人脐带间充质干细胞的制备方法技术

本发明专利技术公开一种人脐带间充质干细胞的制备方法，包括以下步骤：S10、从脐带剥取华通氏胶；S20、将所述华通氏胶剪碎后，加入生理盐水，混匀、离心，去除上清，得到组织块；S30、将所述组织块和完全培养基混合，得到组织块液；S40、将所述组织块液接种至T75培养瓶中，加入完全培养基，培养至细胞融合度为85％，洗涤、消化、终止消化，收集终止消化后的细胞，得到P0代细胞；S50、将所述P0代细胞接种至T175培养瓶中，加入完全培养基，继续培养，得到人脐带间充质干细胞。本方法首先自脐带剥取华通氏胶，剪碎离心得到组织块，加完全培养基配成组织块液，然后将组织块液原代培养至细胞融合度为85％，收获P0代细胞，最后将P0代细胞传代培养得到人脐带间充质干细胞。脐带间充质干细胞。脐带间充质干细胞。

【技术实现步骤摘要】
人脐带间充质干细胞的制备方法


[0001]本专利技术涉及细胞培养
，特别涉及一种人脐带间充质干细胞的制备方法。

技术介绍

[0002]人脐带间充质干细胞具有较高的分化潜能，可向多个方向进行分化。它在骨、软骨、肌肉、神经、肝和心肌等组织工程方面具有广阔的临床应用前景。为便于应用，需要对人脐带间充质干细胞进行体外制备培养。因此，需要一种有效的方法来制备得到人脐带间充质干细胞。

技术实现思路

[0003]本专利技术的主要目的是提出一种人脐带间充质干细胞的制备方法，旨在通过所述人脐带间充质干细胞的制备方法制备得到人脐带间充质干细胞。
[0004]为实现上述目的，本专利技术提出一种人脐带间充质干细胞的制备方法，包括以下步骤：
[0005]S10、从脐带剥取华通氏胶；
[0006]S20、将所述华通氏胶剪碎后，加入生理盐水，混匀、离心，去除上清，得到组织块；
[0007]S30、将所述组织块和完全培养基混合，得到组织块液；
[0008]S40、将所述组织块液接种至T75培养瓶中，加入完全培养基，培养至细胞融合度为85％，洗涤、消化、终止消化，收集终止消化后的细胞，得到P0代细胞；
[0009]S50、将所述P0代细胞接种至T175培养瓶中，加入完全培养基，继续培养，得到人脐带间充质干细胞。
[0010]可选地，所述组织块液中，所述组织块的浓度为1.0g/ml。
[0011]可选地，步骤S40中，将0.5～1.0ml所述组织块液接种至T75培养瓶中。
[0012]可选地，步骤S40中，将1.0ml所述组织块液接种至T75培养瓶中。
[0013]可选地，步骤S40中，加入完全培养基5～15ml。
[0014]可选地，步骤S40中，使用胰酶溶液消化，且所述胰酶溶液中，胰酶的浓度为0.625～2.5g/L。
[0015]可选地，步骤S50中，所述接种的密度为3000～7000个/cm2。
[0016]可选地，步骤S50中，加入完全培养基16～24ml。
[0017]可选地，步骤S50之后，还包括：
[0018]用胰酶溶液将所述人脐带间充质干细胞进行消化，得到消化后的人脐带间充质干细胞，所述胰酶溶液中，胰酶的浓度为0.625～2.5g/L。
[0019]可选地，步骤S30、步骤S40和步骤S50中，完全培养基包括以下组分：
[0020]转化生长因子
‑
β1、碱性成纤维细胞生长因子、MEK抑制剂PD0325901、GSK
‑
3抑制剂Laduviglusib、漆黄素、ALK
‑
5抑制剂A 83
‑
01、荜茇酰胺、达沙替尼、BCL
‑
XL抑制剂A1331852、白细胞介素
‑
1、白细胞介素
‑
6、碳酸氢钠、CuSO4、ZnSO4、Na2SeO3、FeCl3、Na2SiO3、
MnSO4、NH4VO3、NiSO4、SnCl2、AlCl3、AgNO3、Ba(C2H3O2)2、KBr、CdCl2、CoCl2、CrCl3、NaF以及GeO2。
[0021]本专利技术的技术方案中，首先自脐带剥取华通氏胶，然后剪碎离心得到组织块，加入完全培养基将组织块配成组织块液，然后将组织块液原代培养至细胞融合度为85％，收获P0代细胞，最后将P0代细胞传代培养得到人脐带间充质干细胞。
附图说明
[0022]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅为本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
[0023]图1为本专利技术提出的人脐带间充质干细胞的制备方法的一实施例的流程示意图。
[0024]本专利技术目的的实现、功能特点及优点将结合实施例，参照附图做进一步说明。
具体实施方式
[0025]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。
[0026]需要说明的是，实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。另外，全文中出现的“和/或”的含义，包括三个并列的方案，以“A和/或B”为例，包括A方案、或B方案、或A和B同时满足的方案。此外，各个实施例之间的技术方案可以相互结合，但是必须是以本领域普通技术人员能够实现为基础，当技术方案的结合出现相互矛盾或无法实现时应当认为这种技术方案的结合不存在，也不在本专利技术要求的保护范围之内。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0027]目前采用的人脐带间充质干细胞的制备方法获得的人脐带间充质干细胞活细胞数少、细胞活率低。
[0028]鉴于此，本专利技术提出一种人脐带间充质干细胞的制备方法，用以提高制备获得的人脐带间充质干细胞的活细胞数和细胞活率。图1为本专利技术人脐带间充质干细胞的制备方法的一实施例。
[0029]请参照图1，在本专利技术实施例中，人脐带间充质干细胞的制备方法包括以下步骤：
[0030]S10、从脐带剥取华通氏胶。
[0031]华通氏胶是构成脐带的凝胶状物质，其内能够分离出脐带间充质干细胞，通过对华通氏胶中的干细胞组织进行培养，能够得到可供应用的人脐带间充质干细胞。从脐带剥取华通氏胶的具体步骤如下：用0.9％生理盐水清洗脐带，以去除脐带中的血液；然后将清洗后的脐带浸泡于75％酒精中1min，接着放入0.9％生理盐水中清洗；最后剪成3～5cm长度，放入0.9％生理盐水中清洗，得到剪短清洗后的脐带；用组织镊剥离出剪短清洗后的脐带中的华通氏胶，将所述华通氏胶放入0.9％生理盐水中清洗并撕成细条状，将细条状的华
通氏胶作为后续使用的华通氏胶。当然，从脐带剥取华通氏胶还可以采用其他方法，此为本领域技术人员常规操作，本专利技术对此不做限制。
[0032]S20、将所述华通氏胶剪碎后，加入生理盐水，混匀、离心，去除上清，得到组织块。
[0033]具体地，将所述华通氏胶放入50ml离心管中，剪成1～4mm组织匀浆块，再加入0.9％生理盐水至液体总体积为45ml，混匀，在600g的离心力下离心5min，去除上清，得到组织块。如此，经过剪碎、混匀、离心，有效去除华通氏胶中的杂质。
[0034]S30、将所述组织块和完全培养基混合，得到组织块液。
[0035]得到的组织块液中组织块的浓度要适宜，以利于接种和培养。所述组织块液中，所述组织块的浓度为1.0g/ml。
[0036]S40、将所述组织块液接种至T75培养瓶中，加入完本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人脐带间充质干细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S10、从脐带剥取华通氏胶；S20、将所述华通氏胶剪碎后，加入生理盐水，混匀、离心，去除上清，得到组织块；S30、将所述组织块和完全培养基混合，得到组织块液；S40、将所述组织块液接种至T75培养瓶中，加入完全培养基，培养至细胞融合度为85％，洗涤、消化、终止消化，收集终止消化后的细胞，得到P0代细胞；S50、将所述P0代细胞接种至T175培养瓶中，加入完全培养基，继续培养，得到人脐带间充质干细胞。2.如权利要求1所述的人脐带间充质干细胞的制备方法，其特征在于，所述组织块液中，所述组织块的浓度为1.0g/ml。3.如权利要求1所述的人脐带间充质干细胞的制备方法，其特征在于，步骤S40中，将0.5～1ml所述组织块液接种至T75培养瓶中。4.如权利要求3所述的人脐带间充质干细胞的制备方法，其特征在于，步骤S40中，将1.0ml所述组织块液接种至T75培养瓶中。5.如权利要求1所述的人脐带间充质干细胞的制备方法，其特征在于，步骤S40中，加入完全培养基5～15ml。6.如权利要求1所述的人脐带间充质干细胞的制备方法，其特征在于，步骤S40中，使用胰酶溶液消化，且所述胰酶溶液中，胰酶的浓度为0.625～2.5g/L。7.如权利要求1所述的人脐带间充质干细胞的制备方法，其特征在于，步骤S50中，所述接种的密度...

【专利技术属性】
技术研发人员：任浩，姜舒，张芸，刘赢滢，谢亮，赵传鑫，李欣，纪惜銮，翁东旭，黄伟，李结明，
申请(专利权)人：深圳市茵冠生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：