一种检测极端嗜盐生物中氨酰-tRNA合成酶和tRNA活性的系统及方法技术方案

本发明专利技术公开了一种检测极端嗜盐生物中氨酰

【技术实现步骤摘要】
一种检测极端嗜盐生物中氨酰-tRNA合成酶和tRNA活性的系统及方法


[0001]本专利技术涉及一种检测极端嗜盐生物中氨酰-tRNA合成酶和tRNA活性的系统及方法。

技术介绍

[0002]基因密码子拓展技术可通过基因编码的方式合成携带非天然氨基酸的蛋白质，为进一步拓展蛋白质的结构和功能开辟了新的路径，并在生物探针、成像、药物设计开发等多个领域展现出广阔的应用前景。
[0003]基于非天然氨基酸的应用，其先决条件是需要在宿主细胞体内引入高度正交的翻译工具(即，外源引入的翻译工具不能和宿主细胞中任何内源的tRNA、氨酰-tRNA合成酶、氨基酸或密码子相互反应)。如图1所示，该编码过程必须满足以下的条件：(1)使用空白的密码子用于非天然氨基酸的重新编码：目前，主流研究思路是利用琥珀终止密码子(UAG)来编码非天然氨基酸；(2)改造后的翻译工具酶(氨酰-tRNA合成酶)能够特异性地识别非天然氨基酸，并将其连接到对应的tRNA上；(3)被激活的tRNA能够特异性地识别空白密码子，并携带非天然氨基酸到核糖体用于翻译过程中多肽链的延长。
[本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测翻译工具是否具有合成非天然氨基酸的蛋白质的活性的方法；所述翻译工具为待测氨酰-tRNA合成酶和待测tRNA；所述方法包括如下步骤：(1)制备具有功能元件表达框的重组表达载体；功能元件表达框包括如下元件：报告蛋白的编码基因、待测氨酰-tRNA合成酶的编码基因、待测tRNA的编码基因；功能元件表达框中，报告蛋白的编码基因和待测氨酰-tRNA合成酶的编码基因以多顺反子形式被组成型启动子驱动表达；所述报告蛋白自N端至C端包括如下两个区段：标签蛋白区段、SAMP1
G24amb
蛋白区段；SAMP1
G24amb
蛋白区段对应于SAMP1蛋白的第2-87位氨基酸残基，并且相对于SAMP1蛋白的第2-87位氨基酸残基的编码基因而言，SAMP1
G24amb
蛋白区段的编码基因中进行了一个密码子替换，该密码子为SAMP1蛋白的第24位氨基酸残基的密码子，由甘氨酸密码子替换为了“TAG”；(2)将具有功能元件表达框的重组表达载体导入目标菌株，得到重组菌；(3)在含有非天然氨基酸的环境中培养重组菌，然后检测重组菌中报告蛋白的表达情况。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)中，采用蛋白免疫印迹法检测重组菌的全菌蛋白中报告蛋白的表达情况。3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述目标菌株为嗜盐底盘菌。4.如权利要求1至3中任一所述的方法，其特征在于：具有功能元件表达框的重组表达载体先借助甲基化系统缺失的大肠杆菌进行扩繁，再导入所述目标菌株。5.如权利要求4所述的方法，其特征在于：所述重组表达载体的出发载体为可在大肠杆菌和沃氏富盐菌中复制的穿梭质粒。6.如权利要求1至5中任一所述的方法，其特征在于：功能...

【专利技术属性】
技术研发人员：付宪，张浩霖，沈玥，
申请(专利权)人：深圳华大生命科学研究院，
类型：发明
国别省市：