本发明专利技术公开了长链非编码RNA作为人源胚胎干细胞标志物的应用，属于干细胞技术领域。本发明专利技术具体地公开了LINC00678作为鉴别人源胚胎干细胞的标志物的应用，鉴别试剂盒及鉴别人源胚胎干细胞的方法。本发明专利技术所述LINC00678在人源胚胎干细胞中特异性高表达，在人源胚胎干细胞分化的细胞和人体成体细胞中不表达或低表达，作为人源胚胎干细胞标志物，能够用于鉴别人源胚胎干细胞，具有高度的特异性和灵敏性。本发明专利技术的人源胚胎干细胞(hESCs)特异表达的lncRNA LINC00678为以干细胞技术为手段的临床治疗提供了新颖的、强有力的分子生物学工具，具有重要的临床意义和广泛的推广应用前景。景。
【技术实现步骤摘要】
长链非编码RNA作为人源胚胎干细胞标志物的应用
[0001]本专利技术属于干细胞
，具体涉及长链非编码RNA作为人源胚胎干细胞标志物的应用。
技术介绍
[0002]人源胚胎干细胞(human embryonic stem cells，hESCs)是源自人囊胚内细胞团的多能干细胞。在体外，hESCs可以在限定条件下无限增殖，并具有分化为各类组织和器官的潜能。因此，hESCs可以作为人类早期发育、遗传病研究及体外毒理学测试系统的工具。另外，在再生医学领域，hESCs等多能干细胞由于能够通过定向分化获得具有临床应用价值的功能细胞，近年来已显示出治疗多种不同病症的潜力，包括脊髓损伤、年龄相关性黄斑变性、糖尿病及神经退行性疾病等。然而，hESCs干性基因的调节机制尚不明确，在很大程度上限制了其临床应用。
[0003]人类基因组编码蛋白的区域不到2％，非蛋白质编码区占据基因组中绝大部分位置，而大量非编码区域产生的长链非编码RNA(long noncoding RNA，lncRNA)数量远远多于mRNA。研究表明，lncRNA可以作为信号分子、诱饵分子、引导分子以及骨架分子等形式对基因表达进行调控。作为一类具有重要调控功能的分子，lncRNA参与了染色质重塑、DNA甲基化、组蛋白修饰、转录激活、RNA代谢和蛋白翻译等各种生物学过程，与干细胞调控、生物发育以及多种疾病的发生发展紧密相关。此外，lncRNA的表达在很大程度上具有组织特异性，提示其可以作为特定类型细胞或组织的生物标志物。目前，hESCs特异表达的lncRNA并未见报道。因此，寻找hESCs特异表达的lncRNA并探究其对hESCs的干性基因调控模式具有重要的突破性的科学意义和临床潜在价值，有着广泛的应用前景。
技术实现思路
[0004]本专利技术的目的是提供一种人源胚胎干细胞(hESCs)特异表达的lncRNA(LINC00678)作为人源胚胎干细胞标志物的应用，和/或，提供一种鉴别人源胚胎干细胞的方法。所要解决的技术问题不限于如所描述的技术主题，本领域技术人员通过以下描述可以清楚地理解本文未提及的其它技术主题。
[0005]为实现上述目的，本专利技术首先提供了LINC00678作为人源胚胎干细胞标志物或LINC00678在制备人源胚胎干细胞标志物中的应用，所述LINC00678为长链非编码RNA，其Gene ID(Ensembl ID)为ENSG00000254934。
[0006]所述LINC00678的基因的核苷酸序列是GenBank Accession No.NC_000011的第27634627
‑
27617626位(Update Date2021
‑5‑
16)。(NC_000011.10:c27634627
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27617626Homo sapiens chromosome 11,GRCh38.p13 Primary Assembly)。
[0007]所述LINC00678为长链非编码RNA(long noncoding RNA，lncRNA)，即lncRNA。
[0008]上述应用中，所述LINC00678在人源胚胎干细胞中的表达水平高于在分化细胞及人体成体细胞中的表达水平。
[0009]进一步地，所述分化细胞可为人源胚胎干细胞分化的细胞(如外胚层细胞、中胚层细胞和/或内胚层细胞)。所述人体成体细胞可为成人间质细胞、神经细胞、脂肪细胞、血液白细胞、脑胶质细胞、肾脏细胞、肝脏细胞、肺组织细胞、胰腺细胞、皮肤细胞、小肠细胞、胃组织细胞和/或甲状腺细胞等。
[0010]进一步地，所述LINC00678在人源胚胎干细胞中特异性高表达，在人源胚胎干细胞分化的细胞以及人体成体细胞中不表达或低表达。
[0011]本专利技术还提供了检测所述LINC00678基因表达量的试剂和/或仪器在制备鉴别人源胚胎干细胞的产品中的应用，所述LINC00678基因的核苷酸序列是GenBank Accession No.NC_000011的第27634627
‑
27617626位(Update Date2021
‑5‑
16)。
[0012]上述应用中，所述检测LINC00678基因表达量的试剂和/或仪器包括通过逆转录
‑
聚合酶链反应、实时荧光定量PCR技术、转录组测序技术、原位杂交技术、或PacBio测序技术检测LINC00678基因表达量的试剂和/或仪器。
[0013]本文中，所述检测LINC00678基因表达量的试剂包括特异性扩增LINC00678的引物和/或特异性识别LINC00678的探针。
[0014]本文中，所述特异性扩增LINC00678的引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示，和/或，所述特异性识别LINC00678的探针的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。
[0015]上述应用中，所述鉴别人源胚胎干细胞的产品包括试剂盒、基因芯片、高通量测序平台或生物传感器但不限于此。
[0016]上述应用中，所述试剂盒包括用于检测LINC00678的试剂；
[0017]所述基因芯片包括固相载体和固定在所述固相载体的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括用于检测LINC00678的寡核苷酸探针；所述探针可为DNA探针、RNA探针、cDNA探针、cRNA探针或寡核苷酸探针。具体地，所述寡核苷酸探针可为核苷酸序列是SEQ ID No.3的特异性识别LINC00678的DNA探针。
[0018]所述高通量测序平台包括用于检测LINC00678的试剂；
[0019]所述生物传感器包括用于检测LINC00678的试剂。
[0020]本专利技术还提供了一种鉴别人源胚胎干细胞的方法，所述方法包括如下步骤：
[0021](1)检测待测样品的LINC00678的表达水平；
[0022](2)根据LINC00678的表达水平，鉴别待测样品是否为人源胚胎干细胞。
[0023]上述方法中，所述检测待测样品的LINC00678的表达水平可为利用核苷酸序列是SEQ ID No.1和SEQ ID No.2的引物通过荧光定量PCR检测LINC00678的基因相对表达量。
[0024]上述方法中，所述待测样品可为细胞样品和/或人体组织来源样品但不限于此。
[0025]进一步地，所述细胞样品可为干细胞样品或胚胎干细胞样品。
[0026]具体地，在本专利技术的一个实施方案中，所述鉴别待测样品是否为人源胚胎干细胞可为：
[0027]当使用本专利中引物(SEQ ID No.1和SEQ ID No.2)进行检测，所述LINC00678的表达水平相较GAPDH表达水平小于6个CT值(PCR循环数)时，所述待测样品为人源胚胎干细胞；当所述LINC00678的表达水平相较GAPDH表达水大于等于6个CT值(PCR循环数)时，所述待测样品为非人源胚胎本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.LINC00678作为人源胚胎干细胞标志物或LINC00678在制备人源胚胎干细胞标志物中的应用，所述LINC00678为长链非编码RNA，其Gene ID为ENSG00000254934。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述LINC00678在人源胚胎干细胞中的表达水平高于在分化细胞及人体成体细胞中的表达水平。3.检测权利要求1中所述LINC00678基因表达量的试剂和/或仪器在制备鉴别人源胚胎干细胞的产品中的应用，所述LINC00678基因的核苷酸序列是GenBank Accession No.NC_000011的第27634627
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27617626位。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述检测LINC00678基因表达量的试剂和/或仪器包括通过逆转录
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聚合酶链反应、实时荧光定量PCR技术、转录组测序技术、原位杂交技术或PacBio测序技术检测LINC00678基因表达量的试剂和/或仪器。5.根据权利要求3或4所述的应用，其特征在于，所述检测LINC00678基因表达量的试剂包括特异...
【专利技术属性】
技术研发人员：贺乾，李富荣，
申请(专利权)人：深圳市人民医院，
类型：发明
国别省市：
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