DNA分子、检测人PTEN基因c.1026+32T>G位点突变的寡核苷酸和试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了DNA分子、检测人类PTEN基因c.1026+32T>G位点突变的引物，试剂盒及其使用方法，包括用于扩增PTEN基因c.1026+32T>G位点的引物；PCR反应液；本发明专利技术还提供了一种检测人类PTEN基因c.1026+32T>G位点突变试剂盒使用方法，可用于快速检测基因PTEN c.1026+32T>G位点突变，可能有助于筛选AD易感人群的分子标志物，对易感个体及其家族成员进行疾病的早期预防、早期诊断及早期治疗具有重要的现实意义。义。

【技术实现步骤摘要】
DNA分子、检测人PTEN基因c.1026+32T＞G位点突变的寡核苷酸和试剂盒


[0001]本专利技术属基因检测
，具体涉及检测人类PTEN基因c.1026+32T>G位点突变的引物、试剂盒及其使用方法。

技术介绍

[0002]张力蛋白在10号染色体上同源缺失的磷酸酶(phosphatase and tensin homologue,PTEN)基因又名MMACI/TEP1，定位于人类染色体10q23.3，约218kb，包括9个外显子和8个内含子，其cDNA序列内包含1个由1209个核苷酸组成的开放阅读框架，编码403个氨基酸组成的蛋白质，是迄今为止人们发现的唯一一个具有脂质和蛋白质双重特异性磷酸酶功能的基因。以往的研究表明PTEN具有调节细胞周期、抑制肿瘤细胞生长、抑制血管生成等功能，另外，PTEN还在胚胎的生长、发育、细胞分化、衰老等多种生理功能中起重要作用。近年来有数据表明PTEN可特异性裂解磷脂酰肌醇
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3,4,5
‑
三磷酸(PIP3)的D3磷酸，拮抗PI3K/Akt介导的信号转导通路，从而抑制细胞的增殖、生长和生存。除此之外，在研究PTEN在神经元功能调节以及神经系统疾病发生中的作用时，发现PTEN可调节海马神经元Akt活性和NMDA受体功能。
[0003]阿尔茨海默病(Alzheimer
’
S disease，AD)是一种慢性、神经退行性疾病，且随着年龄增长发病率逐渐增高，多发于65岁以上的老人。AD的主要发病部位是海马、大脑皮层等，其病理特征有老年斑、神经纤维缠绕以及选择性神经元和突触的缺失，临床上早期以记忆障碍和认知障碍为主要表现，晚期主要表现为精神症状。目前AD发病病因和发病机制尚不清楚，众多研究认为tau蛋白在AD的发生发展中发挥着重要作用，磷酸化tau蛋白聚集在AD退行性变性神经元的胞体内，其与AD患者临床痴呆程度相关，tau蛋白的磷酸化与PI3K/Akt信号通路抑制有关，而PI3K/Akt通路同AD之间又有着密切的联系，抑制PI3K/Akt通路可促进AD病变。也有研究表明PTEN过度表达能降低细胞内tau蛋白磷酸化，PTEN突变却能增强tau蛋白磷酸化，PTEN通过降低ERK活性作用于tau蛋白，所以抑制PTEN的脂质磷酸酶活性可能具有对抗tau蛋白过度磷酸化而抑制或延缓AD的发生发展，表明PTEN异常表达影响tau蛋白磷酸化是AD的发病机制之一。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种检测人类PTEN基因c.1026+32T>G位点突变的引物，试剂盒及其使用方法，有潜力作为筛选AD易感人群的分子标志物，对易感个体及其家族成员进行疾病的早期预防、早期诊断及早期治疗具有重要的现实意义。
[0005]本专利技术提供了一种DNA分子，所述DNA分子的碱基序列发生c.1026+32T>G位点突变。
[0006]优选地，所述DNA分子发生的突变是基于与PTEN标准序列NG_007466.2比对得出的。
[0007]优选地，所述寡核苷酸特异性地与发生人类PTEN基因c.1026+32T>G位点突变的DNA分子杂交。
[0008]本专利技术还提供了用于检测人类PTEN基因c.1026+32T>G位点突变的寡核苷酸，其特征在于，所述寡核苷酸包括检测人类PTEN基因c.1026+32T>G位点突变的一对引物。
[0009]优选地，所述一对引物的碱基序列为：SEQ8
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F：ACCATTGAAATTTATATGCCACC；
[0010]SEQ8
‑
R：TGCTGCCGGTAAACTCCAC。
[0011]优选地，所述寡核苷酸还包括一对测序引物，所述一对测序引物的碱基序列为：
[0012]M13
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F：TGTAAAACGACGGCCAGT；
[0013]M13
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R：AACAGCTATGACCATG。
[0014]本专利技术还提供了一种检测人类PTEN基因c.1026+32T>G位点突变的试剂盒，所述试剂盒包括用于检测人类PTEN基因c.1026+32T>G位点突变的寡核苷酸。
[0015]优选地，所述寡核苷酸特异性地与发生人类PTEN基因c.1026+32T>G位点突变的DNA分子杂交。
[0016]优选地，所述寡核苷酸包括检测人类PTEN基因c.1026+32T>G位点突变的一对引物。
[0017]优选地，所述一对引物的碱基序列为：
[0018]SEQ8
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F：ACCATTGAAATTTATATGCCACC；
[0019]SEQ8
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R：TGCTGCCGGTAAACTCCAC。
[0020]本专利技术还提供了一种检测人类PTEN基因c.1026+32T>G位点突变的试剂盒使用方法，包括以下步骤：
[0021](1)样本核酸提取：所述样本为外周血，提取核酸采用天根血液基因组提取试剂盒；
[0022](2)PCR反应液配制：使用TOYOBO公司的高成功率PCR酶KOD Fx，根据实验所需数量将PCR缓冲液，dNTPs，DNA Polymerase及引物预混分装，最后加入未知DNA模板、阳性对照品、阴性对照品形成PCR反应体系，混匀后瞬离5s，进行PCR扩增；
[0023]扩增PTEN基因c.1026+32T>G位点突变的引物碱基序列为：
[0024]SEQ8
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F：ACCATTGAAATTTATATGCCACC；
[0025]SEQ8
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R：TGCTGCCGGTAAACTCCAC；
[0026](3)PCR扩增：Stage 1：94℃，2min；Stage 2：98℃，10sec，58℃，30sec，72℃，50sec，40cycle；Stage 3：68℃，6min；4℃，forever；
[0027](4)PCR反应结束后通过琼脂糖凝胶电泳进行初步结果判读；
[0028](5)用测序引物M13
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F和M13
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R对步骤(3)中的产物进行测序，获得扩增的基因序列；
[0029]测序引物碱基序列为：
[0030]M13
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F：TGTAAAACGACGGCCAGT
[0031]M13
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R：AACAGCTATGACCATG；
[0032](6)将(5)中获得的基因序列与已知基因库中PTEN标准序列进行比对，对测序结果进行判断，确定未知样本中PTEN基因是否发生c.1026+32T>G位点突变；
[0033]有益效果：(1)本专利技术提供的检测PTEN基因发生c.本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种DNA分子，其特征在于，所述DNA分子的碱基序列发生c.1026+32T>G位点突变。2.根据权利要求1所述的DNA分子，所述DNA分子发生的突变是基于与PTEN标准序列NG_007466.2比对得出的。3.用于检测人类PTEN基因c.1026+32T>G位点突变的寡核苷酸，其特征在于，所述寡核苷酸特异性地与发生人类PTEN基因c.1026+32T>G位点突变的DNA分子杂交。4.用于检测人类PTEN基因c.1026+32T>G位点突变的寡核苷酸，其特征在于，所述寡核苷酸包括检测人类PTEN基因c.1026+32T>G位点突变的一对引物。5.根据权利要求4所述的寡核苷酸，其特征在于，所述一对引物的碱基序列为：SEQ8
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F：ACCATTGAAATTTATATGCCACC；SEQ8
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R：TGCTGCCGGTAAACTCCAC。6.根据权利要求5所述的寡核苷酸，其特征在于，所述寡核苷酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：董春燕，王淑一，
申请(专利权)人：杭州艾迪康医学检验中心有限公司，
类型：发明
国别省市：