DHA或其衍生物在制备冠状病毒抑制剂中的应用制造技术

本发明专利技术公开了DHA或其衍生物在制备冠状病毒抑制剂中的应用，属于医用配制品领域。本发明专利技术还公开了一种冠状病毒抑制剂，所述冠状病毒抑制剂包括DHA或其衍生物和抗冠状病毒的抗体，所述冠状病毒可为β属冠状病毒，如SARS

【技术实现步骤摘要】
DHA或其衍生物在制备冠状病毒抑制剂中的应用


[0001]本专利技术属于医用配制品领域，具体涉及DHA或其衍生物在制备冠状病毒抑制剂中的应用。

技术介绍

[0002]新型冠状病毒，是一种可引起人新型冠状病毒肺炎 (COVID
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19) 的新发呼吸道病原体，与重症急性呼吸道综合征冠状病毒(SARS
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CoV)和中东呼吸综合征冠状病毒(MERS
‑
CoV)同属于β
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冠状病毒，具有较高的传染性和一定的致死率。新型冠状病毒，世界卫生组织称其为2019
‑
nCoV，世界病毒分类委员会称其为SARS
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CoV
‑
2。
[0003]SARS
‑
CoV
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2是一种单链RNA 病毒，该病毒进入宿主细胞的关键蛋白是位于病毒颗粒表面的刺突糖蛋白。刺突糖蛋白全长1274个氨基酸，其中319
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529位的氨基酸折叠形成的结构域介导与宿主细胞膜受体结合，因而这些氨基酸所组成的结构域也称之为RBD结构域(Receptor binding domain，RBD)。RBD结构域是新冠病毒药物研发的重要靶标。
[0004]抗体(antibody，Ab)是B细胞被B细胞抗原表位特异性刺激后增殖分化为浆细胞所产生的效应免疫分子，介导体液免疫。当抗体与病原体表面，或者细菌毒素关键表位相结合，则封闭了病原体或毒素的毒力结构，使病毒丧失感染能力，并使毒素丧失毒力，称为中和作用(neutralization)。大部分抗体是通过向T
‑
淋巴细胞发出锁定抗原的信号，激发细胞免疫反应，杀死病毒，而中和抗体是B淋巴细胞产生的能够与病原微生物表面的抗原结合的一类抗体，是特异针对病毒中和表位产生的抗体，可直接靶定到病毒中和表位，使病毒失去结合受体的能力。
[0005]靶向病毒的疫苗和药物研发面对的另外一个巨大挑战是病毒的高度变异性，尤其是冠状病毒这类单链RNA病毒。针对易产生变异和耐药性的病毒，目前比较成功的治疗策略是“鸡尾酒疗法”，即通过把不同靶向的药物分子进行配比后复方联合使用，可以从病毒感染周期的不同阶段对其进行多重遏制，有效抑制病毒变异逃逸，进而实现病毒控制与清除。这一策略已经成功用于HIV病毒以及丙肝病毒的临床治疗。目前我国首个获批国产中和抗体联合治疗药物也已经写入新版新冠肺炎诊疗方案中。

技术实现思路

[0006]本专利技术要解决的技术问题是如何抑制冠状病毒的活性，例如抑制SARS
‑
CoV
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2的侵入活性。
[0007]为解决上述技术问题，第一个方面，本专利技术提供DHA或其衍生物的应用，所述应用可为以下(a)和/或(b)和/或(c)：(a)DHA或其衍生物在制备增强抗冠状病毒的抗体对冠状病毒的抗病毒活性的产品(药物或疫苗)中的应用；(b)DHA或其衍生物在制备预防和/或治疗冠状病毒所致疾病或冠状病毒感染的药物中的应用；
(c)DHA或其衍生物在制备冠状病毒抑制剂中的应用。
[0008]进一步地，上述的应用中，所述冠状病毒可为β冠状病毒属病毒，α冠状病毒属病毒，γ冠状病毒属病毒和/或δ冠状病毒属病毒。
[0009]进一步地，上述的应用中，所述β冠状病毒属病毒可为SARS
‑
CoV
‑
2。
[0010]本专利技术中，DHA即二十二碳六烯酸，英文名为Docosahexaenoic Acid，简称DHA。
[0011]进一步地，上述的应用中，所述衍生物可为DHA环氧化物 (DHA
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epoxides, EDPs)。
[0012]本专利技术中，DHA环氧化物的制备方法如下：将50 mg DHA溶解在2 mL的二氯甲烷中，得到2 mL DHA浓度为25 mg/mL的DHA二氯甲烷溶液。将该2 mL DHA二氯甲烷溶液与49.5 mg的间氯过氧苯甲酸（mCPBA）室温（25℃）反应（进行非特异性环氧化反应）1 小时后，加入等体积10% NaHCO3水溶液淬灭mCPBA，水层用等体积的二氯甲烷重新萃取三次，将水层从有机层中取出，用等体积的二氯甲烷重新萃取水层，合并有机层，真空干燥。使用Waters CSH C18反相色谱柱 (1.7 μm, 2.1 mm
ꢀ×ꢀ
100 mm,)，采用流动相梯度洗脱，收集保留时间为15.62 min的洗脱峰即为DHA环氧化物EDPs。
[0013]液相色谱条件如下：色谱柱：Waters CSH C18反相色谱柱，粒径1.7 μm，2.1 mm
ꢀ×
100 mm；柱温：30℃；流速：0.25 mL/min；进样量：2 μL；流动相及梯度洗脱程序如说明书附图中图4所示。
[0014]进一步地，本专利技术中所述抗病毒活性也可称为抑制病毒活性，具体可为抑制病毒进行细胞融合和/或抑制病毒侵入细胞和/或抑制病毒复制。
[0015]所述抗冠状病毒的抗体可为冠状病毒的中和抗体，如P2C
‑
1F11或P2B
‑
1G5。
[0016]其中，P2C
‑
1F11的重链可变区(VH)的氨基酸序列是SEQ ID No.1，核苷酸序列是SEQ ID No.5；轻链可变区(VL)的氨基酸序列为SEQ ID No.2，核苷酸序列是SEQ ID No.6；P2B
‑
1G5的重链可变区(VH)的氨基酸序列是SEQ ID No.3，核苷酸序列是SEQ ID No.7；轻链可变区(VL)的氨基酸序列为SEQ ID No.4，核苷酸序列是SEQ ID No.8。
[0017]中和抗体P2C
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1F11和P2B
‑
1G5的重链恒定区均为人IgG1，其氨基酸序列为SEQ ID No.9，核苷酸序列为SEQ ID No.12；中和抗体P2B
‑
1G5的轻链恒定区为lambda，其氨基酸序列为SEQ ID No.10，核苷酸序列为SEQ ID No.13；中和抗体P2C
‑
1F11的轻链恒定区为Kappa，其氨基酸序列为SEQ ID No.11，核苷酸序列为SEQ ID No.14。
[0018]为解决上述技术问题，第二个方面，本专利技术提供冠状病毒抑制剂，所述冠状病毒抑制剂包括M1和M2，所述M1可为DHA或其衍生物，所述M2可为抗冠状病毒的抗体。
[0019]所述冠状病毒抑制剂对冠状病毒具有抗病毒活性。
[0020]进一步地，上述的冠状病毒抑制剂中，所述抗冠状病毒的抗体与DHA或其衍生物的质量比可为0.075:1
‑
2.43:1。
[0021]进一步地，上述的冠状病毒抑制剂中，所述冠状病毒可为β冠状病毒属病毒，α冠状病毒属病毒，γ冠状病毒属病毒和/或δ冠状病毒属病毒。
[0022]进一步地，上述的冠本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.DHA或其衍生物的应用，其特征在于：所述应用为以下(a)和/或(b)和/或(c)：(a) DHA或其衍生物在制备增强抗冠状病毒的抗体对冠状病毒的抗病毒活性的产品中的应用；(b) DHA或其衍生物在制备预防和/或治疗冠状病毒所致疾病或冠状病毒感染的药物中的应用；(c) DHA或其衍生物在制备冠状病毒抑制剂中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述冠状病毒为β冠状病毒属病毒，α冠状病毒属病毒，γ冠状病毒属病毒和/或δ冠状病毒属病毒。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述β冠状病毒属病毒为SARS
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CoV
‑
2。4.根据权利要求1
‑
3中任一项所述的应用，其特征在于：所述衍生物为DHA环氧化物。5.根据权利要求1
‑
3中任一项所述的应用，其特征在于：所述抗冠状病毒的抗体选自P2C
‑
1F11或P2B
‑
1G5，所述P2C
‑
1F11的重链可变区的氨基酸序列是SEQ ID No.1，轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID No.2；重链恒定区为人I...

【专利技术属性】
技术研发人员：李海涛，项斌，
申请(专利权)人：清华大学，
类型：发明
国别省市：