噬菌体内溶素在提取细菌胞内物质中的用途及其试剂盒和提取方法技术

本发明专利技术涉及一种噬菌体内溶素在提取细菌胞内物质中的用途及其试剂盒和提取方法。该噬菌体内溶素可用于提取细菌胞内物质；试剂盒包含上述噬菌体内溶素；提取方法包含：采用上述试剂盒对细菌胞内物质进行提取。本发明专利技术通过噬菌体内溶素的添加，能够提高细菌胞内物质的提取量；该方法具有操作简单、特异性强、提取率高等优点。等优点。

【技术实现步骤摘要】
噬菌体内溶素在提取细菌胞内物质中的用途及其试剂盒和提取方法


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种噬菌体内溶素在提取细菌胞内物质中的用途及其试剂盒和提取方法。

技术介绍

[0002]金黄色葡萄球菌是常见的致病菌，可产生多种毒素和酶等毒力因子，能引起感染者食物中毒、假膜性肠炎、化脓性炎症和败血症等疾病，给人类造成极大威胁与损害。因此，快速、准确、简便地检测金黄色葡萄球菌，对食品安全质量控制及临床检测具有重要作用。
[0003]目前，分子生物学检测技术因其高灵敏度、高特异性及操作简单、迅速等特点，被广泛的应用于食源性致病菌检测以及临床样品致病菌检测等研究，而PCR等分子生物学实验的结果的灵敏性、特异性、检测限则与金黄色葡萄球菌基因组DNA的提取质量直接相关。
[0004]因此，亟需一种高效提取金黄色葡萄球菌基因组DNA的方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题至少之一。为此，本专利技术提供了一种噬菌体内溶素在提取细菌胞内物质中的用途及其试剂盒和提取方法，本专利技术通过噬菌体内溶素的添加，能够提升细菌胞内物质的提取量。
[0006]需要说明的是，本专利技术是基于专利技术人的下列工作而完成的：
[0007]金黄色葡萄球菌为革兰阳性细菌，其具有较厚的细胞壁，而且90％的金黄色葡萄球菌细胞表面都含有蛋白A，蛋白A与细胞壁中的肽聚糖结合成致密的共价交联结构，增加了提取基因组DNA的难度。如今普遍采用化学方法提取DNA，主要依赖溶菌酶并结合其它裂解脂类和蛋白质的酶，但是，金黄色葡萄球菌对溶菌酶具有抗性。传统的提取方法，如直接水煮法、SDS
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NaCl法、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法都存在破壁不彻底的不足，从而导致金黄色葡萄球菌基因组DNA提取率低、提取量少，不利于后续PCR检测，无法很好满足金黄色葡萄球菌快速检测的需求。
[0008]噬菌体内溶素(endolysin)能特异性裂解细菌细胞壁，由于噬菌体内溶素被认为是一种有前途的抗生素替代品，本领域技术人员大多对噬菌体内溶素是如何裂解细菌以及怎样优化噬菌体内溶素以达到高效清除细菌等方面进行研究，而对于噬菌体内溶素用于提取细菌DNA方面的研究鲜有报道。
[0009]专利技术人发现，金黄色葡萄球菌噬菌体内溶素能特异性裂解金黄色葡萄球菌细胞壁，导致金黄色葡萄球菌胞内物质释放，可极大提升金黄色葡萄球菌基因组DNA的提取量。并且，专利技术人还发现，通过进一步加入NaCl能够抑制金黄色葡萄球菌自身的核酸酶，防止基因组DNA被降解，可进一步提升金黄色葡萄球菌基因组DNA的提取量，利于后续PCR检测，实现金黄色葡萄球菌快速检测。
[0010]在本专利技术的一个方面，本专利技术提出了一种噬菌体内溶素在提取细菌胞内物质中的
用途。根据本专利技术的实施例，将噬菌体内溶素加入到菌液中，噬菌体内溶素能特异性裂解细菌细胞壁，导致细菌胞内物质释放，可极大提升细菌胞内物质的提取量，尤其是金黄色葡萄球菌。
[0011]根据本专利技术的实施例，上述用途还可以进一步包含如下附加技术特征的至少之一：
[0012]根据本专利技术的实施例，所述细菌为革兰氏阳性菌，所述噬菌体内溶素来源于所述细菌对应的噬菌体。专利技术人通过大量试验发现，在提取细菌胞内物质的过程中，通过添加来源于该细菌的噬菌体内溶素，能够特异性裂解该细菌细胞壁，使该细菌胞内物质释放，提升细菌胞内物质的提取量。
[0013]根据本专利技术的实施例，所述细菌选自金黄色葡萄球菌。根据本专利技术的实施例，通过将金黄色葡萄球菌噬菌体内溶素加入到金黄色葡萄球菌菌液中，极大提升了金黄色葡萄球菌胞内物质的提取量，尤其是对金黄色葡萄球菌基因组DNA进行提取，可大大提升了金黄色葡萄球菌基因组DNA的提取量，具有特异性强、DNA提取率高等优点。
[0014]根据本专利技术的实施例，所述胞内物质包括选自蛋白、RNA或DNA中的至少之一。
[0015]在本专利技术的又一方面，本专利技术提出了一种用于提取细菌胞内物质的试剂盒。根据本专利技术的实施例，所述试剂盒包含噬菌体内溶素。根据本专利技术的实施例，在提取细菌胞内物质的过程中，通过添加噬菌体内溶素，能够裂解细菌细胞壁，使细菌胞内物质释放，提升细菌胞内物质的提取量。
[0016]根据本专利技术的实施例，所述胞内物质包括选自蛋白、RNA或DNA中的至少之一。
[0017]根据本专利技术的实施例，所述试剂盒用于提取所述细菌的DNA时，所述试剂盒进一步包含NaCl。专利技术人发现，噬菌体内溶素在裂解细胞壁时，也会一定程度上使DNA发生降解，从而影响收率。进而，专利技术人经过大量实验发现，通过添加NaCl，能够抑制DNA的降解，同时不影响噬菌体内溶素对细胞壁的裂解作用，可进一步提升细菌基因组DNA的提取量。因此，该试剂盒具有DNA提取率高、提取效果好等优点。
[0018]根据本专利技术的实施例，所述细菌为革兰氏阳性菌，所述噬菌体内溶素来源于所述细菌对应的噬菌体。专利技术人通过大量试验发现，在提取细菌DNA过程中，通过添加来源于该细菌的噬菌体内溶素，能够特异性裂解该细菌细胞壁，使该细菌胞内物质释放，提升细菌基因组DNA的提取量，具有特异性强、DNA提取率高等优点。
[0019]根据本专利技术的实施例，所述细菌选自金黄色葡萄球菌。根据本专利技术的实施例，通过将金黄色葡萄球菌噬菌体内溶素加入到金黄色葡萄球菌菌液中，极大提升了金黄色葡萄球菌基因组DNA的提取量。
[0020]在本专利技术的另一方面，本专利技术提出了一种提取细菌胞内物质的方法。根据本专利技术的实施例，所述方法采用上述试剂盒对所述细菌的胞内物质进行提取。由此，采用上述方法，能够提升细菌胞内物质的提取量，并且，具有操作简单、特异性强、提取率高等优点。
[0021]在本专利技术的另一方面，本专利技术提出了一种采用上述试剂盒提取细菌DNA的方法。根据本专利技术的实施例，所述方法包含：S1、提供菌悬液；S2、将所述菌悬液与噬菌体内溶素以及任选的NaCl混合后进行裂解反应，得到混合液；S3、去除所述混合液中的蛋白，然后收集DNA。由此，采用上述方法，能够提升细菌基因组DNA的提取量，并且，具有操作简单、特异性强、DNA提取率高等优点。
[0022]根据本专利技术的实施例，制备所述菌悬液的方法包括：将菌液离心，取沉淀，然后加入缓冲液复溶，制得菌悬液。由此，通过离心弃上清，去除原菌液中的杂质，然后通过缓冲液制得菌悬液，方便后期加入噬菌体内溶素对细菌细胞壁进行裂解。
[0023]根据本专利技术的实施例，所述缓冲液包含Tris
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HCl缓冲液。由此，实现对细菌沉淀的复溶，得到菌悬液。
[0024]根据本专利技术的实施例，NaCl可与Tris
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HCl缓冲液配制成缓冲液，于噬菌体内溶素加入前加入，也可单独于噬菌体内溶素加入后加入，具体加入方式不受限制。
[0025]根据本专利技术的实施例，所述缓冲液由NaCl和Tris
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HCl缓冲液组成。专利技术人通过大量试验发现，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种噬菌体内溶素在提取细菌胞内物质中的用途。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述细菌为革兰氏阳性菌，所述噬菌体内溶素来源于所述细菌对应的噬菌体；任选地，所述细菌选自金黄色葡萄球菌；任选地，所述胞内物质包括选自蛋白、RNA或DNA中的至少之一。3.一种用于提取细菌胞内物质的试剂盒，其特征在于，包含噬菌体内溶素；任选地，所述胞内物质包括选自蛋白、RNA或DNA中的至少之一。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒用于提取所述细菌的DNA时，所述试剂盒进一步包含NaCl；任选地，所述细菌为革兰氏阳性菌，所述噬菌体内溶素来源于所述细菌对应的噬菌体；任选地，所述细菌选自金黄色葡萄球菌。5.一种提取细菌胞内物质的方法，其特征在于，包含：采用权利要求3或4所述的试剂盒对所述细菌的胞内物质进行提取。6.一种采用权利要求3或4所述的试剂盒提取细菌DNA的方法，其特征在于，包含：S1、提供菌悬液；S2、将所述菌悬液与噬菌体内溶素以及任选的NaCl混合后进行裂解反应，得到混合液；S3、去除所述混合液中的蛋白，然后收集DNA。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，制备所述菌悬液的方法包括：将菌液离心，取沉淀，然后加入缓冲液复溶，制得菌悬液；任选地，所述缓冲液包含Tris
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【专利技术属性】
技术研发人员：李建，赵琦，詹文瑶，赵锋，李之琦，李龙，唐海洋，肖雪怡，万璐，
申请(专利权)人：成都大学，
类型：发明
国别省市：