具有增强的生物活性的多聚体寡核苷酸的皮下递送制造技术

本公开涉及向受试者皮下施用多聚体寡核苷酸的方法，该多聚体寡核苷酸具有通过共价接头连接的单体亚基。该多聚体寡核苷酸具有配置为相对于以至少约45kD的单体形式皮下施用时相同亚基的体内活性增加的多聚体寡核苷酸内的一个或多个亚基的体内活性的分子量和/或大小和其他特征，使得它们由于肾小球滤过所致的清除降低。本公开还涉及此类多聚体寡核苷酸和合成此类多聚体寡核苷酸的方法。合成此类多聚体寡核苷酸的方法。合成此类多聚体寡核苷酸的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有增强的生物活性的多聚体寡核苷酸的皮下递送
[0001]相关申请信息
[0002]本申请要求于2019年7月30日提交的美国临时专利申请号62/880,591的优先权，在此通过引用将其整体并入本文。


[0003]本公开涉及当多聚体寡核苷酸经由皮下施用递送时在受试者中具有增加的生物活性的多聚体寡核苷酸。

技术介绍

[0004]寡核苷酸现在是得到确认的治疗物类别，其具有多种应用(例如，RNA干扰或RNAi)和正在进行的临床试验。然而，许多因素仍然限制寡核苷酸治疗物，例如将寡核苷酸递送至靶细胞以及随后将足够量的寡核苷酸内化到靶细胞中以实现期望的治疗效果。
[0005]为了解决这些递送和内化限制，多方已经调查了脂质纳米颗粒(LNP，例如脂质球体，包含带正电荷的脂质以中和寡核苷酸的负电荷并促进靶细胞结合和内化)。虽然LNP在某些情况下可以促进递送和内化，但它们存在主要缺点，例如靶向性差和毒性，导致治疗窗口变窄。
[0006]还调查了与靶向特定细胞表面受体的配体缀合的寡核苷酸。使用一种此类的配体N/>‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.包含亚基的多聚体寡核苷酸，其中：所述亚基的每一个独立地包含单链或双链寡核苷酸；其中所述亚基的每一个通过共价接头
·
与另一个亚基连接；其中所述多聚体寡核苷酸包含结构A：其中：每个FM独立地是功能部分、靶向配体或不存在；和n大于或等于零；和条件是所述多聚体寡核苷酸包含至少两个FM。2.根据权利要求1所述的多聚体寡核苷酸，其中存在于所述多聚体寡核苷酸中的FM的至少一个与所述多聚体寡核苷酸的末端共价结合。3.根据权利要求1或2所述的多聚体寡核苷酸，其中存在于所述多聚体寡核苷酸中的FM的至少一个与所述多聚体寡核苷酸的内部亚基共价结合。4.根据权利要求1所述的多聚体寡核苷酸，其中所述多聚体寡核苷酸的末端的每一个分别与FM共价结合，并且所述多聚体寡核苷酸的所述内部亚基的每一个分别与FM共价结合。5.根据权利要求1至4中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中n为1、2或3。6.根据权利要求5所述的多聚体寡核苷酸，其中n为2或3。7.根据权利要求6所述的多聚体寡核苷酸，其中n为2。8.根据权利要求1至4中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中n为4、5、6、7、8、9或10。9.根据权利要求8所述的多聚体寡核苷酸，其中n为4、5或6。10.根据权利要求9所述的多聚体寡核苷酸，其中n为4。11.根据权利要求1至10中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中存在于所述多聚体寡核苷酸中的所有FM都是相同的。12.根据权利要求1至10中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中存在于所述多聚体寡核苷酸中的FM的至少一个不同于也存在于所述寡核苷酸中的任何其他FM。13.根据权利要求1至10中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中存在于所述多聚体寡核苷酸中的每个FM不同于存在于所述寡核苷酸中的任何其他FM。14.根据权利要求1至13中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中所述共价接头
·
中的至少一个与另一个共价接头不同。15.根据权利要求1至13中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中所有的共价接头
·
是不同的。16.根据权利要求1至13中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中所有的共价接头都是相同的。17.根据权利要求1至16中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中至少一个亚基不同于另一个亚基。18.根据权利要求1至16中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中所有的亚基是不同的。
19.根据权利要求1至16中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中所有的亚基是相同的。20.根据权利要求1至19中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中存在于所述多聚体寡核苷酸中的至少一个FM是脂肪酸、石胆酸(LCA)、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)、二十二酸(DCA)、类固醇、开环甾类化合物、脂质、神经节苷脂或核苷类似物、内源性大麻素或维生素。21.根据权利要求1至19中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中存在于所述多聚体寡核苷酸中的FM的至少一个是内体逃逸部分(EEM)或免疫刺激剂。22.根据权利要求21所述的多聚体寡核苷酸，其中存在于所述多聚体寡核苷酸中的所述至少一个FM是内体逃逸部分(EEM)。23.根据权利要求22所述的多聚体寡核苷酸，其中所述EEM是氯喹、肽、蛋白质或流感病毒血凝素(HA2)。24.根据权利要求19所述的多聚体寡核苷酸，其中存在于所述多聚体寡核苷酸中的FM的至少一个是靶向配体。25.根据权利要求24所述的多聚体寡核苷酸，其中所述靶向配体是亲脂部分、适体、肽、抗原结合蛋白、小分子、维生素、N
‑
乙酰半乳糖胺(GalNAc)部分、胆固醇、生育酚、叶酸或其他叶酸受体结合配体、甘露糖或其他甘露糖受体结合配体、2
‑
[3
‑
(1,3
‑
二羧丙基)
‑
脲基]戊二酸(DUPA)或茴香酰胺。26.根据权利要求25所述的多聚体寡核苷酸，其中所述靶向配体是GalNAc部分。27.根据权利要求26所述的多聚体寡核苷酸，其中所述GalNac部分是单触角型GalNAc、双触角型GalNAc或三触角型GalNAc。28.根据权利要求1至27中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中至少一个共价接头
·
是可切割的共价接头。29.根据权利要求28所述的多聚体寡核苷酸，其中所述可切割的共价接头含有酸可切割键、还原剂可切割键、生物可切割键或酶可切割键。30.根据权利要求28或29中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中所述可切割的共价接头在细胞内条件下是可切割的。31.根据权利要求1至30中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中至少一个共价接头
·
是二硫键或式(I)的化合物：其中：S通过共价键或通过接头附接至亚基的3'或5'端；每个R1独立地为C2‑
C
10
烷基、烷氧基或芳基基团R2为硫代丙酸酯或二硫基团；和每个X独立地选自：
32.根据权利要求31所述的多聚体寡核苷酸，其中所述式(I)的化合物包含并且其中S通过共价键或通过接头附接至亚基的3'或5'端。33.根据权利要求31所述的多聚体寡核苷酸，其中所述式(I)的化合物包含并且其中S通过共价键或通过接头附接至亚基的3'或5'端。34.根据权利要求31所述的多聚体寡核苷酸，其中所述式(I)的化合物包含并且其中S通过共价键或通过接头附接至亚基的3'或5'端。35.根据权利要求32
‑
34中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中式(I)的所述共价接头由式(II)的共价连接前体形成：其中：每个R1独立地为C2‑
C
10
烷基、烷氧基或芳基基团；和R2是硫代丙酸酯或二硫基团。36.根据权利要求1
‑
35中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中所述共价接头
·
中的至少一个包含核苷酸接头。37.根据权利要求36所述的多聚体寡核苷酸，其中所述核苷酸接头包含2
‑
6个核苷酸。38.根据权利要求37所述的多聚体寡核苷酸，其中所述核苷酸接头包含4个核苷酸。39.根据权利要求1所述的多聚体寡核苷酸，其包含结构B：
其中：(GalNAc)3是三触角型GalNAc；NH是仲胺；dT是脱氧胸苷残基；和
‑
S
‑
CL
‑
S
‑
是40.根据权利要求1所述的多聚体寡核苷酸，其包含结构C：其中：(GalNAc)3是三触角型GalNAc；NH是仲胺；NH2是伯胺；dT是脱氧胸苷残基；和
‑
S
‑
CL
‑
S
‑
是41.根据权利要求1所述的多聚体寡核苷酸，其包含结构D：其中：(GalNAc)3是三触角型GalNAc；NH是仲胺；EEM是内体逃逸部分；dT是脱氧胸苷残基；和
‑
S
‑
CL
‑
S
‑
是42.根据权利要求1所述的多聚体寡核苷酸，其包含结构E：其中(GalNAc)是单触角型GalNAc；NH是仲胺；dT是脱氧胸苷残基；和
‑
S
‑
CL
‑
S
‑
是43.根据权利要求1
‑
42中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中所述多聚体寡核苷酸为至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％纯的。44.包含亚基的多聚体寡核苷酸，其中：所述亚基的每一个独立地包含单链或双链寡核苷酸，并且其中所述亚基的每一个通过共价接头
·
与另一个亚基连接；所述多聚体寡核苷酸具有配置为相对于以单体形式施用时相同亚基的体内活性增加所述多聚体寡核苷酸内的一个或多个亚基的体内活性的分子量和/或大小；所述多聚体寡核苷酸包含两个亚基至五个亚基；和所述多聚体寡核苷酸配制用于皮下施用。45.根据权利要求44所述的多聚体寡核苷酸，其中所述多聚体寡核苷酸具有配置为降低其由于肾小球滤过引起的清除的分子量和/或大小。46.根据权利要求44或45所述的多聚体寡核苷酸，其中所述多聚体寡核苷酸的分子量为至少约45kD。47.根据权利要求44
‑
46中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中所述多聚体寡核苷酸内的一个或多个亚基的活性增加不依赖于所述多聚体寡核苷酸中的硫代磷酸酯含量。48.根据权利要求44
‑
47中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中所述多聚体寡核苷酸包含两个亚基、三个亚基、四个亚基或五个亚基。49.根据权利要求44
‑
48中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中至少两个亚基基本上不同。50.根据权利要求6所述的多聚体寡核苷酸，其中所有的亚基基本上不同。51.根据权利要求44
‑
50中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中至少两个亚基基本上相同或同一。52.根据权利要求44
‑
50中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中所有的亚基基本上相同或同一。53.根据权利要求44
‑
52中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中每个亚基的长度独立地为10
‑
30、17
‑
27、19
‑
26或20
‑
25个核苷酸。54.根据权利要求44
‑
53中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中一个或多个亚基是双链的。55.根据权利要求44
‑
54中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中一个或多个亚基是单链的。56.根据权利要求44
‑
55中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中所述亚基包含单链和双链寡核苷酸的组合。57.根据权利要求44
‑
56中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中寡核苷酸内的一个或多个核苷酸是RNA、DNA或人工或非天然核酸类似物。58.根据权利要求44
‑
57中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中所述亚基中的至少一个
包含RNA。59.根据权利要求44
‑
58中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中所述亚基中的至少一个包含siRNA、saRNA或miRNA。60.根据权利要求59所述的多聚体寡核苷酸，其中所述亚基中的至少一个包含siRNA。61.根据权利要求59所述的多聚体寡核苷酸，其中所述亚基中的至少一个包含miRNA。62.根据权利要求44
‑
61中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中所述亚基中的至少一个包含反义寡核苷酸。63.根据权利要求44
‑
62中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中所述亚基中的至少一个包含双链siRNA。64.根据权利要求63所述的多聚体寡核苷酸，其中两个或更多个siRNA亚基通过附接至所述siRNA的有义链的共价接头连接。65.根据权利要求63所述的多聚体寡核苷酸，其中两个或更多个siRNA亚基通过附接至所述siRNA的反义链的共价接头连接。66.根据权利要求63所述的多聚体寡核苷酸，其中两个或更多个siRNA亚基通过共价接头连接，所述共价接头附接至第一siRNA的有义链和第二siRNA的反义链。67.根据权利要求44
‑
66中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中所述共价接头
·
中的一个或多个包含可切割的共价接头。68.根据权利要求67所述的多聚体寡核苷酸，其中所述可切割的共价接头含有酸可切割键、还原剂可切割键、生物可切割键或酶可切割键。69.根据权利要求67和68中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中所述可切割的共价接头在细胞内条件下是可切割的。70.根据权利要求44
‑
69中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中至少一个共价接头包含二硫键或式(I)的化合物：其中：S通过共价键或通过接头附接至亚基的3'或5'端；每个R1独立地为C2‑
C
10
烷基、烷氧基或芳基基团；R2为硫代丙酸酯或二硫基团；和每个X独立地选自：71.根据权利要求70所述的多聚体寡核苷酸，其中所述式(I)的化合物包含
并且其中S通过共价键或通过接头附接至亚基的3'或5'端。72.根据权利要求70所述的多聚体寡核苷酸，其中所述式(I)的化合物包含并且其中S通过共价键或通过接头附接至亚基的3'或5'端。73.根据权利要求70所述的多聚体寡核苷酸，其中所述式(I)的化合物包含并且其中S通过共价键或通过接头附接至亚基的3'或5'端。74.根据权利要求70
‑
73中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中所述式(I)的共价接头由式(II)的共价连接前体形成：其中：每个R1独立地为C2‑
C
10
烷基、烷氧基或芳基基团；和R2是硫代丙酸酯或二硫基团。75.根据权利要求44
‑
74中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中所述共价接头
·
中的一个或多个包含核苷酸接头。76.根据权利要求75所述的多聚体寡核苷酸，其中所述核苷酸接头包含2
‑
6个核苷酸。77.根据权利要求76所述的多聚体寡核苷酸，其中所述核苷酸接头包含二核苷酸接头和/或四核苷酸接头。78.根据权利要求44
‑
77中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中每个共价接头
·
是相同的。79.根据权利要求44
‑
77中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中所述共价接头
·
包含两个或更多个不同的共价接头。80.根据权利要求44
‑
79中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中至少两个亚基通过第一亚基的3'末端和第二亚基的3'末端之间的共价接头
·
连接。81.根据权利要求44
‑
79中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中至少两个亚基通过第一亚基的3'末端和第二亚基的5'末端之间的共价接头
·
连接。82.根据权利要求44
‑
79中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中至少两个亚基通过第一亚基的5'末端和第二亚基的3'末端之间的共价接头
·
连接。83.根据权利要求44
‑
79中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中至少两个亚基通过第一
亚基的5'末端和第二亚基的5'末端之间的共价接头
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连接。84.根据权利要求44
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83中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中所述多聚体寡核苷酸进一步包含一个或多个靶向配体。85.根据权利要求44
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83中任一项所述的多聚体寡核苷酸，其中所述亚基中的至少一个是靶向配体。86.根据权利要求84所述的多聚体寡核苷酸，其中所述靶向配体是磷脂、适体、肽、抗原结合蛋白、N
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乙酰半乳糖胺(GalNAc)、叶酸、其他叶酸受体结合配体、甘露糖、其他甘露糖受体结合配体和/或免疫刺激剂。87.根据权利要求84所述的多聚体寡核苷酸，其中所述靶向配体包含N
‑
乙酰半乳糖胺(GalNAc)。88.根据权利要求86所述的多聚体寡核苷酸，其中肽是APRPG、cNGR(CNGRCVSGCAGRC)、F3(KDEPQRRSARLSAKPAPPKPEPKPKKAPAKK)、CGKRK和/或iRGD(CRGDKGPDC)。89.根据权利要求86所述的多聚体寡核苷酸，其中所述抗原结合蛋白是ScFv或VHH。90.根据权利要求86所述的多聚体寡核苷酸，其中所述免疫刺激剂包含CpG寡核苷酸。91.根据权利要求90所述的多聚体寡核苷酸，其中所述CpG寡核苷酸包含序列TCGTCGTTT...

【专利技术属性】
技术研发人员：J，
申请(专利权)人：MPEGLA有限责任公司，
类型：发明
国别省市：