香叶木素在制备治疗前列腺癌的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种香叶木素在制备治疗前列腺癌的药物中的应用。本发明专利技术的香叶木素在制备治疗前列腺癌的药物中的应用，公开了香叶木素能抑制前列腺癌PC

【技术实现步骤摘要】
香叶木素在制备治疗前列腺癌的药物中的应用


[0001]本专利技术涉及一种香叶木素在制备治疗前列腺癌的药物中的应用。

技术介绍

[0002]前列腺癌(Prostate cancer,PCa)是男性最常见的恶性肿瘤之一，PCa骨转移是晚期前列腺癌患者死亡的主要原因。研究发现90％死于转移性前列腺癌的患者具有骨转移。PCa发生骨转移后导致严重的疼痛、活动受限并损害患者的生活质量。晚期癌症患者的主要治疗方法包括放疗、化疗和手术等方法。然而，PCa骨转移患者经治疗后生存的中位时间为仅3
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5年。肿瘤细胞侵袭及破骨细胞的激活是PCa骨转移的病理基础，因此靶向PCa骨转移发病过程中的肿瘤细胞仍是目前的治疗重点之一。

技术实现思路

[0003]本专利技术提供了一种香叶木素在制备治疗前列腺癌的药物中的应用解决上述提到的技术问题，具体采用如下的技术方案：
[0004]一种香叶木素在制备治疗前列腺癌的药物中的应用。
[0005]进一步地，药物还包括药学上可接受的载体。
[0006]进一步地，药学可接受的载体包括稀释剂、赋形剂、崩解剂、填充剂、粘合剂、润滑剂、矫味剂、表面活化剂、稳定剂中的任何一种或多种组合。
[0007]进一步地，药物的剂型为注射剂、针剂、片剂、冲剂、颗粒剂、丸剂、胶囊剂中的任一种。
[0008]本专利技术的有益之处在于所提供的香叶木素在制备治疗前列腺癌的药物中的应用，公开了香叶木素能抑制前列腺癌PC
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3细胞的增殖并促进其凋亡，且还显著抑制PC
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3细胞的干性、迁移、粘附、和集落形成。
附图说明
[0009]图1为香叶木素抑制PC
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3细胞增值的示意图；
[0010]图2为香叶木素诱导PC
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3细胞凋亡的示意图；
[0011]图3为香叶木素抑制PC
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3细胞的集落形成能力的示意图；
[0012]图4为香叶木素抑制PC
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3细胞的迁移的示意图；
[0013]图5为香叶木素抑制PC
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3细胞粘附的示意图；
[0014]图6为香叶木素抑制PC
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3细胞球体形成的示意图。
具体实施方式
[0015]以下结合附图和具体实施例对本专利技术作具体的介绍。
[0016]香叶木素是从多种天然药物中提取的一种黄酮类生物化合物，具有抗炎、抗氧化、抗瘤等活性功能。目前多项研究表明香叶木素可以抑制肺癌、肝癌及大肠癌等在体内外的
增殖，但在PCa骨转移中少有研究。本申请以前列腺癌细胞PC
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3为研究对象，确认了香叶木素对前列腺癌细胞PC
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3的抑制作用。
[0017]1.材料
[0018]1.1人前列腺癌PC
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3细胞株购于上海中科院细胞库。
[0019]1.2香叶木素(纯度≥98％)及DMSO购于美国Sigma公司。
[0020]1.3RPMI
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1640培养基、胎牛血清、细胞因子B27、EGF、bFGF均购自美国Gbico公司。
[0021]1.4CCK8试剂盒购自美国AbMole公司。
[0022]1.5单克隆体Caspase、Bax、Bcl2、β
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acting均购自美国CST公司。
[0023]1.6BCA蛋白检测试剂盒、ECL发光液购于碧云天公司。
[0024]2.实验
[0025]2.1药物溶解
[0026]香叶木素用DMSO溶解成储存液(储存浓度为1mg/ml)，0.22μm过滤器除菌。
[0027]2.2细胞增殖率测定
[0028]将对数生长期的PC
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3细胞制成单细胞悬液并以每孔100μL(密度4x103个/孔)接种至96孔板。培养过夜细胞贴壁后，药物组分别加入5、10、15、20、25μg/ml的香叶木素，对照组加入100ul培养基。继续培养24h后每孔加入100ulCCK8稀释液(每孔含10μL试剂原液)，孵育2h后用酶标仪测定490nm波长处的吸光度。实验设置5个副孔并重复三次。
[0029]2.3细胞形态观察
[0030]将PC
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3细胞悬液以每孔1ml(密度1x104个/孔)接种至12孔板，然后加入5、10μg/ml香叶木素，培养24h在倒置显微镜下观察细胞形态变化。
[0031]2.4细胞克隆实验
[0032]将PC
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3细胞(每孔1000个)接种到6孔板中，贴壁后加入5、10μg/ml香叶木素处理24h。然后弃去培养基更换新鲜培养基。每3天更换一次培养基并维持14天。待2周后用预冷的4％多聚甲醛固定20分钟，PBS清洗2次后用0.1％结晶紫染色20分钟，最后拍照计数。
[0033]2.5细胞Transwell迁移实验
[0034]将PC
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3细胞(每孔1x105个)接种到6孔板中，贴壁后加入5、10μg/ml香叶木素处理24h。用无血清培养基将收集的细胞制成悬液后计数，并以5x104的密度接种至24孔Transwell上室中，下室加入含30％血清的培养基。培养24h后用4％多聚甲醛固定20分钟，PBS清洗2次再用0.1％结晶紫染色15分钟，拍照后随机选择5个视野计数。
[0035]2.6细胞粘附实验
[0036]将PC
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3细胞(每孔1x105个)接种到6孔板中贴壁后加入5、10μg/ml香叶木素处理24h，然后分别收集每组细胞计数，以6x103的密度接种到经FN预处理24h的96孔板中。培养3h后用PBS洗涤细胞，然后用4％多聚甲醛固定20分钟，0.1％结晶紫染色20分钟后显微镜下观察拍照，随机选择5个视野计数。
[0037]2.7细胞成球试验
[0038]将PC
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3细胞(每孔1x105个)接种到6孔板中，贴壁后加入5、10μg/ml香叶木素处理24h，然后收集细胞并计数，以1x103的密度接种至24孔超低粘附培养板中，继续培养14天后拍照，并在显微镜下计数肿瘤球的数量(直径>50μm)。
[0039]2.8蛋白质印迹(Western blotting)分析
[0040]将PC
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3细胞(每孔5x105个)接种到100mm培养皿中，贴壁后加入5、10μg/ml香叶木素处理24h，然后弃去培养基，并用预冷的PBS冲洗2次。加入含有PMSF和RIPA的PBS缓冲液提取总蛋白，使用BCA法测定蛋白浓度。将蛋白样品在12％的SDS
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PAGE中进行电泳2h，然后用PVDF膜电转1.5h，并在5％脱脂牛奶中封闭60分钟。将封闭后的PVDF膜放在相应的一抗(1：1000)中孵育过夜，水平摇床低速震荡1h后TBST洗膜液洗涤3次。再放入相应本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种香叶木素在制备治疗前列腺癌的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的香叶木素在制备治疗前列腺癌的药物中的应用，其特征在于，所述药物还包括药学上可接受的载体。3.根据权利要求2所述的香叶木素在制备治疗前列腺癌的药物中的应用，其特征在于，所述药学可接受的载体包括...

【专利技术属性】
技术研发人员：瓦庆德，黄帅，吴涛，范青洪，王斌，廖壮文，陈灿伟，
申请(专利权)人：遵义医科大学第二附属医院，
类型：发明
国别省市：