一种液质联用测定血浆中氨氯地平浓度的方法技术

本发明专利技术公开了一种液质联用测定血浆中氨氯地平浓度的方法，以氨氯地平

【技术实现步骤摘要】
一种液质联用测定血浆中氨氯地平浓度的方法


[0001]本专利技术涉及医药
，更具体地说，涉及一种液质联用测定血浆中氨氯地平浓度的方法。

技术介绍

[0002]氨氯地平(Amlodipine,AML)为硝苯地平类钙拮抗药。抑制钙诱导的主动脉收缩作用是硝苯地平的2倍。其氨氯地平特点为与受体结合和解离速度较慢，因此药物作用出现迟而维持时间长。对血管平滑肌的选择性作用大于硝苯地平。在心肌缺血者本品可增加心输出量及冠脉流量，增加心肌供氧及减低耗氧，改善运动能力。此外，本品可能激活LDL受体，减少脂肪在动脉壁累积及抑制胶原合成，因而具有抗动脉硬化作用。
[0003]口服吸收缓慢，达峰时间为6～8h，生物利用度为64％，表观分布容积为21L/kg。大部分在肝脏代谢，代谢物无钙拮抗作用。清除率为7ml/kg
·
min，消除半减期为36h；在老年人及肝功能减退者本品消除减慢，消除半减期分别延长至48h及60h。进食不影响本品药动学。
[0004]目前现有技术检测人血浆中的氨氯地平的分析方法参差不齐，其通量、选择性、灵敏度均有待探讨。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种液质联用测定血浆中氨氯地平浓度的方法，用以解决上述
技术介绍
中存在的技术问题。
[0006]本专利技术技术方案提供一种液质联用测定血浆中氨氯地平浓度的方法，血浆样品经预处理后经高效液相色谱
‑
串联质谱检测其浓度，包括以下步骤：
[0007]S1:血浆样品预处理：以K2EDTA为抗凝剂，以氨氯地平
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d4为内标；在96孔板的孔中加入50μL样品，加入50μL浓度为1.000ng/mL的内标氨氯地平
‑
d4工作溶液，混匀后每一个样品孔中加入250μL体积比为100:0.2的乙腈：乙酸的混合溶液，封板，混匀5min，样品在4℃，2623g离心5min；取离心后上清液100μL至另一96孔收集板中，加入200μL体积比为50:50:0.5的甲醇：水：甲酸的混合溶液，封板，混匀；样品在4℃，2623g离心5min，待进样，以上过程均在室温黄光条件下操作；
[0008]S2:试样测定：取10μL测试样品注入高效液相色谱串联质谱仪中，检测样品中的氨氯地平和内标氨氯地平
‑
d4的色谱峰，并据此计算所述血浆样品中的氨氯地平浓度。
[0009]在一个优选地实施例中，液相色谱条件为：色谱柱：Thermo Scientific Hypersil GOLD100
×
2.1mm 1.9μm；色谱柱温：40℃；流动相A：水/乙酸的体积百分比为100/0.05；流动相B：纯乙腈；洗针液：水/甲醇/甲酸的体积百分比为20/80/0.1；柱塞清洗液：水/甲醇体积百分比为90/10；自动进样器温度为4℃；梯度洗脱，流速为0.4mL/min，进样量为10μL，分析时间5min；氨氯地平和氨氯地平
‑
d4预期保留时间约在2.70min。
[0010]在一个优选地实施例中，质谱条件为：离子源为电喷雾离子源，离子传输管温度为
325℃，蒸汽温度为350℃。氨氯地平和氨氯地平
‑
d4的碰撞电压均为10V，正离子方式检测；扫描方式为多重反应监测。用于定量分析的离子反应分别为：氨氯地平：m/z 409.1
→
238.0和氨氯地平
‑
d4：m/z 413.3
→
238.0。
[0011]在一个优选地实施例中，S2中采用内标法，以氨氯地平和内标氨氯地平
‑
d4的峰面积比值带入标准曲线方程计算所述血浆样品中的氨氯地平的浓度，标准曲线方程通过质控样品验证。
[0012]在一个优选地实施例中，所述标准曲线方程的建立包括以下步骤：
[0013]A1:取190μL空白血浆置于聚丙烯管中，以工作液的形式分别添加10μL浓度分别为1.600、3.200、8.000、16.000、32.000、64.000、128.000、160.000ng/mL的氨氯地平工作溶液；
[0014]A2:混匀后分别取50μL标样1、标样2、标样3、标样4、标样5、标样6、标样7、标样8、零浓度样本加入50μL的1.000ng/mL的内标氨氯地平
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d4溶液，向双空白样本中加入50μL的体积分数为50％的甲醇水溶液；
[0015]A3:混匀后每一个样品孔中加入250μL体积比为100:0.2的乙腈：乙酸的混合溶液，封板，混匀5min，样品在4℃，2623g离心5min；
[0016]A4:取离心后上清液100μL至另一96孔收集板中，加入200μL体积比为50:50:0.5的甲醇：水：甲酸的混合溶液，封板，混匀；样品在4℃，2623g离心5min，待进样。以上过程均在室温黄光条件下操作；
[0017]A5:分别取10μL标准样品注入高效液相色谱串联质谱仪中，检测样品中的氨氯地平和内标氨氯地平
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d4的色谱峰，并据此得到标准曲线，以用于回算所述血浆样品中的氨氯地平的浓度。
[0018]在一个优选地实施例中，所述质量控制的建立包括以下步骤：
[0019]B1:配制氨氯地平浓度为1.600、4.800、24.000、48.000、120.000ng/mL的质控样品工作液；
[0020]B2:取380μL空白血浆置于聚丙烯管中，分别添加质控工作液20μL混匀后分别取质控样品50μL加入50μL的1.000ng/mL的内标氨氯地平
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d4溶液；
[0021]B3:混匀后每一个样品孔中加入250μL体积比为100:0.2的乙腈：乙酸的混合溶液，封板，混匀5min，样品在4℃，2623g离心5min；
[0022]B4:取离心后上清液100μL至另一96孔收集板中，加入200μL体积比为50:50:0.5的甲醇：水：甲酸的混合溶液，封板，混匀；样品在4℃，2623g离心5min，待进样，以上过程均在室温黄光条件下操作；
[0023]B5:分别取10μL标准样品注入高效液相色谱串联质谱仪中，检测质控样品中的氨氯地平和内标氨氯地平
‑
d4的色谱峰，并根据标准曲线回算出质控样品测定浓度。
[0024]本专利技术技术方案的有益效果是：
[0025](1)使用同位素内标，保证待测物与内标洗脱的一致性；
[0026](2)预处理方法较简便，适用于高通量测定；
[0027](3)专属性强：在本实验所用的色谱条件下，氨氯地平保留时间为2.70min左右，内标氨氯地平
‑
d4保留时间在2.70min左右。氨氯地平和内标氨氯地平
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d4的峰形良好，无杂峰明显干扰测定，基线平稳；
[0028](4)本专利技术方法快速、准确、特异性强、灵敏度低，为氨氯地平的血药浓度测定提供依据；本方法的血本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种液质联用测定血浆中氨氯地平浓度的方法，其特征在于，血浆样品经预处理后经高效液相色谱
‑
串联质谱检测其浓度，包括以下步骤：S1:血浆样品预处理：以K2EDTA为抗凝剂，以氨氯地平
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d4为内标；在96孔板的孔中加入50μL样品，加入50μL浓度为1.000ng/mL的内标氨氯地平
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d4工作溶液，混匀后每一个样品孔中加入250μL体积比为100:0.2的乙腈：乙酸的混合溶液，封板，混匀5min，样品在4℃，2623g离心5min；取离心后上清液100μL至另一96孔收集板中，加入200μL体积比为50:50:0.5的甲醇：水：甲酸的混合溶液，封板，混匀；样品在4℃，2623g离心5min，待进样，以上过程均在室温黄光条件下操作；S2:试样测定：取10μL测试样品注入高效液相色谱串联质谱仪中，检测样品中的氨氯地平和内标氨氯地平
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d4的色谱峰，并据此计算所述血浆样品中的氨氯地平浓度。2.根据权利要求1所述的液质联用测定血浆中氨氯地平浓度的方法，其特征在于，液相色谱条件为：色谱柱：Thermo Scientific Hypersil GOLD 100
×
2.1mm 1.9μm；色谱柱温：40℃；流动相A：水/乙酸的体积百分比为100/0.05；流动相B：纯乙腈；洗针液：水/甲醇/甲酸的体积百分比为20/80/0.1；柱塞清洗液：水/甲醇体积百分比为90/10；自动进样器温度为4℃；梯度洗脱，流速为0.4mL/min，进样量为10μL，分析时间5min；氨氯地平和氨氯地平
‑
d4预期保留时间约在2.70min。3.根据权利要求1所述的液质联用测定血浆中氨氯地平浓度的方法，其特征在于，质谱条件为：离子源为电喷雾离子源，离子传输管温度为325℃，蒸汽温度为350℃。氨氯地平和氨氯地平
‑
d4的碰撞电压均为10V，正离子方式检测；扫描方式为多重反应监测。用于定量分析的离子反应分别为：氨氯地平：m/z 409.1
→
238.0和氨氯地平
‑
d4：m/z 413.3
→
238.0。4.根据权利要求1所述的液质联用测定血浆中氨氯地平浓度的方法，其特征在于，S2中采用内标法，以氨氯地平和内标氨氯地平
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d4的峰面积比值带入标准曲线方程计算所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭德应，许杨，陈莉梅，曾虹，
申请(专利权)人：安徽万邦医药科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：