一种鼠单抗包被的磁珠、制备方法及测定高敏心肌肌钙蛋白Ⅰ的试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种鼠单抗包被的磁珠、制备方法及测定高敏心肌肌钙蛋白Ⅰ的试剂盒，本发明专利技术将鼠抗人cTnI单克隆抗体经稀释、生物素标记后进行裸磁珠包被，获得鼠抗人cTnI单克隆抗体包被的磁珠；稀释浓度为0.1mg/mL～0.6mg/mL；采用两种针对不同cTnI抗原表位的鼠抗人cTnI单克隆抗体，制备获得两种鼠抗人cTnI单克隆抗体包被的磁珠，将两种磁珠混合用于制备用于测定高敏心肌肌钙蛋白Ⅰ的试剂盒。本发明专利技术制备的试剂盒灵敏度高、准确度高、且稳定性好。且稳定性好。且稳定性好。

【技术实现步骤摘要】
一种鼠单抗包被的磁珠、制备方法及测定高敏心肌肌钙蛋白Ⅰ的试剂盒


[0001]本专利技术涉及生物医学检测
，具体涉及一种鼠单抗包被的磁珠、制备方法及测定高敏心肌肌钙蛋白Ⅰ的试剂盒。

技术介绍

[0002]cTnI属于心肌肌钙蛋白的复合物亚单位，主要存在于心肌细胞。心力衰竭时心肌细胞在缺血、缺氧情况下，出现心肌细胞凋亡、心室肌肉重构、心室腔扩大、内皮细胞功能紊乱，导致心肌细胞的完整性遭到破坏，细胞膜通透性增加，cTnI释放入血，导致血液中cTnI水平明显升高。cTnI水平在心肌损伤发生后3h～4h内开始升高，10h～24h内达到峰值，是反映心肌损伤及坏死的特异性血清学标志物，是血清学中诊断心肌损伤的“金标准”，心肌缺血、缺氧、损伤情况越严重，患者的cTnI水平往往越高。cTnI的检测对于急性冠状动脉综合征的预后，急性心肌梗死的诊断、动态检测及疗效观察，不稳定心绞痛预后判断，溶栓治疗效果的评估等均有较大的临床价值，具有非常关键的临床意义。
[0003]近年来，心肌肌钙蛋白检测技术的一大进步就是高敏心肌肌钙蛋白的出现。所谓高敏心肌肌钙蛋白，就是其检测下限较传统的心肌肌钙蛋白更低，能检测出极低水平的心肌肌钙蛋白。高敏心肌肌钙蛋白(cTnI)免疫分析在3h
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4h之内即可作出诊断，在急性心肌梗死病程中真正做到了早诊断早治疗，为降低心肌梗死，挽救病人的生命赢得宝贵的时间。
[0004]目前临床上对cTnI进行检测的常用方法有酶联免疫吸附实验(ELISA)、胶体金免疫层析技术、电化学发光等免疫诊断技术，由于方法学及抗体配对的限制，胶体金免疫层析技术法的灵敏度及检测定量准确度很难达到要求，ELISA法耗时较长，步骤较多，电化学发光法灵敏度和准确度都较高，但是费用高，多数市场被西门子罗氏等国外试剂占据，不适用于基层医院。另外，一些检测产品多采用某一段抗原表位的抗体对抗原进行检测，普遍存在漏检和无法达到正常人检出率≥50％。因此，筛选能够在识别cTnI的同时又能防止误检的抗体配对，专利技术一种灵敏度高，快速的检测试剂盒，及时监测病情的发展趋势、满足检测不同时间患者血液中心肌肌钙蛋白含量变化的要求尤为重要。

技术实现思路

[0005]基于上述技术背景，本专利技术提供了解决上述问题的一种鼠单抗包被的磁珠、制备方法及测定高敏心肌肌钙蛋白Ⅰ的试剂盒，旨在获得一种高灵敏度、准确度和稳定性、且费用较低的hs
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cTnI免疫测定试剂。
[0006]本专利技术通过下述技术方案实现：
[0007]一种鼠单抗包被的磁珠，为混合磁珠，所述混合磁珠采用两种针对不同cTnI抗原表位的鼠抗人cTnI单克隆抗体包被的磁珠，用于制备测定高敏心肌肌钙蛋白Ⅰ的试剂盒。
[0008]本专利技术优选采用的两种抗体为：抗体1：特异性结合cTnI的第41
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49位氨基酸片段；抗体2：特异性结合cTnI的第86
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92位氨基酸片段。
[0009]一种鼠单抗包被的磁珠的制备方法，包括以下步骤：将鼠抗人cTnI单克隆抗体经稀释、生物素标记后进行裸磁珠包被，获得鼠抗人cTnI单克隆抗体包被的磁珠；稀释浓度为0.1mg/mL～0.6mg/mL；采用两种针对不同cTnI抗原表位的鼠抗人cTnI单克隆抗体，制备获得两种鼠抗人cTnI单克隆抗体包被的磁珠，将两种磁珠混合用于制备用于测定高敏心肌肌钙蛋白Ⅰ的试剂盒。
[0010]本专利技术在鼠抗人cTnI单克隆抗体标记之前，将鼠抗人cTnI单克隆抗体稀释到特定的浓度，可以提高试剂盒的稳定性，不同批次的试剂盒功能相近。鼠抗人cTnI单克隆抗体稀释到盖特定的浓度在该范围内时，试剂盒的效价较高，而且稳定性好。且本专利技术通过同时包被和标记两种可以识别不同表位的抗体，旨在提高现有技术中hs
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cTnI免疫测定试剂的灵敏度和精确度。
[0011]具体步骤例如：
[0012]将两种针对不同cTnI抗原表位的鼠抗人cTnI单克隆抗体分别稀释到设定的浓度，稀释浓度为0.1mg/mL～0.6mg/mL；
[0013]对稀释后的两种鼠抗人cTnI单克隆抗体分别进行生物素标记，获得两种生物素抗体；
[0014]将两种生物素抗体分别包被在裸磁珠上，获得两种鼠抗人cTnI单克隆抗体包被的磁珠；
[0015]将两种磁珠混合用于制备用于测定高敏心肌肌钙蛋白Ⅰ的试剂盒。
[0016]进一步优选，生物素标记采用如下方法：采用PBS透析液对鼠抗人cTnI单克隆抗体进行透析，将透析后的鼠抗人cTnI单克隆抗体与交联剂BNHS反应，获得生物素抗体；采用PBS透析液对生物素抗体进行透析；向透析后的生物素抗体加入丙三醇保存。
[0017]进一步优选，包被采用如下方法：将生物素标记后的鼠抗人cTnI单克隆抗体按相应的的包被量去包被链霉亲和素磁珠；用0.08～0.12％BSA的缓冲液将鼠抗人cTnI单克隆抗体包被的磁珠稀释到设定浓度。
[0018]一种用于测定高敏心肌肌钙蛋白Ⅰ的试剂盒，包括混合磁珠，所述混合磁珠采用两种针对不同cTnI抗原表位的鼠抗人cTnI单克隆抗体包被的磁珠；进一步优选，混合磁珠是基于上述的一种鼠单抗包被的磁珠的制备方法制备获得。
[0019]进一步优选，还包括酶工作液和分析缓冲液。
[0020]进一步优选，所述分析缓冲液采用小牛血清稀释液。
[0021]进一步优选，所述酶工作液采用羊抗人cTnI单克隆抗体标记的酶工作液。
[0022]进一步优选，所述混合磁珠、酶工作液和分析缓冲液的体积比为1:1:1。
[0023]进一步优选，所述羊抗人cTnI单克隆抗体标记的酶工作液采用两种针对cTnI不同表位的碱性磷酸酶标记的抗cTnI羊单克隆抗体制备获得。
[0024]进一步优选，所述羊抗人cTnI单克隆抗体标记的酶工作液制备方法包括：用两种针对cTnI不同表位的碱性磷酸酶标记的抗cTnI羊单克隆抗体，按质量1:1混合后，稀释到设定浓度。
[0025]本专利技术具有如下的优点和有益效果：
[0026]本专利技术提供了一种鼠单抗包被的磁珠、制备方法及测定高敏心肌肌钙蛋白Ⅰ的试剂盒，通过优化磁珠制备步骤，通过同时包被和标记两种可以识别不同表位的抗体，提高了
现有技术中hs
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cTnI免疫测定试剂的灵敏度和精确度，且获得的试剂盒表现出良好的稳定性。
附图说明
[0027]此处所说明的附图用来提供对本专利技术实施例的进一步理解，构成本申请的一部分，并不构成对本专利技术实施例的限定。在附图中：
[0028]图1为应用案例一的贝克曼与磁珠Ⅰ对应试剂检测结果。
[0029]图2为应用案例一的贝克曼与磁珠Ⅱ对应试剂检测结果。
[0030]图3为应用案例一的贝克曼与混合磁珠对应试剂检测结果。
具体实施方式
[0031]为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面结合实施例和附图，对本专利技术作进一步的详细本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鼠单抗包被的磁珠，其特征在于，为混合磁珠，所述混合磁珠采用两种针对不同cTnI抗原表位的鼠抗人cTnI单克隆抗体包被的磁珠，用于制备测定高敏心肌肌钙蛋白Ⅰ的试剂盒。2.一种鼠单抗包被的磁珠的制备方法，包括以下步骤：将鼠抗人cTnI单克隆抗体经稀释、生物素标记后进行裸磁珠包被，获得鼠抗人cTnI单克隆抗体包被的磁珠，其特征在于，稀释浓度为0.1mg/mL～0.6mg/mL；采用两种针对不同cTnI抗原表位的鼠抗人cTnI单克隆抗体，制备获得两种鼠抗人cTnI单克隆抗体包被的磁珠，将两种磁珠混合用于制备用于测定高敏心肌肌钙蛋白Ⅰ的试剂盒。3.根据权利要求2所述的一种鼠单抗包被的磁珠的制备方法，其特征在于，生物素标记采用如下方法：采用PBS透析液对鼠抗人cTnI单克隆抗体进行透析，将透析后的鼠抗人cTnI单克隆抗体与交联剂BNHS反应，获得生物素抗体；采用PBS透析液对生物素抗体进行透析；向透析后的生物素抗体加入丙三醇保存。4.根据权利要求2所述的一种鼠单抗包被的磁珠的制备方法，其特征在于，包被采用如下方法：将生物素标记后的鼠抗人cTnI单克隆抗体按相应的的包被量去包被链霉亲和素磁珠；用0.08～0.12％BSA的缓冲液将鼠抗人c...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖平凡，方丽，
申请(专利权)人：四川沃文特生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：