一种核酸回收方法及应用技术

本发明专利技术属于分子生物学技术领域，公开了一种核酸回收方法及应用，包括：结合：磁珠优先结合大片段核酸分子；吸取：吸取并丢弃小片段核酸分子；清洗：清洗结合核酸后的磁珠；晾干：将磁珠晾干；洗脱：将核酸洗脱；质检：回收核酸质检。本发明专利技术提供的核酸回收方法，基于磁珠回收单片段核酸技术，利用不同体系的磁珠吸附不同片段和浓度的核酸分子。本发明专利技术的主要流程包括结合、清洗、晾干和洗脱四个步骤，其核心技术在于选择合适的磁珠比例，达到最大量回收目的片段的同时，减少磁珠消耗。本发明专利技术在基因组片段中能很好的回收到单一的DNA片段，浓度和纯度较传统的胶回收法有很大的优势，同时减少了试验流程，极大了缩短了试验周期。极大了缩短了试验周期。极大了缩短了试验周期。

【技术实现步骤摘要】
一种核酸回收方法及应用


[0001]本专利技术属于分子生物学
，尤其涉及一种核酸回收方法及应用。

技术介绍

[0002]目前，临床和科研所使用的核酸回收技术是胶回收技术法，该存在耗时长、切胶技术难度较大和杂质污染可能性较大的问题。而磁珠回收技术，不仅可以大大缩短试验周期，对技术人员要求更低大大降低了人员差异带来的数据差异，此外磁珠回收的核酸纯度更佳。磁珠回收核酸技术可以在相对较短的时间内获获取目的片段，极大了地提高了下游建库的效率。因此，亟需一种新的、基于磁珠回收技术的核酸回收方法，以弥补现有技术的缺陷。
[0003]通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：临床和科研所使用的核酸回收技术是胶回收技术法，该存在耗时长、切胶技术难度较大和杂质污染可能性较大的问题。
[0004]解决以上问题及缺陷的难度为：
[0005]需要回收的核酸和磁珠的比例较难摸索，同时不同品牌的磁珠回收效率也需要经过多次摸索。
[0006]解决以上问题及缺陷的意义为：
[0007]磁珠回收法不仅大大的缩短了试验周期，同时简化了试验流程，另外回收的核酸纯度可靠，为下一步PCR反应提供了很好的基础条件。

技术实现思路

[0008]针对现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种核酸回收方法及应用。
[0009]本专利技术是这样实现的，一种核酸回收方法，所述核酸回收方法包括以下步骤：
[0010]步骤一，结合：磁珠优先结合大片段核酸分子；该步骤可以吸附混合液体中的目的片段核酸分子。
[0011]步骤二，吸取：吸取并丢弃小片段核酸分子；该步骤能有效去除未结合的小片段非目的核酸分子。
[0012]步骤三，清洗：清洗结合核酸后的磁珠；该步骤不仅可以去除残留的未结合小分子核酸分子，而且可以清洗磁珠混悬液中的盐类等物质。
[0013]步骤四，晾干：将磁珠晾干；该步骤中残留的乙醇可以有效挥发。
[0014]步骤五，洗脱：将核酸洗脱；该步骤能够有效将结合在磁珠上的目的核酸片段分子溶解在洗脱液中。
[0015]步骤六，质检：回收核酸质检；该步骤能够有效检验试验过程的正确性和试验结果的合格性。
[0016]磁珠法回收目的核酸片段通过一定比例的磁珠核酸比例，尽可能结合所有目的核酸分子又保证不参杂其他非目的核酸片段，然后经过清洗和洗脱得到纯度高的单一目的核酸片段。
[0017]进一步，步骤一中，所述磁珠优先结合大片段核酸分子，包括：
[0018](1)提前30min将VAHTS DNA Clean Beads室温放置；
[0019](2)磁珠平衡至室温后，涡旋振荡充分混匀；
[0020](3)吸取1.5倍体积的磁珠到产物体系中，吹打充分混匀后，室温孵育5min。
[0021]进一步，步骤二中，所述吸取并丢弃小片段核酸分子，包括：
[0022](1)将PCR管短暂离心并置于磁力架中分离磁珠和液体，待溶液澄清；
[0023](2)待溶液澄清后，小心移除上清。
[0024]进一步，步骤三中，所述清洗结合核酸后的磁珠，包括：
[0025](1)保持PCR管始终置于磁力架上，加入200ul新鲜配制的80％乙醇漂洗磁珠；
[0026](2)室温孵育30sec，小心移除上清；
[0027](3)再重复步骤(1)和步骤(2)1次。
[0028]进一步，步骤四中，所述磁珠晾干，包括：
[0029](1)保持PCR管始终置于磁力架中，开盖空气干燥磁珠5～10min；
[0030](2)晾干至无乙醇残留，磁珠表面呈现不反光的磨玻璃样。
[0031]进一步，步骤五中，所述核酸洗脱，包括：
[0032](1)将PCR管从磁力架中取出，加30ulNFW，充分吹打混匀后室温放置 3～5min；
[0033](2)将PCR管短暂离心并置于磁力架中静置，待溶液澄清5min后，小心移取20μl上清至新EP管中，切勿触碰磁珠。
[0034]进一步，步骤六中，所述回收核酸质检，包括：
[0035](1)纯度质检：分光光度计检测OD260/OD280比值为1.7～1.9，且 OD260/OD230>1；
[0036](2)浓度质检：用Qubit测定核酸的浓度，>10ng/ul；
[0037](3)完整性质检：1％琼脂糖凝胶电泳显示单一亮带位置位目的片段长度位置。
[0038]本专利技术的另一目的在于提供一种全自动核酸片段回收仪，所述核酸回收方法使用所述核酸回收方法。
[0039]本专利技术的另一目的在于提供一种目的DNA片段的回收的方法，所述目的 DNA片段的回收的方法实施所述核酸回收方法。
[0040]本专利技术的另一目的在于提供一种核酸纯化试剂盒，所述核酸纯化试剂盒使用所述核酸回收方法。
[0041]结合上述的所有技术方案，本专利技术所具备的优点及积极效果为：本专利技术提供的核酸回收方法，基于磁珠回收单片段核酸技术，利用不同体系的磁珠吸附不同片段和浓度的核酸分子。本专利技术的主要流程包括结合、清洗、晾干和洗脱四个步骤，其主要核心技术在于选择合适的磁珠比例，达到最大量回收目的片段的同时，减少磁珠消耗。本专利技术可以在基因组片段中能很好的回收到单一的 DNA片段，浓度和纯度较传统的胶回收法有很大的优势，同时减少了试验流程，极大了缩短了试验周期。
附图说明
[0042]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对本专利技术实施例中所需要使用的附图做简单的介绍，显而易见地，下面所描述的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下还可以根据这些附图获得其他的
附图。
[0043]图1是本专利技术实施例提供的核酸回收方法流程图。
[0044]图2是本专利技术实施例提供的完整性质检结果示意图。
具体实施方式
[0045]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0046]针对现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种核酸回收方法及应用，下面结合附图对本专利技术作详细的描述。
[0047]如图1所示，本专利技术实施例(3个样本)提供的核酸回收方法包括以下步骤：
[0048]S101，结合：磁珠优先结合大片段核酸分子；
[0049](1)提前30min将VAHTS DNA Clean Beads室温放置，挥发出磁珠最大的结合效率。
[0050](2)磁珠平衡至室温后，涡旋振荡充分混匀，保证磁珠混悬液的均一性。
[0051](3)吸取1.5倍体积(75ul)的磁珠到产物体系中，吹打充分混匀后，室温孵育5min，让磁珠和目的核酸分子重复结合。
[0052]S102，吸取：吸取并丢弃小片段核酸分子；
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种核酸回收方法，其特征在于，所述核酸回收方法包括以下步骤：步骤一，结合：磁珠优先结合大片段核酸分子；步骤二，吸取：吸取并丢弃小片段核酸分子；步骤三，清洗：清洗结合核酸后的磁珠；步骤四，晾干：将磁珠晾干；步骤五，洗脱：将核酸洗脱；步骤六，质检：回收核酸质检。2.如权利要求1所述的核酸回收方法，其特征在于，步骤一中，所述磁珠优先结合大片段核酸分子，包括：(1)提前30min将VAHTS DNA Clean Beads室温放置；(2)磁珠平衡至室温后，涡旋振荡充分混匀；(3)吸取一定体积的磁珠到产物体系中，吹打充分混匀后，室温孵育一定时间。3.如权利要求1所述的核酸回收方法，其特征在于，步骤二中，所述吸取并丢弃小片段核酸分子，包括：(1)将PCR管短暂离心并置于磁力架中分离磁珠和液体，待溶液澄清；(2)待溶液澄清后，移除上清。4.如权利要求1所述的核酸回收方法，其特征在于，步骤三中，所述清洗结合核酸后的磁珠，包括：(1)保持PCR管始终置于磁力架上，加入配制的80％乙醇漂洗磁珠；(2)室温孵育30sec，小心移除上清；(3)再重复步骤(1)和步骤(2)1次。5.如权利要求1所述的核酸回收方法，其特征在于，步骤四中，所述磁珠晾干，包括：(1)保...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗静，赵国军，刘律文，
申请(专利权)人：上海长为数据技术有限公司，
类型：发明
国别省市：