一种提高大肠杆菌裂解过程中质粒稳定性的方法技术

本发明专利技术提供了一种提高大肠杆菌裂解过程中质粒稳定性的方法。具体步骤如下：1）菌体重悬，所述重悬液含二糖类化学物质；2）碱裂解；3）中和；4）澄清；5）浓缩换液；6）分子筛层析；7）制剂换液。本发明专利技术的工艺简便，通过在菌体重悬液中添加一定浓度的二糖（如蔗糖、海藻糖等），保护大肠杆菌碱裂解过程中的超螺旋质粒，进而简化下游层析纯化工艺，并提高质粒回收率，方便快捷，适于推广应用。适于推广应用。适于推广应用。

【技术实现步骤摘要】
一种提高大肠杆菌裂解过程中质粒稳定性的方法


[0001]本专利技术涉及一种质粒生产方法，尤其涉及一种提高质粒稳定性的方法。

技术介绍

[0002]质粒是小的环状超螺旋双链DNA，包含染色体外遗传信息，可以在细菌内自主复制。质粒是基因治疗和疫苗中最重要的工具之一，主要有3种应用形式：1）直接体内注射，如DNA疫苗和裸质粒基因载体；2）在体外转染改造靶细胞，如T细胞，然后回输体内；3）在体外多质粒共转染细胞，生产病毒载体，如腺相关病毒（adeno
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associated virus,AAV）和慢病毒（ Lentivirus，LV），继而用于体内或体外基因治疗。
[0003]无论裸质粒还是包装病毒载体，最终都是将质粒携带的目的基因导入靶细胞，达到治疗或预防疾病的目的。高质量、高纯度的超螺旋质粒是确保裸质粒、AAV、LV等基因载体安全性和有效性的前提条件。质粒生产，以大肠杆菌工作库甘油菌为起始原料，经复苏、发酵、收获、裂解、澄清、纯化、制剂换液和过滤分装得到成品质粒。质粒有多种拓扑结构，包括超螺旋质粒、开环质粒、线性质粒，其中本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种提高大肠杆菌裂解过程中超螺旋质粒稳定性的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）菌体重悬：将发酵收获的湿菌体加入重悬液中搅拌均匀，所述重悬液包含蔗糖或海藻糖；（2）裂解：将重悬液与裂解液混合搅拌均匀；（3）中和：在所述的裂解液中加入中和液，混合搅拌均匀；（4）澄清：将中和后的裂解液过滤或离心，得到澄清收获液；（5）浓缩换液：澄清收获液进行切向流过滤，将收获液浓缩换液至重悬液中；（6）层析纯化：将浓缩换液的样品进行一步层析纯化，获得层析纯化后的质粒；（7）制剂换液：将层析纯化后的质粒进行切向流过滤，浓缩换液至缓冲液中，从而得到纯化后质粒成品。2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述蔗糖或海藻糖的质量浓度为1%～10%。3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述蔗糖或海藻糖的质量浓度为2.5%～5%。4.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤（1）中所述重悬液...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡海兵，韦厚良，潘讴东，由庆睿，贾国栋，
申请(专利权)人：和元生物技术上海股份有限公司，
类型：发明
国别省市：