一种高效分泌Nisin的基因工程菌构建方法及其工程菌和应用技术

本发明专利技术公开了一种高效分泌Nisin的基因工程菌构建方法及其工程菌和应用，本发明专利技术属于工业微生物技术领域。本发明专利技术通过来源于质粒pUC57的前乳链菌肽基因nisA和抗Nisin基因nisI、来源于乳酸乳球菌CICC6242的参与Nisin表达的调控基因nisRK及其自有启动子组成的重组质粒pNZ8148

【技术实现步骤摘要】
一种高效分泌Nisin的基因工程菌构建方法及其工程菌和应用


[0001]本专利技术属于工业微生物
，具体涉及一种高效分泌Nisin的基因工程菌构建方法及其工程菌和应用。

技术介绍

[0002]由金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌以及肉毒梭菌等革兰氏阳性致病菌感染引起的胃肠道以及呼吸道疾病严重危害畜牧业的健康发展。目前我国养殖户主要通过饲料中添加广谱抗生素来防治幼畜细菌性腹泻等多种疾病，但长期大量使用抗生素导致动物胃肠道菌群失衡，抗药性增加。同时，随着我国饲料禁抗政策的全面落实，亟需开发能抑制金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌等革兰氏阳性致病菌生长，预防幼畜腹泻等胃肠道疾病的新型饲料添加剂。
[0003]1928年，Rogers和Whittier首次发现乳酸乳球菌的代谢产物能够抑制部分革兰氏阳性菌的生长。1944年，Mattick和Hirsch发现一些乳酸乳球菌能产生蛋白类抑菌物质，命名为N
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inhibitory Substance，简称Nisin(乳酸链球菌素)。此后，众多发现报道了乳酸乳球菌具有产“Nisin”的能力，并本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高效分泌Nisin的基因工程菌构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)从质粒pUC57中PCR扩增获得nisAI基因，将其与线性化的质粒pNZ8148连接获得重组质粒pNZ8148
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AI；(2)从乳酸乳球菌CICC6242基因组DNA中PCR扩增获得nisRK基因及其自有启动子，并将其与线性化的质粒pNZ8148
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AI连接获得重组表达载体pNZ8148
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AIRK；(3)将pNZ8148
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AIRK单重转化导入乳酸乳球菌CICC6242，从而获得高效分泌Nisin的基因工程菌株。2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(1)的PCR扩增反应体系为：其中所述上游引物和下游引物分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示，PCR反应条件为：95℃预变性5min；95℃变性30s、55℃退火30s、72℃延伸1min，30个循环；最后72℃总延伸10min。3.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)的PCR扩增反应体系为：征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：武刚，刘文庆，张丽，薛虎平，俞颖，胡海燕，陈玉玲，李萍，张甲戌，
申请(专利权)人：甘肃奥林贝尔生物工程研究院有限公司甘肃奥谱金肽生物工程技术有限公司，
类型：发明
国别省市：