一种用于宫颈癌甲基化检测的引物和探针组合、试剂盒及其使用方法技术

本发明专利技术一种用于宫颈癌甲基化检测的引物和探针组合、试剂盒及其使用方法，所述引物和探针用于检测PAX1、EPB41L3和FAM19A4的基因组合；所述引物和探针组合包括PAX1正向引物F、PAX1反向引物R、PAX1探针P、EPB41L3正向引物F、EPB41L3反向引物R、EPB41L3探针P、FAM19A4正向引物F、FAM19A4反向引物R和FAM19A4探针P；他们的核苷酸序列分别如SEQ ID NO：1～SEQ ID NO：9所示。本发明专利技术采用的探针具有高特异性和高敏感性的优势，可准确稳定的检测出低至浓度1ng/μL，5％甲基化率；并且所述探针具有单碱基分辨率，可特异区分甲基化和未甲基化的DNA。可特异区分甲基化和未甲基化的DNA。可特异区分甲基化和未甲基化的DNA。

【技术实现步骤摘要】
一种用于宫颈癌甲基化检测的引物和探针组合、试剂盒及其使用方法


[0001]本专利技术涉及肿瘤基因检测
，尤其涉及一种用于宫颈癌甲基化检测的引物和探针组合、试剂盒及其使用方法。

技术介绍

[0002]宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一，患病的高峰年龄为40～60岁，近年来宫颈癌的发病年龄呈年轻化趋势。研究表明，宫颈癌的诱发，与人类乳头瘤病毒(HPV)的病原体有关。高危型HPV感染后，宫颈癌的发生需要经历多个步骤：从高危HPV持续感染，到癌前病变(CIN1期
→
CIN2期
→
CIN3期)，最后才发展成浸润癌。宫颈癌的发生发展，尤其是癌前病变到浸润癌，绝大多数病人需要经历很长一段时间。高危HPV感染后经3～5年可以进展为高级别病变的CIN2期和CIN3期，而进一步发展为浸润癌则需20～30年，癌前病变及宫颈癌早期可以没有任何症状。癌前病变时间很长，如果在这个阶段通过筛查早发现，尽早采取有效的干预治疗措施，则可以较好的避免癌前病变进一步发展成癌症，大大降低宫颈癌的发生率和死亡率，从而达到预防宫颈癌的目的。
本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于宫颈癌甲基化检测的引物和探针组合，其特征在于，所述引物和探针用于检测PAX1、EPB41L3和FAM19A4的基因组合；所述引物和探针组合包括PAX1正向引物F、PAX1反向引物R、PAX1探针P、EPB41L3正向引物F、EPB41L3反向引物R、EPB41L3探针P、FAM19A4正向引物F、FAM19A4反向引物R和FAM19A4探针P；所述PAX1正向引物F、PAX1反向引物R、PAX1探针P、EPB41L3正向引物F、EPB41L3反向引物R、EPB41L3探针P、FAM19A4正向引物F、FAM19A4反向引物R和FAM19A4探针P的核苷酸序列分别如SEQ ID NO：1～SEQ ID NO：9所示。2.根据权利要求1所述的一种用于宫颈癌甲基化检测的引物和探针组合，其特征在于，所述PAX1探针P、EPB41L3探针P和FAM19A4探针P的5
’
端采用FAM标记；所述PAX1探针P、EPB41L3探针P和FAM19A4探针P的3
’
端采用MGB标记。3.一种用于宫颈癌甲基化检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1或2所述的引物和探针组合、β
‑
actin正向引物F、β
‑
actin反向引物R和β
‑
actin探针P；所述β
‑
actin正向引物F、β
‑
actin反向引物R和β
‑
actin探针P的核苷酸序列如SEQ ID NO：10～SEQ ID NO：12所示。4.根据权利要求3所述的一种用于宫颈癌甲基化检测的试剂盒，其特征在于，所述β
‑
actin探针P的5
’
端采用VIC标记；所述β
‑
actin探针P的3
’
端采用MGB标记。5.根据权利要求3或4所述的一种用于宫颈癌甲基化检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括10
×
PCR Buffer，Taq酶、dNTPs、无核酸酶水、阳性对照和阴性对照。6.根据权利要求5所述的一种用于宫颈癌甲基化检测的试剂盒，其特征在于，所述阳性对照包括来自宫颈癌细胞株CaSki的DNA；所述阴性对照包括来自宫颈癌细胞株C33A的DNA。7.一种如权利要求3～6任一所述试剂盒的使用方法，其特征在于方法包括以下步骤：1) 提取待检样本DNA；2) 将所述待检样本DNA经重亚硫酸盐转化处理，得到转化后的DNA；3) 以所述转化后的DNA为模板，利用如权利要求2或3所述的引物和探针组合进行PCR扩增反应，得到荧光检测结果；4) 利用所述荧光检测结果，对待检样本进行判定，当β
‑
actin Ct≤34，根据PAX1、EPB41L3和FAM19A4基因的ΔCt计算各个基因的甲基化指数（MI），PAX1基因ΔCt＞5，PAX1基因的MI=0，2≤ΔCt≤5，PAX1基因的RI=1，ΔCt＜2，PAX1基因的RI=2，FAM19A4基因...

【专利技术属性】
技术研发人员：王荣，张腾，罗卫峰，宋文文，
申请(专利权)人：浙江自贸区锐赛生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：