一种硫酸化慈姑多糖及其制备方法与用途技术

本发明专利技术提供了一种硫酸化慈姑多糖组分，所述的硫酸化慈姑多糖组分中总糖含量为46.71

【技术实现步骤摘要】
一种硫酸化慈姑多糖及其制备方法与用途


[0001]本专利技术属于天然产物制备和应用领域，具体涉及一种硫酸化慈姑多糖及其制备方法与用途。

技术介绍

[0002]慈姑(Sagittaria trifolia L.)是泽泻科植物慈姑的块茎，在我国具有悠久的药用历史，早在魏晋时期就以“乌芋”入册《名医别录》记载为“味苦、甘、微寒、无毒；主治消渴、痹热、热中、益气”。作为“江南水八仙”特色水生蔬菜之一，慈姑广泛种植于我国江浙地区，种植面积高达20000公顷。慈姑富含淀粉、多糖、萜类、维生素、微量元素等多种营养成分与生物活性物质。其中，慈姑多糖具有抗肿瘤、增强机体免疫力、保肝、抗氧化等广泛的药理作用，是慈姑主要的功能成分(Journal of the Science of Food and Agriculture,2021,101(8):3085
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3098)。
[0003]心血管疾病(Cardiovascular diseases,CVD)是全球致死率最高的疾病。在我国，CVD患者约为2.9亿，死亡率高于恶性肿瘤，占疾病死亡构成的40％以上。血栓是导致CVD的“元凶”，凝血与抗凝血失衡导致血液凝固性过高而诱发血栓，加速CVD进程，抗凝血是CVD防治的基础与关键(Nature Reviews Cardiology,2011,8(9):502
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512)。肝素及其衍生物是临床应用最为广泛的抗凝血药物，尽管其在CVD防治方面发挥了重要作用，但过度抗凝所致的出血并发症始终无法克服(American Journal of Perinatology,2018,35(9):898
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903)。因此，新型抗凝血药物的开发一直是生物医药领域最为关注的问题之一。
[0004]近年来，植物多糖的抗凝血作用逐渐引起人们关注，发现枸杞(中国食品学报,2015,15(10):157
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162)、绿茶(Carbohydrate Polymers,2013,92(2):1086
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1090)、南瓜(International journal of biological macromolecules,2018,106:447)等多糖均具有抗凝血功能。
[0005]目前慈姑多糖的研究集中于提取、分离与增强机体免疫力、抗氧化、保肝等活性研究(CN 108421279A；CN108324729A；Carbohydrate Polymers,2020,229:115355；Carbohydrate Polymers,2020,246:116595；Food Research International,2020,136:109345；Journal of Ethnopharmacology,2018,227:237
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245)，硫酸化修饰及抗凝血应用均未见报道。本专利技术提供了一种硫酸化慈姑多糖的制备方法、结构特征及其抗凝血用途，为新型抗凝血新药的开发提供先导化合物。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于解决现有技术中的不足，提供了一种硫酸化慈姑多糖，所述硫酸化慈姑多糖具有优异的抗凝血活性，能显著(P<0.01)延长TT、PT、APTT，降低FIB浓度；延长TT的能力显著高于同浓度肝素，延长PT和APTT的能力与同浓度肝素相当。
[0007]根据本专利技术的第一个方面，本专利技术提供了一种硫酸化慈姑多糖，所述硫酸化慈姑多糖为慈姑多糖与氨基磺酸硫酸化所得；所述硫酸化慈姑多糖的硫酸基取代度为0.33～
1.48。
[0008]根据本专利技术的第二个方面，本专利技术提供了一种硫酸化慈姑多糖的制备方法，包括如下步骤：慈姑多糖与氨基磺酸置于有机溶剂中，加热反应一定时间；冷却至室温，碱性溶液淬灭反应，调节反应液pH至中性，乙醇沉淀得沉淀物，沉淀物采用蒸馏水用蒸馏水复溶，流水透析，冷冻干燥得不同取代度的PST；例如具体步骤可以为：准确称量100mg慈姑多糖组分PST置于圆底烧瓶当中，按照不同质量比分别加入一定量氨基磺酸，然后加入10mL N,N
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二甲基甲酰胺(DMF)，打开磁力搅拌器将其充分混匀后，80℃反应3h；冷却至室温后，加入1mol/L的NaOH溶液淬灭反应，将pH值调至中性；加入3倍体积无水乙醇于4℃沉淀12h；将沉淀物用蒸馏水复溶，流水透析48h，冷冻干燥得不同取代度的PST；
[0009]优选的，所述慈姑多糖与氨基磺酸的质量比为1:1～1:8，进一步优选1:4；
[0010]优选的，所述硫酸化慈姑多糖的硫酸基取代度为0.33～1.48。
[0011]优选的，所述慈姑多糖组分与氨基磺酸的质量比为1:4，得到的硫酸化慈姑多糖的硫酸基取代度为1.01。此时制备出的硫酸化慈姑多糖中总糖含量为46.71
±
2.31％、糖醛酸含量为1.77
±
0.11％、硫酸基含量为12.22
±
0.5％、硫酸基取代度1.01；所得到的硫酸化慈姑多糖包含如下摩尔比的单糖，半乳糖醛酸：葡萄糖：半乳糖：阿拉伯糖＝1.00:19.54:3.51:1.25；所述的硫酸化慈姑多糖组分的分子量为4.165
×
105kDa；所述的硫酸化慈姑多糖组分表面呈现大小不一的中空蜂窝状聚集球体，平均高度为141.4nm。
[0012]优选的，所述硫酸化慈姑多糖制备过程中原料慈姑多糖为分离纯化的慈姑多糖，包含如下步骤：：
[0013]1)慈姑粗多糖的提取
[0014]新鲜慈姑洗净切片，干燥后粉碎过筛制成慈姑粉备用；脱脂后得慈姑脱脂粉；慈姑脱脂粉采用热水提取法提取，乙醇沉淀，沉淀物冷冻干燥得慈姑粗多糖；具体为：将新鲜慈姑洗净切片，于60℃烘干至恒重，粉碎后过60目筛制成慈姑粉备用；加入石油醚避光脱脂12h，减压抽滤得慈姑脱脂粉；将慈姑脱脂粉以40:1的液料比在水中浸泡4h后，85℃热水提取1h，过滤，重复三次，合并滤液，减压浓缩至原体积的1/5；加入3倍体积无水乙醇于4℃沉淀12h，沉淀物经冷冻干燥得慈姑粗多糖；提取率为9.93
±
0.74％；
[0015]2)慈姑粗多糖的分离纯化
[0016]对慈姑粗多糖采用Sevag试剂脱蛋白，除去残留的Sevag试剂后透析，透析液冷冻干燥后得慈姑纯化多糖；慈姑纯化多糖上样至二乙氨基乙基(DEAE)纤维素
‑
52色谱柱，用去离子水进行洗脱(每100mg慈姑纯化多糖样品，可以用100～150mL去离子水洗脱)，收集去离子水洗脱下的多糖组分，浓缩后透析3次，冷冻干燥得慈姑多糖组分PST；
[0017]具体步骤为：采用Sevag试剂(正丁醇:氯仿＝4:1)脱蛋白3次；除去残留的Sevag试剂后透析3次(即采用截留分子量为7000Da的透析袋，蒸馏水透析24h，重复三次)；透析液冷冻干燥后得慈姑纯化多糖；称取100mg纯化多糖溶于20mL去离子水中，上样至二乙氨基本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种硫酸化慈姑多糖，所述硫酸化慈姑多糖为慈姑多糖与氨基磺酸硫酸化所得；所述硫酸化慈姑多糖的硫酸基取代度为0.33～1.48。2.根据权利要求1所述的硫酸化慈姑多糖，其特征在于：所述硫酸化慈姑多糖的硫酸基取代度为1.01。3.一种硫酸化慈姑多糖的制备方法，包括如下步骤：慈姑多糖与氨基磺酸置于有机溶剂中，加热反应一定时间；冷却至室温，碱性溶液淬灭反应，调节反应液pH至中性，乙醇沉淀得沉淀物，沉淀物采用蒸馏水用蒸馏水复溶，蒸馏水透析，冷冻干燥得不同取代度的硫酸化慈姑多糖。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述慈姑多糖组分与氨基磺酸的质量比为1:1～1:8。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述硫酸化慈姑多糖的硫酸基取代度为0.33～1.48。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述慈姑多糖组分与氨基磺酸的质量比为1:4，得到的硫酸化慈姑多糖的硫酸基取代度为...

【专利技术属性】
技术研发人员：张扬，杨景淳，李英杰，刘一辉，肖珊珊，高嘉，杨贵洪，沈影超，
申请(专利权)人：常熟理工学院，
类型：发明
国别省市：