一种利用过表达己糖激酶基因HK提高蛹虫草胞外多糖产量的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用过表达己糖激酶基因HK提高蛹虫草胞外多糖产量的方法，所述方法是将含己糖激酶基因HK的蛹虫草基因工程菌接种至发酵培养基，22～25℃，120～180rpm摇床发酵培养，获得含蛹虫草胞外多糖的发酵液，将发酵液进行分离纯化得到蛹虫草胞外多糖。本发明专利技术通过基因工程技术过表达构建得到稳定遗传的重组蛹虫草基因工程菌，该基因工程菌株与野生型菌株相比，其发酵液中的蛹虫草胞外多糖产量为1.61倍，而同样过表达甘露糖

【技术实现步骤摘要】
一种利用过表达己糖激酶基因HK提高蛹虫草胞外多糖产量的方法
(一)

[0001]本专利技术属于蛹虫草栽培领域，具体涉及一种利用过表达己糖激酶基因HK提高蛹虫草胞外多糖产量的方法。
(二)
技术介绍

[0002]蛹虫草(Cordyceps militaris)又名北冬虫夏草，是虫草属的模式种，已实现人工规模化培育。蛹虫草具有多种天然活性成分，如虫草素、甘露醇、虫草多糖等均具有较高的药用价值。虫草多糖是蛹虫草中主要的有效成分之一，纯品为白色絮状粉末，易溶于水，已被研究证明具有多种重要的生物学活性，如抗氧化、抗肿瘤、抗菌、抗炎、降低血糖、免疫调节、保护肾脏等，因此虫草多糖在药物生产上具有较高的应用前景。但由于环境限制，野生或者天然培养的蛹虫草产量并不能满足生产需求，所以提高人工大规模培育的蛹虫草产量变得尤为重要。
[0003]己糖激酶基因HK和甘露糖
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磷酸尿苷转移酶基因MPG是蛹虫草多糖生物合成途径中的相关酶基因，其在蛹虫草基因组序列中已经得到验证。克隆相关酶的基因并将其导入野生型蛹虫草基因组中，通过过表达的方法来提高蛹虫本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利用过表达己糖激酶基因HK提高蛹虫草胞外多糖产量的方法，其特征在于，所述方法是在蛹虫草基因中过表达己糖激酶基因HK实现蛹虫草胞外多糖含量的提高；所述己糖激酶基因HK核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法为：构建含己糖激酶基因HK的蛹虫草基因工程菌，再接种至发酵培养基中，22～25℃，120～180rpm摇床发酵培养，获得含蛹虫草胞外多糖的发酵液；所述发酵液培养基组成：葡萄糖20g/L，(NH4)2SO
4 7g/L，K2HPO4·
3H2O 0.5g/L，KH2PO
4 0.5g/L，MgSO4·
7H2O 0.5g/L，L
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甘氨酸1g/L，溶剂为蒸馏水，pH自然。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述蛹虫草基因工程菌是将己糖激酶基因HK与双元载体pCAMBIA经无缝克隆后连接，得到重组载体，再将重组载体转化农杆；然后通过农杆菌侵染蛹虫草菌获得的。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述农杆菌为根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)AGL
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1。5.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述蛹虫草基因工程菌按如下方法构建：(1)将己糖激酶基因HK与线性化双元载体pCAMBIA经无缝克隆后连接得到重组载体，转化农杆菌，接种至含25μg/mL利福平和50μg/mL卡那霉素的IM培养基，28℃培养36h，筛选获得含己糖激酶基因HK的农杆菌菌株；所述IM培养基：KH2PO
4 1.45g/L，K2HPO42.05g/L，MgSO4·
7H2O 0.6g/L，NaCl 0.1g/L，CaCl
2 0.01g/L，FeSO
4 0.001g/L，NH4NO
3 0.5g/L，甘油5mL/L，pH5.5、1mol/L MES缓冲液40mL/L，微量元素储备液5mL/L，葡萄糖...

【专利技术属性】
技术研发人员：季小康，杨胜利，孔潇慧，徐晓倩，徐德，王逸峰，张慧，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：