用于宫颈癌甲基化检测的引物探针、试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术涉及一种用于宫颈癌甲基化检测的引物和探针组合、试剂盒及其使用方法。所述引物和探针用于检测DAPK2和CADM2基因组合；所述引物探针组合包括DAPK2正向引物F、DAPK2反向引物R、DAPK2探针P、CADM2正向引物F、CADM2反向引物R、CADM2探针P；它们的核苷酸序列分别如SEQ ID NO：1～SEQ ID NO：6所示。本发明专利技术采用的引物探针组合具有高敏感性和高特异性的优势，可准确稳定的检测低至浓度1ng/μL样本，6.67％甲基化率；并且所述探针具有单碱基分辨率，可特异区分甲基化和未甲基化的DNA。可特异区分甲基化和未甲基化的DNA。可特异区分甲基化和未甲基化的DNA。

【技术实现步骤摘要】
用于宫颈癌甲基化检测的引物探针、试剂盒及检测方法


[0001]本专利技术涉及肿瘤基因检测
，具体来说是用于宫颈癌甲基化检测的引物探针、试剂盒及检测方法。

技术介绍

[0002]宫颈癌一直位居妇科恶性肿瘤的前列，是女性最常见的恶性肿瘤之一。多数宫颈癌是由一种称为人乳头瘤病毒的病毒引起的，人乳头瘤病毒(HPV)通过与已经携带该病毒的人的性接触而传播，但并非所有类型的HPV都会导致宫颈癌。
[0003]目前，宫颈癌主要靠检测筛查，按照宫颈癌的筛查策略，有很大机会在还没有发展到宫颈癌的时候，在癌前病变时就发现问题，然后尽早解决，进行宫颈癌及其癌前病变的早期诊断和治疗，从而降低宫颈癌的发病率及死亡率。宫颈癌筛查技术最早采用的是细胞学筛查，可有效发现早期宫颈癌。细胞学检查由妇科医师采用宫颈刮板或宫颈刷收集宫颈脱落细胞，其准确性受取材、涂片、染色和读片等因素影响较大。细胞学技术以宫颈细胞形态学改变为基础，对妇科或细胞病理医师的水平依赖程度较高。另外，HPVDNA检测是分子诊断技术，具有客观、可靠及易于重复，且短时间内可获得结果等优势，提高了筛查本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于宫颈癌甲基化检测的引物和探针组合，其特征在于，所述引物和探针用于检测DAPK2、CADM2的基因组合；所述引物和探针组合包括DAPK2正向引物F、DAPK2反向引物R、DAPK2探针P、CADM2正向引物F、CADM2反向引物R和CADM2探针P；所述DAPK2正向引物F、DAPK2反向引物R、DAPK2探针P、CADM2正向引物F、CADM2反向引物R和CADM2探针P的核苷酸序列分别如SEQ ID NO：1～SEQ ID NO：6所示。2.如权利要求1所述的一种用于宫颈癌甲基化检测的引物和探针组合，其特征在于，所述DAPK2探针P和CADM2探针P的5
’
端采用FAM标记；所述DAPK2探针P和CADM2探针P的3
’
端采用BHQ1标记。3.一种用于宫颈癌甲基化检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1或2所述的引物和探针组合、β﹣actin正向引物F、β﹣actin反向引物R和β﹣actin探针P；所述β﹣actin正向引物F、β﹣actin反向引物R和β﹣actin探针P的核苷酸序列如SEQ ID NO：7～SEQ ID NO：9所示。4.如权利3所述一种用于宫颈癌甲基化检测的试剂盒，其特征在于，所述β﹣actin探针P的5
’
端采用VIC标记；所述β﹣actin探针P的3
’
端采用BHQ1标记。5.如权利要求3所述的一种用于宫颈癌甲基化检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括10
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PCR Buffer、Taq酶、dNTPs、无核酸酶水、阳性对照和阴性对照。6.如权利要求5所述的一种用于宫颈癌甲基化检测的试剂盒，其特征在于，所述阳性对照包括来自宫颈癌细胞株HELA的DNA；所述阴性对照包括来自宫颈癌细胞株C33A的DNA。7.一种如权利要求3～6任一所述试剂盒的检测方法，其特征在于，方法包括以下步骤：S1.提取待测样本DNA；S2.将所述待检样本DNA经重亚硫酸盐转化处理，得转化后DNA；S3.以所述转化后DNA为模板，利用如权利1～4所述引物和探针组合进行PCR扩增反应，得到荧光检测结果；S4.所述荧光检测结果，其中FAM的阈值设置为8000，VIC的阈值设置为12000；S5.利用所述荧光检测结果，对待检样本进行判定；当βactin Ct≤34，根据DAPK2、CADM2基因与β
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【专利技术属性】
技术研发人员：张腾，宋文文，罗卫峰，王荣，
申请(专利权)人：浙江自贸区锐赛生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：