一种评估肾脏衰老的方法技术

本发明专利技术属于医学领域的技术，具体涉及一种评估肾脏衰老的方法，将体检者的血液样本检测端粒长度（T）、NAD+浓度（N）和胱抑素C（C），并利用公式Ka=0.15*T+0.1*N+0.75*C评估肾脏衰老指数。通过使用本发明专利技术的评估方法，可有效评估肾脏衰老的情况，更直观的反映出相同年龄阶段下个体在普通人群中的肾脏衰老程度，提高对于肾脏衰老甚至是肾脏疾病的风险管控能力。肾脏衰老甚至是肾脏疾病的风险管控能力。肾脏衰老甚至是肾脏疾病的风险管控能力。

【技术实现步骤摘要】
一种评估肾脏衰老的方法


[0001]本专利技术属于医学
，具体涉及一种评估肾脏衰老的方法。

技术介绍

[0002]人口老龄化是全球现代化过程中必经的发展趋势。我国同样正在快速进入老龄化社会，预计到2050年，我国老龄人口数量将达到4.87亿，占总人口的34.9%，届时，每三个人中将有一个老年人。目前，已有的研究发现多种衰老标志物，如端粒、DNA甲基化、NAD+、α酮戊二酸等等，这些作为生理衰老的指标。同时，多个器官衰老的标志物也有报道。胱抑素C是体检中反应肾脏功能的一个指标。对这些衰老标志物的深入研究将有利于准确评估生理衰老和预测老年疾病风险。由此，保障老年人的生理健康，从而更好地保障老年人的生活质量的需要比以往更加强烈。建立科学的衰老评估体系是其中重要一环。然而，体检者通常对于自己的体检报告缺乏直观的认识，对于个体肾脏功能亚健康状态难以判断，且目前缺少科学评估肾功能衰老的方法等问题。因此，如何科学的评估肾脏衰老的方法成为了至关重要的问题。

技术实现思路

[0003]为解决上述技术问题，本专利技术提供了一种评估肾脏衰老的方法，包括如下步骤：S1、取外周血，采用胶乳增强透射免疫比浊法测定胱抑素C；S2、另取外周血，加入高氯酸充分混匀裂解至其由红色变为棕色，随后离心10min，取上清，加入NAD+提取液，充分混匀，静置等待分层，取最上层液体作为样品；S3、取样品稀释液加入到样品中进行稀释，向96孔板中加入样品，分别向每个孔中加入反应液，避光孵育40min；S4、加入硫酸终止反应，上酶标仪，根据标准品获得的方程对样品进行计算，得出样品的NAD+浓度；S5、使用Magen试剂盒提取外周血中的基因组DNA，取基因组DNA，加入Hinf I、Rsa I、RNase A酶切，过夜，加入DNA loading buffer；用琼脂糖胶，TAE缓冲液，电泳12
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16h，溴酚蓝距胶孔15cm时停止电泳；S6、将步骤S4所得琼脂糖胶放置于干胶仪上，抽真空干胶1h，往干好的琼脂糖胶加入变性液反应，随后加入中和液反应，接着加入预杂交液反应，杂交过夜；S7、将步骤S5所得加入洗液Ⅰ，清洗15min，重复3次，随后加入洗液Ⅱ，清洗15min，重复2次，用保鲜膜包好，磷屏曝光3h，扫屏，处理数据，计算平均端粒长度;S8、采用统计软件作图，基于普通人群的端粒长度（T）、NAD+浓度（N）和胱抑素C（C）三个指标的大数据统计进行比较，依据检测数值在统计图中的分布位置进行评分，分值范围0
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100分，将分值代入计算公式，以评估肾脏衰老指数（Ka），评估肾脏衰老指数计算公式为：Ka=0.15*T+0.1*N+0.75*C。
[0004]进一步地，步骤S2的NAD+提取液是由3体积1,1,2
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三氯三氟乙烷与1体积三辛胺充
分混匀而得。
[0005]进一步地，步骤S3的样品稀释液是用800体积的水加入3体积的1M，pH=8.0的Tris缓冲液所得，反应液由以下组分组成：61mmol/L、PH为7.4的双苷肽，CCK
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8，2.6千单位/mL的乙醇脱氢酶，3.5mol/L的烟酰胺，无水乙醇；上述组分的体积比为820:100:5:28.5:57。
[0006]进一步地，步骤S6的变性液由1.5M氯化钠和0.5M氢氧化钠组成，所述中和液由1.5M 氯化钠和0.5M PH为8.0的Tris
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HCl组成，预杂交液由10X Denhardt's溶液、5X SSC缓冲液、0.5% SDS组成。
[0007]进一步地，步骤S7的洗液I为2X SSC缓冲液，含0.5%SDS，洗液II为2X SSC缓冲液，含0.1%SDS。
[0008]进一步地，步骤S2离心时，其环境温度为4℃。
[0009]更进一步地，步骤S6中，变性液反应时间为30min，中和液反应时间为30min，预杂交液反应时间为1h。
[0010]本专利技术对端粒长度指标值进行评分，评分方法为：在相同年龄阶段下，基于此年龄阶段的普通人群大数据分值范围进行计算，分值即为端粒长度在同龄人群中的百分比；分值范围0
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100分。端粒长度越长，体检指标值越大，分值越高，反之，端粒长度越短，体检指标值越小，分值越低。本专利技术还对NAD+指标值进行评分，评分方法为：在相同年龄阶段下，基于此年龄阶段的普通人群大数据分值范围进行计算，分值即为NAD+水平在同龄人群中的百分比，分值范围0
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100分。NAD+水平高，体检指标值越大，分值越高，反之，NAD+水平低，体检指标值越小，分值越低。本专利技术对胱抑素C体检指标值进行评分，评分方法为：在相同年龄阶段下，基于此年龄阶段的普通人群大数据分值范围进行计算，分值即为100减去胱抑素C在同龄人群中的百分比。分值范围0
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100分。胱抑素C指标值越小，分值越高，反之，胱抑素C指标值越大，分值越低。
[0011]本专利技术综合端粒（T）、NAD+浓度（N）和胱抑素C（C）三个指标的分值，将分值代入计算公式，以评估肾脏衰老指数（Ka）。
[0012]评估肾脏衰老指数计算公式为：Ka=0.15*T+0.1*N+0.75*C。
[0013]本专利技术提供了一种评估肾脏衰老的方法，是在肾脏指标胱抑素C和生理衰老指标端粒长度、NAD+的检测基础上增加了同一年龄阶段的同一指标的大数据普通人群的比较方法，能直观的反映出体检者在普通人群中肾脏的对比情况。同时，本方法科学的建立了肾脏衰老评估体系，提高了肾脏衰老甚至是肾脏疾病的风险管控力。
[0014]附图说明
[0015]图1为采用本专利技术的方法所测得的普通人群端粒长度统计图图2为采用本专利技术的方法所测得的普通人群NAD+浓度统计图图3为采用本专利技术的方法所测得的普通人群胱抑素C统计图。
[0016]具体实施方式
[0017]下面结合具体实施例对本专利技术作进一步解说。
[0018]实施例1 一种评估肾脏衰老的方法，包括以下步骤：S1、取外周血，采用胶乳增强透射免疫比浊法测定胱抑素C；S2、另取外周血，取外周血，加入高氯酸充分混匀裂解至其由红色变为棕色，随后离心10min，取上清，加入NAD+提取液，充分混匀，静置等待分层，取最上层液体作为样品；S3、取样品稀释液加入到样品中进行稀释，向96孔板中加入样品，分别向每个孔中加入反应液，避光孵育40min；S4、加入硫酸终止反应，上酶标仪，根据标准品获得的方程对样品进行计算，得出样品的NAD+浓度；S5、使用Magen试剂盒提取外周血中的基因组DNA，取基因组DNA，加入Hinf I、Rsa I、RNase A酶切，过夜，加入DNA loading buffer；用琼脂糖胶，TAE缓冲液，电泳14h，溴酚蓝距胶孔15cm时停止电泳；S6、将步骤S4所得琼脂糖胶放置于干胶仪上，抽真空干胶1h，往干好的琼脂糖胶加入变性液反应，随后加入中和液反应，接着加入预杂交液反应，杂交过夜；S7、将步骤S5本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种评估肾脏衰老的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、取外周血，采用胶乳增强透射免疫比浊法测定胱抑素C；S2、另取外周血，加入高氯酸充分混匀裂解至其由红色变为棕色，随后离心10min，取上清，加入NAD+提取液，充分混匀，静置等待分层，取最上层液体作为样品；S3、取样品稀释液加入到样品中进行稀释，向96孔板中加入样品，分别向每个孔中加入反应液，避光孵育40min；S4、加入硫酸终止反应，上酶标仪，根据标准品获得的方程对样品进行计算，得出样品的NAD+浓度；S5、使用Magen试剂盒提取外周血中的基因组DNA，取基因组DNA，加入Hinf I、Rsa I、RNase A酶切，过夜，加入DNA loading buffer；用琼脂糖胶，TAE缓冲液，电泳12
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16h，溴酚蓝距胶孔15cm时停止电泳；S6、将步骤S4所得琼脂糖胶放置于干胶仪上，抽真空干胶1h，往干好的琼脂糖胶加入变性液反应，随后加入中和液反应，接着加入预杂交液反应，杂交过夜；S7、将步骤S5所得加入洗液Ⅰ，清洗15min，重复3次，随后加入洗液Ⅱ，清洗15min，重复2次，用保鲜膜包好，磷屏曝光3h，扫屏，处理数据，计算平均端粒长度;S8、采用统计软件作图，基于普通人群的端粒长度（T）、NAD+浓度（N）和胱抑素C（C）三个指标的大数据统计进行比较，依据检测数值在统计图中的分布位置进行评分，分值范围0
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100分，将分值代入计算公式，以评估肾脏衰老指数（Ka），评估肾脏衰老指数计算公式为：Ka=0...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈汉森，吴琨，徐丽婉，罗瑞茵，
申请(专利权)人：永利国际再生医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：