0018]在一个实施方案中，D2包含肽，该肽具有与SEQ ID NO.1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、91或93具有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％的序列同一性的氨基酸序列。
[0019]在一个实施方案中，D2包含肽，该肽具有与SEQ ID NO.91或93具有95％的序列同一性的氨基酸序列的肽。
[0020]在一个实施方案中，D6包含肽，该肽具有与SEQ ID NO.1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、91或93具有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％的序列同一性的氨基酸序列。
[0021]在一个实施方案中，D6包含肽，该肽具有与SEQ ID NO.7或19具有95％的序列同一性的氨基酸序列。
[0022]在一个实施方案中，本申请提供了多特异性单克隆抗体，其包含如本文要求保护的多特异性抗体样蛋白。
[0023]在一个实施方案中，多特异性单克隆抗体可具有对人CD19的结合亲和力，Kd不大于1nM、5nM、10nM、20nM、30nM、40nM或50nM。
[0024]在一个实施方案中，抗体为人抗体。在一个实施方案中，多特异性单克隆抗体为IgG。
[0025]在一个实施方案中，本申请提供了分离的核酸，其编码分离的mAb或抗原结合片段、IgG1重链、κ轻链、可变轻链或可变重链，如本文所公开的。
[0026]在本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种对人CD19具有结合特异性的肽，包含与SEQ ID NO.1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、91或93具有至少98％的序列同一性的氨基酸序列。2.一种scFv肽，其包含权利要求1所述的肽。3.根据权利要求2所述的scFv肽，其对人CD19的结合亲和力的KD不大于10nM。4.一种对人CD19具有结合特异性的抗体，其中所述抗体包含权利要求1所述的肽。5.根据权利要求4所述的抗体，其中所述抗体是多特异性抗体。6.根据权利要求4所述的抗体，其包含scFv，其中所述scFv包含权利要求1所述的肽。7.根据权利要求4所述的抗体，其包含Fab，其中所述Fab包含权利要求1所述的肽。8.一种包含权利要求1所述的肽的多特异性抗体样蛋白，其中所述多特异性抗体样蛋白具有N
‑
末端和C
‑
末端，所述多特异性抗体样蛋白从N
‑
末端到C
‑
末端依次包含所述N
‑
末端的第一结合结构域(D1)、包含轻链部分的第二结合结构域(D2)、Fc区、第三结合结构域(D3)和所述C
‑
末端的第四结合结构域(D4)，其中所述轻链部分包含共价连接到所述C
‑
末端的第五结合结构域(D5)、共价连接到所述N
‑
末端的第六结合结构域(D6)或两者，以及其中D1、D2、D3、D4、D5和D6各自对肿瘤抗原、免疫信号抗原或其组合具有结合特异性。9.根据权利要求8所述的多特异性抗体样蛋白，其中D1包含权利要求1所述的肽。10.根据权利要求8所述的多特异性抗体样蛋白，其中D1包含肽，所述肽具有与SEQ ID NO.7或19具有95％的序列同一性的氨基酸序列。11.根据权利要求8所述的多特异性抗体样蛋白，其中D2包含权利要求1所述的肽。12.根据权利要求8所述的多特异性抗体样蛋白，其中D2包含肽，所述肽具有与SEQ ID NO.91或93具有95％的序列同一性的氨基酸序列。13.根据权利要求8所述的多特异性抗体样蛋白，其中D6包含权利要求1所述的肽。14.根据权利要求8所述的多特异性抗体样蛋白，其中D6包含肽，所述肽具有与SEQ ID NO.7或19具有95％的序列同一性的氨基酸序列。15.一种多特异性单克隆抗体，包含权利要求8所述的多特异性抗体样蛋白。16.根据权利要求15所述的多特异性单...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏米里，
申请(专利权)人：四川百利药业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：