一种用于宫颈癌甲基化检测的引物探针组合、试剂盒及其使用方法技术

本发明专利技术提供了一种用于宫颈癌甲基化检测的引物探针组合，其包括用于检测基因FAM19A4、EPB41L3和PAX1的引物探针组合，具体包括：基因FAM19A4的正向引物F1、反向引物R1、探针P1，基因EPB41L3的正向引物F3、反向引物R3、探针P3，基因PAX1的正向引物F5、反向引物R5、探针P5；或基因FAM19A4的正向引物F2、反向引物R2、探针P2，基因EPB41L3的正向引物F4、反向引物R4、探针P4，基因PAX1的正向引物F6、反向引物R6、探针P6，共8种引物探针组合。各引物和探针的核苷酸序列分别为SEQ ID NO:1

【技术实现步骤摘要】
一种用于宫颈癌甲基化检测的引物探针组合、试剂盒及其使用方法


[0001]本专利技术属于肿瘤基因检测
，具体涉及一种用于宫颈癌甲基化检测的引物探针组合、试剂盒及其使用方法。

技术介绍

[0002]宫颈癌一直位居妇科恶性肿瘤的前列，是发生在子宫颈部位的恶性肿瘤，是女性生殖道最常见的妇科恶性肿瘤。高危型人乳头瘤病毒(HPV)持续感染是宫颈癌的主要危险因素。
[0003]目前，主要靠定期筛查和注射疫苗预防宫颈癌，早期宫颈癌治愈率高，预后好。在还没有发展到宫颈癌的时候发现问题，进行宫颈癌及其癌前病变的早期诊断和治疗，从而降低宫颈癌的发病率及死亡率。宫颈癌筛查技术最早主要依靠细胞学筛查，可有效发现早期宫颈癌。细胞学筛查由妇科医师采用宫颈刮板或宫颈刷收集宫颈脱落细胞，其准确性受取材、涂片、染色和读片等因素影响较大，对妇科或细胞病理医师的水平依赖程度较高。HPV DNA检测也是宫颈癌筛查的主要手段之一，具有客观、可靠及易于重复，且短时间内可获得结果等优势，提高了筛查效率，但HPV DNA检测特异性低(假阳性高)，易造成过度治疗，浪费金钱，引起恐慌本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于宫颈癌甲基化检测的引物探针组合，其特征在于，所述引物探针组合包括用于检测基因FAM19A4、EPB41L3和PAX1的引物探针组合，所述引物探针组合包括：所述基因FAM19A4的正向引物F1、反向引物R1、探针P1，所述基因EPB41L3的正向引物F3、反向引物R3、探针P3，所述基因PAX1的正向引物F5、反向引物R5、探针P5；所述基因FAM19A4的正向引物F2、反向引物R2、探针P2，所述基因EPB41L3的正向引物F4、反向引物R4、探针P4，所述基因PAX1的正向引物F6、反向引物R6、探针P6；所述基因FAM19A4的正向引物F1、反向引物R1、探针P1，所述基因EPB41L3的正向引物F4、反向引物R4、探针P4，所述基因PAX1的正向引物F5、反向引物R5、探针P5；所述基因FAM19A4的正向引物F1、反向引物R1、探针P1，所述基因EPB41L3的正向引物F4、反向引物R4、探针P4，所述基因PAX1的正向引物F6、反向引物R6、探针P6；所述基因FAM19A4的正向引物F1、反向引物R1、探针P1，所述基因EPB41L3的正向引物F3、反向引物R3、探针P3，所述基因PAX1的正向引物F6、反向引物R6、探针P6；所述基因FAM19A4的正向引物F2、反向引物R2、探针P2，所述基因EPB41L3的正向引物F3、反向引物R3、探针P3，所述基因PAX1的正向引物F5、反向引物R5、探针P5；所述基因FAM19A4的正向引物F2、反向引物R2、探针P2，所述基因EPB41L3的正向引物F3、反向引物R3、探针P3，所述基因PAX1的正向引物F6、反向引物R6、探针P6；或所述基因FAM19A4的正向引物F2、反向引物R2、探针P2，所述基因EPB41L3的正向引物F4、反向引物R4、探针P4，所述基因PAX1的正向引物F5、反向引物R5、探针P5；所述正向引物F1、所述反向引物R1、所述探针P1、所述正向引物F2、所述反向引物R2、所述探针P2、所述正向引物F3、所述反向引物R3、所述探针P3、所述正向引物F4、所述反向引物R4、所述探针P4、所述正向引物F5、所述反向引物R5、所述探针P5、所述正向引物F6、所述反向引物R6、所述探针P6的核苷酸序列分别为SEQ ID NO:1
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SEQ ID NO:18。2.根据权利要求1所述的用于宫颈癌甲基化检测的引物探针组合，其特征在于，其中，所述基因FAM19A的所述探针P1和所述探针P2、所述基因EPB41L3的所述探针P3和所述探针P4、所述基因PAX1的所述探针P5和所述探针P6的5
’
端采用FAM标记作为发光基团、3
’
端采用BHQ1标记作为淬灭基团。3.一种用于宫颈癌甲基化检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求1或2所述的用于宫颈癌甲基化检测的引物探针组合中的引物探针组合：所述基因FAM19A4的正向引物F1、反向引物R1、探针P1，所述基因EPB41L3的正向引物F3、反向引物R3、探针P3，所述基因PAX1的正向引物F5、反向引物R5、探针P5；或所述基因FAM19A4的正向引物F2、反向引物R2、探针P2，所述基因EPB41L3的正向引物F4、反向引物R4、探针P4，所述基因PAX1的正向引物F6、反向引物R6、探针P6。4.根据权利要求3所述的用于宫颈癌甲基化检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：β
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actin正向引物F、β
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actin反向引物R和β
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actin探针P；所述β
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actin正向引物F、所述β
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actin反向引物R和所述β
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actin探针P的核苷酸序列分别为SEQ ID NO:19
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SEQ ID NO:21。5.根据权利要求4所述的用于宫颈癌甲基化检测的试剂盒，其特征在于，其中，所述βactin探针P的5
’
端采用VIC标记作为发光基团、3
’
端采用BHQ1标记作为淬
灭基团。6.根据权利要求3
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5中任一项所述的用于宫颈癌甲基化检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：2
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PCR预混液、dNTPs、无核酸酶水、阳性对照和阴性对照。7.根据权利要求6所述的用于宫颈癌甲基化检测的试剂盒，其特征在于，其中，所述阳性对照为来自人子宫颈鳞癌细胞株siha的DNA；所述阴性对照为来自人胚肾细胞株293a的DNA。8.一种如权利要求3
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7中任一项所述的用于宫颈癌甲基化检测的试剂盒的使用方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1，提取待测样本的DNA；步骤2，重亚硫酸盐转化处理所述DNA，得转化后DNA；步骤3，以所述转化后DNA为模板，利用所述试剂盒中的用于宫颈癌甲基化检测的引物探针组合进行PCR扩增反应，得荧光检测结果；步骤4，利用所述荧光检测结果，对所述待测样本进行判定，所述判定的方法如下：FAM的阈值为0.12，VIC的阈值为0.12，ΔCt＝FAM Ct
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V...

【专利技术属性】
技术研发人员：张腾，宋文文，罗卫峰，
申请(专利权)人：浙江自贸区锐赛生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：