抗衰老活性肽与骨髓间充质干细胞在制备抗衰老的药物或者美容产品中的用途制造技术

本发明专利技术涉及抗衰老活性肽与骨髓间充质干细胞在制备抗衰老的药物或者美容产品中的用途。本发明专利技术通过构建的Caspase

【技术实现步骤摘要】
抗衰老活性肽与骨髓间充质干细胞在制备抗衰老的药物或者美容产品中的用途


[0001]本专利技术涉及生物领域，更具体的涉及预防干细胞衰老提高干细胞活性的领域，可以用于制备抗衰老药物或者美容产品。

技术介绍

[0002]干细胞具有自我更新、多向分化和旁分泌因子分泌能力，是实现细胞再生的“种子”，机体可通过自体干细胞的增殖和分化实现细胞更新，但随着年龄的增长，各个组织器官的干细胞数量会逐渐减少，增殖分化能力下降，受损的组织器官无法得到及时修复，在皮肤上则会表现为皱纹、色斑、皮肤暗沉等。随着干细胞研究的成熟，干细胞技术在皮肤抗衰领域中的应用潜力巨大。
[0003]干细胞抗衰老是利用干细胞自身分化或源自干细胞的分泌因子来修复损伤。干细胞能分泌大量的细胞因子，可提升机体抗自由基能力，促进血管生成及细胞增殖分化、抑制炎症反应及趋化性，刺激组织细胞的再生、修复等，因此干细胞分泌产物具有抗衰老和美容护肤作用，目前干细胞皮肤抗衰老机制主要有以下几种形式：细胞分化延缓衰老：干细胞因其固有的分化能力，可分化成多种类型的细胞，皮肤中的干细胞分为表皮干细胞、真皮干细胞等，都可进行增殖和分化，延缓皮肤衰老；另外，其他类型干细胞也可向皮肤细胞分化，如间充质干细胞可以分化为表皮细胞、成纤维细胞、黑素细胞等。旁分泌作用：大量研究证实干细胞还可通过分泌细胞因子，如超氧化物歧化酶(SOD)、血管内皮生长因子(VEGF)等，促进细胞增殖，促进再生、修复组织损伤。DNA损伤修复：DNA完整性的维持对于预防衰老起到重要作用，干细胞具有双链DNA损伤修复机制。其中端粒损伤是一种特殊形式的DNA损伤，通常不能轻易被修复，而干细胞能产生端粒酶，改善端粒缩短功能，延缓衰老进程。促进胶原蛋白的合成：干细胞可参与刺激成纤维细胞胶原蛋白的合成。有研究表明干细胞能改善和增加衰老小鼠皮肤的厚度和密度及胶原纤维，减少皮肤皱纹。抗炎作用：促炎介质如白细胞介素
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6、肿瘤坏死因子等会诱发皮肤衰老，一些动物研究表明，静脉注射MSCs可以减少促炎反应。
[0004]骨髓间充质干细胞具有独特的优势，可以分化为多种间质组织细胞，这一多向分化潜能为许多疾病提供了细胞再生修复的新治疗手段。皮肤抗衰老方面，研究发现hPlGF
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2基因修饰的BMSCs能分化为成纤维细胞参与到皮肤创面修复中,并分化为血管内皮细胞参与血管的再生。另有研究表明，MSCs在体内外实验中均可参与真皮组织的重建，MSCs在真皮成纤维细胞诱导体系作用下,超微结构观察到细胞外胶原微纤维的沉积。MSCs能在体内外被诱导分化为表皮及真皮细胞，且诱导分化的真皮成纤维细胞具有分泌I型胶原的功能。另外，骨髓间充质干细胞能够分泌多种生长因子和细胞因子，从多个角度发挥抗衰老作用。骨髓间充质干细胞分泌的生长因子可能是加速皮肤创伤愈合的重要原因，研究表明骨髓间充质干细胞表达转化生长因子，表皮生长因子，血管内皮生长因子，表皮生长因子，成纤维细胞生长因子等，这些因子在调节细胞表型和创面改建中起着重要的作用。
[0005]但是目前，骨髓间充质干细胞自身在培养过程中生长缓慢，如何获得高质量、高产量的骨髓间充质干细胞是目前研究的重点方向。虽然研究中提高骨髓间充质干细胞的方法很多，比如利用脂质体转染法，将真核重组表达质粒(bFGF
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pcDNA3)转染至体外培养的BMSCs，筛选出稳定表达bFGF的BMSCs细胞株，并发现自身表达的bFGF可促进BMSCs增殖。利用转基因技术将生长因子Neuroglobin植入实验兔的BMSCs，结果发现兔的损伤组织重塑和纤维束生长显著增快。目前，利用转基因技术已将人端粒逆转录酶(hTERT)基因成功转入中国贵州小猪的BMSCs内，发现转染后的BMSCs与正常培养的BMSCs具有相同的增殖活性，同时转染后的BMSCs寿命得到延长。但是，这项技术也面临一些难题需要解决，如基因转染效率低、体内表达时间短、是否会导致恶变及转基因后能否保持原来的生物学特性等。目前，转基因技术还处于初步研究阶段，技术条件的不完善决定了其在短时间内难以全面推广应用。

技术实现思路

[0006]本专利技术研究人员发现，Caspase
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3抑制剂本身可以促进骨髓间充质干细胞的增殖，但是本身效果还有待进一步的提高。
[0007]本专利技术克服现有技术的缺陷，提供一种新的筛选Caspase
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3抑制剂的方法，以及根据所述方法筛选获得的新的Caspase
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3抑制剂。
[0008]具体的，所述筛选方法为根据NCBI的人源Caspase
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3序列，设计引物，以人外周血DNA为模板PCR扩增目的片段，随后以限制性内切酶NdeI、XhoI切割目的片段及载体，表达并纯化的Caspase
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3蛋白。构建筛选体系：反应体系中含有Caspase
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3蛋白、适量反应缓冲液(25mmol/L HEPES，0.1％CHAPS，100mmol/LNaCl，10mmol/LDTT，10％蔗糖，1mmol/L EDTA，pH 7.5)、样品、空白孔为反应缓冲液及AC－DEVD－AMC(20μg/mL)，振荡混匀后以355nm为激发波长测定460nm下的荧光强度值(F1)，每分钟测一次。在线性范围内将最后一次读数设为F2。样品对Caspase
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3酶抑制率的计算公式为：酶的相对活性＝【(F2－F1)样品孔－(F2－F1)空白孔】/【(F2－F1)对照孔－(F2－F1)空白孔】，即(1
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酶的相对活性)
×
100％＝样品的抑制率。其中样品为计算机模拟构建的多肽库。通过高通量筛选，即可获得目标多肽。
[0009]进一步的，所述筛选的Caspase
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3蛋白抑制肽序列如SEQ ID NO：1所示。
[0010]进一步的，本专利技术提供一种促进骨髓间充质干细胞活性抑制凋亡的方法，所述方法包括将骨髓间充质干细胞在含有Caspase
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3蛋白抑制肽的培养基中进行培养的步骤。
[0011]进一步的，本专利技术还提供一种骨髓间充质干细胞在制备用于促进皮肤损伤修复的药物组合物中的应用。
[0012]进一步的，本公开的药物组合物还可以包括通常用于制备药物组合物的药学上可接受的载体，赋形剂或稀释剂，并且所述载体可以包括非天然存在的载体。载体，赋形剂和稀释剂的例子包括乳糖，葡萄糖，蔗糖，山梨醇，甘露醇，木糖醇，赤藓糖醇，麦芽糖醇，淀粉，阿拉伯树胶，藻酸盐，明胶，磷酸钙，硅酸钙，纤维素，甲基纤维素，微晶纤维素，聚乙烯吡咯烷酮，水，尼泊金乙酯，尼泊金丙酯，滑石，硬脂酸镁和矿物油。
[0013]另外，该药物组合物可以制成片剂，根据常用方法的丸剂，散剂，颗粒剂，胶囊剂，混悬剂，溶液剂，乳剂，糖浆剂，灭菌水溶液，非水溶剂，混悬剂，乳剂，冻干制剂，透皮吸收剂，凝胶剂，洗剂，软膏剂，霜剂，贴剂，巴布剂，糊剂，喷雾剂，皮肤乳剂，皮肤混悬剂，透皮本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种Caspase
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3蛋白抑制肽CpY
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201在制备用于预防皮肤遭受紫外线伤害的药物组合物中的应用，其中所述抑制肽CpY
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201的序列如SEQ ID NO：1所示。2.一种Caspase
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3蛋白抑制肽CpY
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201和骨髓间充质干细胞在制备用于皮肤损伤治疗以及紫外线辐射治疗的药物组合物中的应用，其中所述抑制肽CpY
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201的序列如SEQ ID NO：1所示，所述骨髓间充质干细胞是采用含有Caspase
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3蛋白抑制肽CpY
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201的培养基培养获得的。3.一种Caspase
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3蛋白抑制肽CpY
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201和骨髓间充质干细胞在制备用于预防紫外线辐射的美容产品中的应用，其中所述抑制肽CpY

【专利技术属性】
技术研发人员：吕荣取，杨国林，
申请(专利权)人：北京岳淘生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：