人巨细胞病毒的UL18对T细胞应答的调节制造技术

本公开涉及通过人巨细胞病毒的UL18调节T细胞应答的方法。本公开还涉及产生MHC

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】人巨细胞病毒的UL18对T细胞应答的调节
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2019年8月20日提交的美国临时申请第62/889,310号的权益，所述美国临时申请特此通过全文引用的方式并入。
[0003]关于联邦赞助的研究和开发的声明
[0004]本专利技术是根据美国国家过敏和传染病研究所(National Institute of Allergy and Infectious Disease)授予的授权号RO1 AI059457和U19 A1128741在政府支持下进行的。政府拥有本专利技术的某些权利。
[0005]对以电子方式提交的序列表的引用
[0006]随申请一起提交的以ASCII文本文件(名称：4153_013PC01_Seqlisting_ST25；大小：11,029字节；以及创建日期：2020年8月19日)以电子方式提交的序列表的内容通过全文引用的方式并入本文中。

技术介绍

[0007]先前已经证明，恒河猴巨细胞病毒(RhCMV)的病毒株68
‑
1引起CD8+ T细胞，所述细胞识别由MHC
‑
II和MHC
‑
E而非常规的MHC
‑
I呈递的肽。这种效应在食蟹猴CMV(CyCMV)中得到了重现，因此证明需要使HCMV UL128、UL130、UL146和UL147的RhCMV和CyCMV同源物缺失才能诱导MHC
‑
E限制性CD8+ T细胞(WO 2016/130693，WO 2018/075591)。另外，这些载体引起MHC
‑
II限制性CD8+ T细胞。然而，将内皮细胞特异性微RNA(miR)126的靶向位点插入到这些载体的基本病毒基因中消除了对MHC
‑
II限制性CD8+ T细胞的诱导，从而产生了专门引起MHC
‑
E限制性CD8+ T细胞的“仅MHC
‑
E”载体(WO 2018/075591)。相比之下，将骨髓细胞特异性miR142
‑
3p插入到68
‑
1RhCMV中可防止诱导MHC
‑
E限制性CD8+ T细胞，从而产生引起专门受MHC
‑
II限制的CD8+ T细胞的载体(WO 2017/087921)。类似地，UL40同源物Rh67的缺失可防止MHC
‑
E限制性CD8+ T细胞的诱导，从而产生“仅MHC
‑
II的载体”(WO2016/130693)。

技术实现思路

[0008]本公开涉及一种重组人CMV(HCMV)载体，所述重组HCMV载体包括编码异源抗原的核酸序列，其中所述重组HCMV载体不表达UL18。
[0009]在一些实施例中，所述重组HCMV载体不表达UL128。在一些实施例中，所述重组HCMV载体不表达UL130。在一些实施例中，所述HCMV载体不表达UL128和UL130。
[0010]本公开还涉及一种HCMV载体，所述HCMV载体包括编码异源抗原的核酸序列，其中所述重组HCMV载体不表达UL18、UL128、UL130、UL146和UL147。
[0011]在一些实施例中，所述重组HCMV载体由于编码UL18、UL128、UL130、UL146或UL147的核酸序列中存在一个或多个突变而不表达UL18蛋白、UL128蛋白、UL130蛋白、UL146蛋白和UL147蛋白或其直系同源物。在一些实施例中，编码UL18、UL128、UL130、UL146或UL147的所述核酸序列中的所述突变选自由以下组成的组：点突变、移码突变、截短突变和编码病毒蛋白的整个核酸序列的缺失。
[0012]在一些实施例中，所述重组HCMV载体进一步包括编码UL40或其直系同源物的核酸序列。在一些实施例中，所述重组HCMV载体进一步包括编码US28或其直系同源物的核酸序列。在一些实施例中，所述重组HCMV载体不表达UL82(pp71)或其直系同源物。在一些实施例中，所述重组HCMV载体不表达US11或其直系同源物。
[0013]在一些实施例中，所述重组HCMV载体进一步包括编码微RNA(miRNA)识别元件(MRE)的核酸序列，其中所述MRE含有在内皮细胞中表达的微RNA的靶位点。在一些实施例中，在内皮细胞中表达的所述MRE是miR126、miR
‑
126
‑
3p、miR
‑
130a、miR
‑
210、miR
‑
221/222、miR
‑
378、miR
‑
296和miR
‑
328。
[0014]在一些实施例中，所述重组HCMV载体进一步包括编码微RNA(miRNA)识别元件(MRE)的核酸序列，其中所述MRE含有在骨髓细胞中表达的微RNA的靶位点。在一些实施例中，在骨髓细胞中表达的所述MRE是miR
‑
142
‑
3p、miR
‑
223、miR
‑
27a、miR
‑
652、miR
‑
155、miR
‑
146a、miR
‑
132、miR
‑
21和miR
‑
125。
[0015]在一些实施例中，所述异源抗原是病原体特异性抗原、肿瘤抗原、组织特异性抗原或宿主自身抗原。在一些实施例中，所述病原体特异性抗原选自由以下组成的组：人免疫缺陷病毒(HIV)、1型单纯疱疹病毒、2型单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒、疟原虫(Plasmodium parasite)和结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)。
[0016]在一些实施例中，病原体特异性抗原是MHC
‑
E超表位(supertope)。在一些实施例中，所述MHC
‑
E超表位是HIV表位。在一些实施例中，所述MHC
‑
E超表位与以下至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％相同：LDAWEKIRLRPGGKK(SEQ ID NO：13)；DAWEKIRLR(SEQ ID NO：14)；KKAQQAAADTGNSSQ(SEQ ID NO：15)；KAQQAAADT(SEQ ID NO：16)；QMVHQAISPRTLNAW(SEQ ID NO：17)；HQAISPRTL(SEQ ID NO：18)；NTMLNTVGGHQAAMQ(SEQ ID NO：19)；VGGHQAAMQ(SEQ ID NO：20)；STLQEQIGWMTNNPP(SEQ ID NO：21)；STLQEQIGW(SEQ ID NO：22)；IVRMYSPVSILDIRQ(SEQ ID NO：23)；RMYSPVSIL(SEQ ID N本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种重组HCMV载体，其包括编码异源抗原的核酸序列，其中所述重组HCMV载体不表达UL18。2.根据权利要求1所述的重组HCMV载体，其中所述重组HCMV载体不表达UL128。3.根据权利要求1或2所述的重组HCMV载体，其中所述重组HCMV载体不表达UL130。4.根据权利要求1到3中任一项所述的重组HCMV载体，其中所述重组HCMV载体不表达UL128和UL130。5.根据权利要求4所述的重组HCMV载体，其中所述重组HCMV载体不表达UL146和UL147。6.根据权利要求1到5中任一项所述的重组HCMV载体，其中所述重组HCMV载体由于编码UL18、UL128、UL130、UL146或UL147的核酸序列中存在一个或多个突变而不表达UL18蛋白、UL128蛋白、UL130蛋白、UL146蛋白和UL147蛋白或其直系同源物。7.根据权利要求6所述的重组HCMV载体，其中编码UL18、UL128、UL130、UL146或UL147的核酸序列中的所述突变选自由以下组成的组：点突变、移码突变、截短突变和编码病毒蛋白的整个核酸序列的缺失。8.根据权利要求1到7中任一项所述的重组HCMV载体，其中所述重组HCMV载体进一步包括编码UL40或其直系同源物的核酸序列。9.根据权利要求1到8中任一项所述的重组HCMV载体，其中所述重组HCMV载体进一步包括编码US28或其直系同源物的核酸序列。10.根据权利要求1到9中任一项所述的重组HCMV载体，其中所述重组HCMV载体不表达UL82(pp71)或其直系同源物。11.根据权利要求1到10中任一项所述的重组HCMV载体，其中所述重组HCMV载体不表达US11或其直系同源物。12.根据权利要求1到10中任一项所述的重组HCMV载体，其中所述重组HCMV载体进一步包括编码微RNA(miRNA)识别元件(MRE)的核酸序列，其中所述MRE含有在内皮细胞中表达的miRNA的靶位点。13.根据权利要求12所述的重组HCMV载体，其中在内皮细胞中表达的所述miRNA是miR126、miR
‑
126
‑
3p、miR
‑
130a、miR
‑
210、miR
‑
221/222、miR
‑
378、miR
‑
296或miR
‑
328。14.根据权利要求1到11中任一项所述的重组HCMV载体，其中所述重组HCMV载体进一步包括编码MRE的核酸序列，其中所述MRE含有在骨髓细胞中表达的miRNA的靶位点。15.根据权利要求14所述的重组HCMV载体，其中在骨髓细胞中表达的所述miRNA是miR
‑
142
‑
3p、miR
‑
223、miR
‑
27a、miR
‑
652、miR
‑
155、miR
‑
146a、miR
‑
132、miR
‑
21或miR
‑
125。16.根据权利要求1到15中任一项所述的重组HCMV载体，其中所述异源抗原是病原体特异性抗原、肿瘤抗原、组织特异性抗原或宿主自身抗原。17.根据权利要求16所述的重组HCMV载体，其中所述病原体特异性抗原是人免疫缺陷病毒(HIV)、1型单纯疱疹病毒、2型单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒、疟原虫(Plasmodium parasite)或结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)。18.根据权利要求5到10和12到13中任一项所述的重组HCMV载体，其中所述病原体特异性抗原是MHC
‑
E超表位(supertope)。19.根据权利要求18所述的重组HCMV载体，其中病原体特异性抗原包括HIV表位。20.根据权利要求19所述的重组HCMV载体，其中所述HIV表位与以下至少80％、至少
85％、至少90％、至少95％或100％相同：LDAWEKIRLRPGGKK(SEQ ID NO：13)；DAWEKIRLR(SEQ ID NO：14)；KKAQQAAADTGNSSQ(SEQ ID NO：15)；KAQQAAADT(SEQ ID NO：16)；QMVHQAISPRTLNAW(SEQ ID NO：17)；HQAISPRTL(SEQ ID NO：18)；NTMLNTVGGHQAAMQ(SEQ ID NO：19)；VGGHQAAMQ(SEQ ID NO：20)；STLQEQIGWMTNNPP(SEQ ID NO：21)；STLQEQIGW(SEQ ID NO：22)；IVRMYSPVSILDIRQ(SEQ ID NO：23)；RMYSPVSIL(SEQ ID NO：24)；QKQEPIDKELYPLAS(SEQ ID NO：25)；KQEPIDKEL(SEQ ID NO：26)；SFSFPQITLWQRPLV(SEQ ID NO：27)；VRQYDQILIEICGKK(SEQ ID NO：28)；EPFRKQNPDIVIYQL(SEQ ID NO：29)；YVDGAANRETKLGKA(SEQ ID NO：30)；EEHEKYSNWRAMAS(SEQ ID NO：31)；或ILDLWVYHTQGYFPD(SEQ ID NO：32)。21.根据权利要求16所述的重组HCMV载体，其中所述肿瘤抗原与以下有关：急性髓性白血病、慢性髓性白血病、骨髓增生异常综合征、急性淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、非霍奇金淋巴瘤(non
‑
Hodgkin
′
s lymphoma)、多发性骨髓瘤、恶性黑色素瘤、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、结肠癌、肾细胞癌(RCC)或生殖细胞肿瘤。22.根据权利要求16所述的重组HCMV载体，其中所述宿主自身抗原是源自T细胞受体(TCR)的可变区的抗原或源自B细胞受体的可变区的抗原。23.一种药物组合物，其包括根据权利要求1到22中任一项所述的重组HCMV载体和药学上可接受的载体。24.一种免疫原性组合物，其包括根据权利要求1到22中任一项所述的重组HCMV载体和药学上可接受的载体。25.一种在受试者中产生对至少一种异源抗原的免疫应答的方法，所述方法包括以有效引起对所述至少一种异源抗原的CD8+T细胞应答的量向所述受试者施用根据权利要求1到22中任一项所述的重组HCMV载体。26.一种根据权利要求1到22中任一项所述的重组HCMV载体在制造用于在受试者中产生免疫应答的药物中的用途。27.根据权利要求1到22中任一项所述的重组HCMV载体，其用于在受试者中产生免疫应答。28.一种治疗或预防受试者的癌症的方法，所述方法包括以有效引起对至少一种异源抗原的CD8+T细胞应答的量施用根据权利要求1到22中任一项所述的重组HCMV载体。29.一种根据权利要求1到22中任一项所述的重组HCMV载体在制造用于治疗或预防受试者的癌症的药物中的用途。30.根据权利要求1到22中任一项所述的重组HCMV载体，其用于治疗或预防受试者的癌症。31.一种治疗或预防受试者的病原体感染的方法，所述方法包括以有效引起对至少一种异源抗原的CD8+T细胞应答的量向所述受试者施用根据权利要求1到22中任一项所述的重组HCMV载体。32.一种根据权利要求1到22中任一项所述的重组HCMV载体在制造用于治疗或预防受试者的病原体感染的药物中的用途。33.根据权利要求1到22中任一项所述的重组HCMV载体，其用于治疗或预防受试者的病原体感染。34.一种治疗受试者的自身免疫性疾病或病症的方法，所述方法包括以有效引起对至
少一种异源抗原的CD8+T细胞应答的量向所述受试者施用根据权利要求1到22中任一项所述的重组HCMV载体。35.一种根据权利要求1到22所述的重组HCMV载体在制造用于治疗或预防受试者的自身免疫性疾病或病症的药物中的用途。36.根据权利要求1到22中任一项所述的重组HCMV载体，其用于治疗或预防受试者的自身免疫性疾病或病症。37.根据权利要求25到36中任一项所述的方法、供使用的CMV载体或制造用途，其中由所述重组HCMV载体引起的CD8+T细胞中至少10％受MHC
‑
E或其直系同源物的限制。38.根据权利要求37所述的方法、供使用的CMV载体或制造用途，其中由所述重组HCMV载体引起的CD8+T细胞中至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％受MHC
‑
E或其直系同源物的限制。39.根据权利要求25到36中任一项所述的方法、供使用的CMV载体或制造用途，其中由所述重组HCMV载体引起的CD8+T细胞中至少10％受MHC
‑
II或其直系同源物的限制。40.根据权利要求39所述的方法、供使用的CMV载体或制造用途，其中由所述重组HCMV载体引起的CD8+T细胞中至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％或至少75％受MHC
‑
II或其直系同源物的限制。41.根据权利要求25到36中任一项所述的方法、供使用的CMV载体或制造用途，其中由所述重组HCMV载体引起的CD8+T细胞中少于10％、少于20％、少于30％、少于40％或少于50％受MHC
‑
Ia类或其直系同源物的限制。42.根据权利要求25到36中任一项所述的方法、供使用的CMV载体或制造用途，其中由所述重组HCMV载体引起的CD8+T细胞中至少10％受MHC
‑
Ia类或其直系同源物的限制。43.根据权利要求42所述的方法、供使用的CMV载体或制造用途，其中由所述重组HCMV载体引起的至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或CD8+T细胞受MHC
‑
Ia类或其直系同源物的限制。44.根据权利要求25到36中任一项所述的方法、供使用的CMV载体或制造用途，其进一步包括从由所述重组HCMV载体引起的CD8+T细胞中鉴定CD8+TCR，其中所述CD8+TCR识别MHC
‑
II/异源抗原源性肽复合物。45.根据权利要求25到36中任一项所述的方法、供使用的CMV载体或制造用途，其进一步包括从由所述HCMV载体引起的CD8+T细胞中鉴定CD8+TCR，其中所述CD8+TCR识别MHC
‑
E/异源抗原源性肽复合物。46.根据权利要求25到36中任一项所述的方法、供使用的CMV载体或制造用途，其进一步包括从由所述HCMV载体引起的CD8+T细胞中鉴定CD8+TCR，其中所述CD8+TCR识别MHC
‑
Ia类/异源抗原源性肽复合物。47.根据权利要求44到46所述的方法、供使用的CMV载体或制造用途，其中所述CD8+TCR是通过DNA或RNA测序鉴定的。48.根据权利要求44所述的方法、供使用的CMV载体或制造用途，其中所述CD8+TCR识别MHC
‑
II超表位。49.根据权利要求45所述的方法、供使用的CMV载体或制造用途，其中所述CD8+TCR识别MHC
‑
E超表位。
50.根据权利要求49所述的方法、供使用的CMV载体或制造用途，其中所述MHC
‑
E超表位是人免疫缺陷病毒表位。51.根据权利要求50所述的方法、供使用的CMV载体或制造用途，其中所述MHC
‑
E超表位与以下的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％相同：LDAWEKIRLRPGGKK(SEQ ID NO：13)；DAWEKIRLR(SEQ ID NO：14)；KKAQQAAADTGNSSQ(SEQ ID NO：15)；KAQQAAADT(SEQ ID NO：16)；QMVHQAISPRTLNAW(SEQ ID NO：17)；HQAISPRTL(SEQ ID NO：18)；NTMLNTVGGHQAAMQ(SEQ ID NO：19)；VGGHQAAMQ(SEQ ID NO：20)；STLQEQIGWMTNNPP(SEQ ID NO：21)；STLQEQIGW(SEQ ID NO：22)；IVRMYSPVSILDIRQ(SEQ ID NO：23)；RMYSPVSIL(SEQ ID NO：24)；QKQEPIDKELYPLAS(SEQ ID NO：25)；KQEPIDKEL(SEQ ID NO：26)；SFSFPQITLWQRPLV(SEQ ID NO：27)；VRQYDQILIEICGKK(SEQ ID NO：28)；EPFRKQNPDIVIYQL(SEQ ID NO：29)；YVDGAANRETKLGKA(SEQ ID NO：30)；EEHEKYSNWRAMAS(SEQ ID NO：31)；或ILDLWVYHTQGYFPD(SEQ ID NO：32)。52.一种产生识别MHC
‑
E肽复合物的CD8+T细胞的方法，所述方法包括：a.以有效产生识别MHC
‑
E/肽复合物的一组CD8+T细胞的量向第一受试者施用根据权利要求5到10、12到13或16到17中任一项所述的重组HCMV载体；b.从所述一组CD8+T细胞中鉴定第一CD8+TCR，其中所述第一CD8+TCR识别MHC
‑
E/异源抗原源性肽复合物；c.从第二受试者中分离一个或多个CD8+T细胞；以及d.将所述一个或多个CD8+T细胞用表达载体转染，由此产生识别MHC
‑
E肽复合物的一个或多个CD8+T细胞，其中所述表达载体包括编码第二CD8+TCR的核酸序列和与编码所述第二CD8+TCR的所述核酸序列可操作地连接的启动子，其中所述第二CD8+TCR包括所述第一CD8+TCR的CDR3α和CDR3β。53.一种产生识别MHC
‑
E肽复合物的CD8+T细胞的方法，所述方法包括：a.从一组CD8+T细胞中鉴定第一CD8+TCR，其中所述一组CD8+T细胞由根据权利要求5到10、12到13或16到17中任一项所述的重组HCMV载体产生，其中所述第一CD8+TCR识别MHC
‑
E/异源抗原源性肽复合物；b.从第二受试者中分离一个或多个CD8+T细胞；以及c.将所述一个或多个CD8+T细胞用表达载体转染，由此产生识别MHC
‑
E肽复合物的一个或多个TCR转基因CD8+T细胞，其中所述表达载体包括编码第二CD8+TCR的核酸序列和与编码所述第二CD8+TCR的所述核酸序列可操作地连接的启动子，其中所述第二CD8+TCR包括所述第一CD8+TCR的CDR3α和CDR3β。54.根据权利要求52或53所述的方法，其中所述第一CD8+T细胞识别MHC
‑
E超表位。55.根据权利要求54所述的方法，其中所述MHC
‑
E超表位包括人免疫缺陷病毒表位。56.根据权利要求54到55中任一项所述的方法，其中所述MHC
‑
E超表位与以下的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％相同：LDAWEKIRLRPGGKK(SEQ ID NO：13)；DAWEKIRLR(SEQ ID NO：14)；KKAQQAAADTGNSSQ(SEQ ID NO：15)；KAQQAAADT(SEQ ID NO：16)；QMVHQAISPRTLNAW(SEQ ID NO：17)；HQAISPRTL(SEQ ID NO：18)；NTMLNTVGGHQAAMQ(SEQ ID NO：19)；VGGHQAAMQ(SEQ ID NO：20)；STLQEQIGWMTNNPP(SEQ ID NO：21)；STLQEQIGW(SEQ ID NO：22)；IVRMYSPVSILDIRQ(SEQ ID NO：23)；RMYSPVSIL(SEQ ID NO：
24)；QKQEPIDKELYPLAS(SEQ ID NO：25)；KQEPIDKEL(SEQ ID NO：26)；SFSFPQITLWQRPLV(SEQ ID NO：27)；VRQYDQILIEICGKK(SEQ ID NO：28)；EPFRKQNPDIVIYQL(SEQ ID NO：29)；YVDGAANRETKLGKA(SEQ ID NO：30)；EEHEKYSNWRAMAS(SEQ ID NO：31)；或ILDLWVYHTQGYFPD(SEQ ID NO：32)。57.根据权利要求52到56中任一项所述的方法，其中所述第二CD8+T细胞识别MHC
‑
E超表位。58.根据权利要求57所述的方法，其中所述MHC
‑
E超表位包括人免疫缺陷病毒表位。59.根据权利要求57到58中任一项所述的方法，其中所述MHC
‑
E超表位与以下的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％相同：LDAWEKIRLRPGGKK(SEQ ID NO：13)；DAWEKIRLR(SEQ ID NO：14)；KKAQQAAADTGNSSQ(SEQ ID NO：15)；KAQQAAADT(SEQ ID NO：16)；QMVHQAISPRTLNAW(SEQ ID NO：17)；HQAISPRTL(SEQ ID NO：18)；NTMLNTVGGHQAAMQ(SEQ ID NO：19)；VGGHQAAMQ(SEQ ID NO：20)；STLQEQIGWMTNNPP(SEQ ID NO：21)；STLQEQIGW(SEQ ID NO：22)；IVRMYSPVSILDIRQ(SEQ ID NO：23)；RMYSPVSIL(SEQ ID NO：24)；QKQEPIDKELYPLAS(SEQ ID NO：25)；KQEPIDKEL(SEQ ID NO：26)；SFSFPQITLWQRPLV(SEQ ID NO：27)；VRQYDQILIEICGKK(SEQ ID NO：28)；EPFRKQNPDIVIYQL(SEQ ID NO：29)；YVDGAANRETKLGKA(SEQ ID NO：30)；EEHEKYSNWRAMAS(SEQ ID NO：31)；或ILDLWVYHTQGYFPD(SEQID NO：32)。60.根据权利要求52到59中任一项所述的方法，其中所述第一CD8+TCR是通过DNA或RNA测序鉴定的。61.根据权利要求52到60中任一项所述的方法，其中编码所述第二CD8+TCR的所述核酸序列与编码所述第一CD8+TCR的所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：克劳斯，
申请(专利权)人：俄勒冈健康与科学大学，
类型：发明
国别省市：