一种改善间充质干细胞同质性和降低其免疫原性的组合物制造技术

本发明专利技术涉及细胞培养领域，尤其涉及一种改善间充质干细胞同质性和降低其免疫原性的组合物。本发明专利技术的组合物包含三种小分子化合物A、C和Y，其中：所述化合物A的化学式为C

【技术实现步骤摘要】
一种改善间充质干细胞同质性和降低其免疫原性的组合物


[0001]本专利技术涉及细胞培养领域，尤其涉及一种改善间充质干细胞同质性和降低其免疫原性的组合物。

技术介绍

[0002]间充质干细胞(MSCs)是一种具有贴壁生长特性的非造血干细胞类型的成体干细胞，具有易于分离扩增，多向分化、向病损组织迁移、旁分泌、免疫调节等能力，决定了其在细胞治疗中的应用前景。由于骨髓、脐带等组织中提取分离的MSCs数量有限，而用于治疗的MSCs数量需求庞大，MSCs分离后需要经过较长时期的体外培养扩增。
[0003]虽然相关临床试验和基础研究报道证实，MSCs对于自身免疫性等疾病治疗效果显著。然而，越来越多的研究也指出，MSCs在临床治疗中难以维持稳定的治疗效果，并指出主要原因在于体外培养的MSCs存在较高的异质性。MSCs出现异质性的原因如下：首先，MSCs来源于不同个体、类型的组织，造成最初始的异质性；其次，MSCs的分离、纯化方法的差异，对细胞异质性也有较大影响；而在体外扩增阶段，MSCs受到环境中如化合物，辐射等各种刺激性因素的影响，部分细胞出现DNA损伤或发生基因突变，导致细胞异质性进一步增加。
[0004]此外，MSCs能用于细胞治疗的另一大优势在于MSCs具备较低的免疫原性，因此患者在接受细胞静脉输注后可避免发生免疫排斥反应。然而，在体外扩增过程中，随着细胞代数的增长，MSCs表面的免疫原性相关表面标志物如HLA
‑
DR家族蛋白的升高，使得细胞的安全性逐渐降低。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供一种改善间充质干细胞同质性和降低其免疫原性的组合物。本专利技术的组合物可改善MSCs在体外培养扩增过程中的同质性，同时抑制其免疫原性相关表面标志物的升高。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：提供一种改善间充质干细胞同质性和降低其免疫原性的组合物ACY，所述组合物包含三种小分子化合物A、C和Y，其中：
[0007]所述化合物A的化学式为C
25
H
19
N5S，CAS号为909910
‑
43
‑
6，分子式为：
[0008][0009]所述化合物C的化学式为C
22
H
18
Cl2N8，CAS号为252917
‑
06
‑
9，分子式为：
[0010][0011]所述化合物Y的化学式为C
14
H
21
N3O，CAS号为146986
‑
50
‑
7，分子式为：
[0012][0013]本专利技术发现添加ACY后，MSCs的核质比有明显升高、周长和细胞直径有明显下降，且细胞直接的形态差异变小(SD值明显降低)，说明形态异质性降低。对细胞核质比、周长和直径进行综合数据分析后进行三维散点图绘制，可以明显看出添加ACY后细胞坐标值更加聚集，同质性更高；添加ACY的细胞随着代数的升高，细胞表面HLA
‑
DR的表达上调。同时，测序结果也表明，与对照组相比，HLA
‑
DR的亚型如HLA
‑
DRA、HLA
‑
DRB1、HLA
‑
DRB3、HLA
‑
DRB5等在ACY组的各个细胞代数中均有所下调，表明本专利技术的组合物ACY不仅可改善MSCs在体外培养扩增过程中的同质性，还同时抑制其免疫原性相关表面标志物的升高。
[0014]作为本专利技术所述组合物的优选实施方式，所述组合物ACY中A的含量为0.5μM
‑
8μM，C的含量为1μM
‑
9μM，Y的含量为2μM
‑
20μM。
[0015]本专利技术将MSCs在单独添加不同浓度A、C或Y的条件下培养一段时间之后，使用CCK8试剂盒进行检测，分析结果显示，A的浓度在8μM以内、C的浓度在9μM以内、Y的浓度在20μM以内的条件下，MSCs的活力未出现明显衰减。
[0016]本专利技术同时提供一种间充质干细胞培养基，所述培养基包含所述的组合物ACY作为功能成分。
[0017]作为本专利技术所述培养基的优选实施方式，所述培养基中还包含基础成分，所述基础成分包含基础培养基、营养成分或促生长成分。
[0018]作为本专利技术所述培养基的优选实施方式，所述基础培养基包括商品化的DMEM培养基、1640培养基、F12培养基、DMEM/F12培养基和MEM培养基中的一种或多种；
[0019]所述营养成分包括白蛋白、谷氨酰胺、胰岛素、转铁蛋白、亚硒酸钠、非必须氨基酸、脂质补充液、微量元素补充液、血清素、维生素补充液和腐胺中的一种或多种；
[0020]所述促生长成分包括生长因子、激素、β
‑
巯基乙醇中的一种或多种。
[0021]作为本专利技术所述培养基的优选实施方式，所述生长因子包括EGF、FGF、IGF和PDGF中的一种或多种。
[0022]作为本专利技术所述培养基的优选实施方式，所述激素包括孕酮和氢化可的松中的一种或多种。
[0023]作为本专利技术所述培养基的优选实施方式，所述基础成分还包含血清成分。
[0024]作为本专利技术所述培养基的优选实施方式，所述血清成分包括血清或血清替代物，所述血清替代物包括商品化常用的血清替代品，所述血清替代品包括血小板裂解物、B27、NeuroCult
TM SM1中的一种或多种。
[0025]本专利技术还提供一种改善间充质干细胞同质性和降低其免疫原性的方法，所述方法为在间充质干细胞扩增过程中在培养基中添加所述组合物ACY。
[0026]本专利技术的有益效果：
[0027]本专利技术ACY的小分子组合可显著改善MSCs的体外扩增(如促进细胞活力，促进增殖和维持MSCs的干细胞潜能等)，此外，ACY组合可以显著改善MSCs的同质性，并降低扩增过程中细胞的免疫原性。
附图说明
[0028]图1：通过CCK8检测MSCs在单独添加不同浓度的A、C、Y后细胞活力的变化(Data are shown as mean
±
SD)。
[0029]图2：通过CCK8检测MSCs在单独或组合添加A、C、Y后细胞活力的变化(Data are shown as mean
±
SD)。
[0030]图3：通过EDU检测MSCs在单独或组合添加A、C、Y后细胞增殖能力的变化(Data are shown as mean
±
SD)。
[0031]图4：MSCs在对照组和ACY刺激组中成骨、成软骨和成脂肪染色；其中(A)：光密度分析；(B)：对分化效果进行标准化(Data are shown as mean
±
SD)。
[0032]图5：各组MSCs核质比的变化；其中(本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种改善间充质干细胞同质性和降低其免疫原性的组合物ACY，其特征在于，所述组合物包含三种小分子化合物A、C和Y，其中：所述化合物A的化学式为C
25
H
19
N5S，CAS号为909910
‑
43
‑
6，分子式为：所述化合物C的化学式为C
22
H
18
Cl2N8，CAS号为252917
‑
06
‑
9，分子式为：所述化合物Y的化学式为C
14
H
21
N3O，CAS号为146986
‑
50
‑
7，分子式为：2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物ACY中A的含量为0.5μM
‑
8μM，C的含量为1μM
‑
9μM，Y的含量为2μM
‑
20μM。3.一种间充质干细胞培养基，其特征在于，所述培养基包含权利要求1所述的组合物ACY作为功能成分。4.根据权利要求3所述的培养基，其特征在于，所述培养基中还包含基础成分，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：张琪，贾昌昌，奉源，邱东波，
申请(专利权)人：中山大学附属第三医院，
类型：发明
国别省市：