一种制备包裹外源蛋白的多角体的方法技术

本发明专利技术涉及固定化蛋白领域，具体涉及一种制备包裹外源蛋白的多角体的方法。通过基因工程方法利用杆状病毒表达系统在家蚕培养细胞或家蚕中共表达家蚕质型多角体蛋白、带有家蚕质型多角体病毒结构蛋白VP5标签以及蛋白酶特异性断裂位点的融合外源蛋白，从而形成包裹外源蛋白质的多角体。形成的多角体可以通过简单的差速离心实现纯化；多角体对其包裹的外源蛋白有保护和缓释作用。纯化的多角体在碱性条件下裂解后，用盐酸溶液调pH至多角体蛋白等电点，可以通过离心使多角体蛋白沉淀，而融合外源蛋白留存在上清中，从而可以快速、方便地获得融合外源蛋白；融合外源蛋白通过相应的蛋白酶酶切移除VP5标签可以方便地获得更接近天然的外源蛋白。的外源蛋白。的外源蛋白。

【技术实现步骤摘要】
一种制备包裹外源蛋白的多角体的方法


[0001]本专利技术涉及病毒基因工程领域，具体涉及一种制备包裹外源蛋白的多角体的方法。

技术介绍

[0002]药物载体能改变药物进入体内的方式、影响在体内的分布、控制药物的释放速度、将药物输送到靶向器官。药物载体的种类繁多，较为常见的有微囊与微球、纳米粒等；其中，微囊是用高分子材料将固态或液态药物包裹成为的药库型微型胶囊；而微球是指药物分散或被吸附在高分子聚合物基质中而形成的微小球状实体；纳米粒一般是指10
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100nm的含药粒子。
[0003]微球和微囊制剂可提高药物在体内的局部有效浓度、具缓释和长效性、提高药物的稳定性等；纳米粒可改善难溶性药物的口服吸收、延长药物的体内循环时间、增强药物的靶向性、用作生物大分子的特殊载体等。制作微囊、微球、纳米粒的载体材料通常有明胶、阿拉伯胶、白蛋白、淀粉、壳聚糖、海藻酸盐、醋酸纤维素、乙基纤维素、聚乳酸、聚氨基酸、聚羟基丁酸酯、聚乳酸
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羟基乙酸共聚物等。不管是微球、微囊，还是纳米粒制作工艺较为复杂，影响因素较多。生物活性蛋本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种制备包裹外源蛋白的多角体的方法，其特征在于，包括下列步骤：(1) 将家蚕质型多角体病毒多角体蛋白基因的编码序列克隆进Bac
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to
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Bac表达系统载体的多角体基因启动子下游，构建重组转移质粒；（2）合成由多克隆位点、蛋白酶酶切位点、家蚕质型多角体病毒VP5序列、终止密码子依次串联的MCS
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VP5序列；所述家蚕质型多角体病毒VP5序列为：GGACTGTCTCCAATAGCTTTGGCCCAGAAAAAACACGAAATGATGCTGCACACACACGAAATCCACAGCATGGACATCGATGGCTCAATT（3）将MCS
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VP5序列克隆至步骤（1）的重组转移质粒的P10启动子的下游获得pFast
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VP5
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Polh；（4）将去除终止密码的编码目的蛋白的序列克隆在pFast
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VP5
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Polh质粒中的MCS
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VP5序列的上游或MCS
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VP5序列中的多克隆位点区域，获得pFast
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Pr
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VP5
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Polh；(5)将pFast
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Pr
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VP5
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Polh转化感受态细胞，涂布于LB琼脂平板上，培养后挑取白色菌落，提取重组Bacmid
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Pr
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VP5
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Polh DNA；(6) 将重组Bacmid
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Pr
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VP5
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Polh DNA转染家蚕培养细胞，培养至细胞发病后，收集细胞培养上清，获重组病毒BmNPV
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Pr
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VP5
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Polh；(7) 重组病毒BmNPV
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Pr
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：贡成良，薛仁宇，胡小龙，朱敏，曹广力，张梓瑶，冯永杰，
申请(专利权)人：苏州大学，
类型：发明
国别省市：