一种表达新型鹅星状病毒衣壳蛋白ORF2的重组杆状病毒的构建方法技术

本发明专利技术涉及一种表达新型鹅星状病毒衣壳蛋白ORF2的重组杆状病毒的构建方法，包括以下步骤：（1）构建GAstV

【技术实现步骤摘要】
一种表达新型鹅星状病毒衣壳蛋白ORF2的重组杆状病毒的构建方法


[0001]本专利技术涉及一种表达新型鹅星状病毒衣壳蛋白ORF2的重组杆状病毒的构建 方法，属于生物


技术介绍

[0002]鹅星状病毒(Goose Astrovirus,GAstV)属于星状病毒科,禽星状病毒属。 GAstV可以导致以肝脏、脾脏和肾脏等内脏器官表面以及关节腔有大量的尿酸盐 沉积的鹅痛风症状，对雏鹅的致病力较强，致死率较高。随着我国养鹅业的迅速 发展，鹅星状病毒的爆发给养鹅业造成了严重的经济损失。但是目前尚无快速特 异检测GAstV的血清学方法商品化GAstV疫苗，为了减少GAstV给我国养鹅业 带来的损失，进一步研究建立诊断方法和生产GAstV
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ORF2亚单位疫苗是很有必 要的。本专利技术通过构建含GAstV
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ORF2蛋白的重组杆状病毒载体，并利用杆状病 毒表达系统成功在昆虫细胞中表达ORF2蛋白，为新型鹅星状病毒检测方法的建 立及ORF2基因功能研究奠定了基础。

技术实现思路

[0003]本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种表达新型鹅星状病毒衣壳蛋白ORF2的重组杆状病毒的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）构建GAstV
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ORF2基因重组杆状病毒表达载体：设计引物分别扩增GAstV的ORF2基因与pFastBacHTA线性化载体，并连接转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞并涂于加有Amp+的LB琼脂平板，过夜培养，菌落PCR鉴定阳性克隆，构建重组供体pFastBacHTA
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GAstV
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ORF2；（2）表达重组GAstV
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ORF2蛋白的杆状病毒包装和传代：将构建成功的pFastBacHTA
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GAstV
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ORF2质粒转化进DH10Bac感受态细胞，利用蓝白斑筛选技术获得重组的阳性克隆；挑取阳性的单克隆，37℃过夜扩大培养后，提取质粒，同时取不含目的片段的杆状病毒转移载体质粒作为阴性对照，利用pUC/M13 Forward和pUC/M13 Reverse引物，PCR扩增验证阳性克隆为成功携带ORF2基因的杆状病毒质粒；（3）将携带有GAstV
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ORF2基因的杆状病毒质粒转染进Sf9细胞，并在27℃无CO2培养箱中培养5
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7天，每天观察细胞病变情况；当细胞病变达到70%时收集细胞上清，放入
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80℃保存；进行病毒的传代，传至第3代时，作为种毒保存并扩大培养，得到表达新型鹅星状病毒衣壳蛋白ORF2的重组杆状病毒。2.根据权利要求1所述的一种表达新型鹅星状...

【专利技术属性】
技术研发人员：高巍，张辛耘，叶建强，任丹，秦爱建，万志敏，李拓凡，谢泉，邵红霞，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：