一种能够抵抗高糖和过氧化氢引起的视网膜损伤的枸杞多糖制造技术

本发明专利技术提供一种具有良好防治老年性黄斑变性和糖尿病引起的视网膜病变作用的枸杞均一性多糖。是将枸杞的水提液经过分子量为10kDa和5kDa的超滤膜进行分离，将透过10kDa的膜组件，并被5kDa的膜组件截留的枸杞水提液组分冷冻干燥后，脱除蛋白和色素，再进行透析；将纯化后的产物进行柱层析，使用氯化钠溶液洗脱，收集组分，1000Da的透析袋进行透析，透析产物冷冻干燥后再次溶于蒸馏水中，用葡聚糖凝胶进一步分离，收集组分后冷冻干燥，即可完成制备。所提供的枸杞多糖具有防治老年性黄斑变性作用和糖尿病引起的视网膜病变作用，能够用于制备保健食品、特殊医学用途食品或新药。特殊医学用途食品或新药。特殊医学用途食品或新药。

【技术实现步骤摘要】
一种能够抵抗高糖和过氧化氢引起的视网膜损伤的枸杞多糖


[0001]本专利技术属于药学化学
，具体涉及一种能够抵抗高糖和过氧化氢引起的视网膜损伤的枸杞多糖。

技术介绍

[0002]老年性黄斑变性(AMD)是一种以慢性炎症、氧化应激和衰老为特征的退行性疾病，在全球55岁以上的人群中普遍存在。AMD主要影响中央凹黄斑区，病情发展可导致永久性视力障碍或失明，严重影响生活质量。研究表明氧化应激是AMD的主要触发因素，氧化应激通过产生自由基、活性物质和氧化相关反应导致细胞损伤。人们普遍认为，自由基紊乱与氧代谢或氧化应激有关，这不仅在正常衰老中起着重要作用，而且在视网膜变性的进展中也起着重要作用。视网膜色素上皮细胞在维持光感受器和脉络膜毛细血管之间的视网膜功能方面起着关键作用；而活性氧在衰老过程中逐渐损伤视网膜色素上皮细胞，导致蛋白质错误折叠、细胞功能异常和视网膜色素上皮细胞损伤，这些都是AMD的特征性病理指标。
[0003]枸杞子由于其良好的营养和医疗价值而日益受到欢迎。现代药理学和天然药物化学研究表明，多糖是枸杞的主要活性成分之一，其对健康的益处与其抗氧化特性密切相关。大量的文献报告显示枸杞多糖对保护视力具有显著作用，不仅有利于减少视网膜的细胞凋亡和氧化应激，也能提高新生大鼠视网膜神经节细胞的存活率，从而有效缓解由缺血引起的视网膜功能障碍，同时减少相关的神经元死亡和胶质细胞激活，防治早期ADM的发生。然而，已有的研究都只是在粗多糖水平，对具有功能性单一多糖的确切结构以及它如何阻止AMD的机理并没有被报道过。/>
技术实现思路

[0004]本专利技术提供一种具有抵抗高糖和过氧化氢引起的视网膜损伤作用的枸杞均一性多糖，该枸杞多糖具有保护视力的功效，能够用于制备保健食品、特殊医学用途食品或新药。
[0005]本专利技术所提供的枸杞多糖LICP009
‑
3F
‑
2a，其结构式如下所示：
[0006][0007]本专利技术所提供的枸杞多糖LICP009
‑
3F
‑
2a，采用凝胶渗透色谱测定的分子量为13720Da。
[0008]所提供的枸杞多糖LICP009
‑
3F
‑
2a中，鼠李糖：阿拉伯糖：半乳糖：葡糖糖：半乳糖
醛酸和葡萄糖醛酸的摩尔比为：39.1:7.4:22.5:8.3:13.7:4.0。
[0009]本专利技术所提供的枸杞多糖LICP009
‑
3F
‑
2a，其制备方法包括如下的步骤：
[0010]将枸杞的水提取液进行离心，然后将上清液先用分子量为10kDa和5kDa的超滤膜进行超滤，将截留液进行冷冻干燥后，再用蒸馏水进行复溶；溶液进行脱除蛋白和脱除色素处理后，再进行透析；将纯化后的产物进行柱层析分离，依次使用蒸馏水和氯化钠溶液洗脱，收集组分，收集的组分再次进行透析，透析产物冷冻干燥后再次溶于蒸馏水中，用葡聚糖凝胶层析柱进行分离，收集洗脱液组分后冷冻干燥完成制备。
[0011]所述的脱除蛋白，作为实施例的一种具体记载，是使用三氯乙酸脱除蛋白。
[0012]所述的脱除色素，作为实施例的一种具体记载，是使用30％的过氧化氢脱除色素。
[0013]所述的透析，作为实施例的一种具体记载，是使用分子量为1000Da的透析袋进行透析。
[0014]所述的柱层析，作为实施例的一种具体记载，是使用DEAE
‑
52层析柱和Sephadex G
‑
50层析柱。
[0015]所述的柱层析的洗脱液中氯化钠溶液的浓度为0.2M。
[0016]本专利技术所提供的枸杞多糖可用于制备用于防治老年性黄斑变性或糖尿病引起的视网膜病变的制品中。
[0017]所述的制品为保健食品、特殊医学用途食品或药品。
附图说明
[0018]图1：LICP009
‑
3F
‑
2a的凝胶渗透色谱图。
[0019]图2：(A)单糖标准品的离子色谱图(1:Fuc；2:GalN；3:Rha；4:Ara；5:GlcN；6:Gal；7:Glc；8:GlcNAc；9:Xyl；10:Man；11:Fru；12:Rib；13:GalA；14:GulA；15:GlcA；16:ManA)；(B)LICP009
‑
3F
‑
2a的离子色谱图。
[0020]图3：(A)LICP009
‑
3F
‑
2a的红外光谱图；(B)LICP009
‑
3F
‑
2a的XRD谱图。
[0021]图4：LICP009
‑
3F
‑
2a的核磁图谱。
[0022]图5：LICP009
‑
3F
‑
2a的二维核磁谱图。
[0023]图6：(A)LICP009
‑
3F
‑
2a(100、200和400μg/mL)对ARPE
‑
19细胞增殖的影响图，(B)LICP009
‑
3F
‑
2a(100、200和400μg/mL)处理的ARPE
‑
19细胞中检测到的H2O2诱导的ROS的荧光图像。(C)在不同浓度的LICP009
‑
3F
‑
2a存在下用H2O2处理的ARPE
‑
19细胞的存活率。LICP009
‑
3F
‑
2a(100、200和400μg/mL)对H2O2诱导的ARPE
‑
19细胞中(D)CAT、(E)SOD1和(F)MMP2水平的影响。
[0024]图7：(A)LICP009
‑
3F
‑
2a(50、100、200和400μg/mL)对高糖处理的ARPE
‑
19细胞活力的影响。(B)LICP009
‑
3F
‑
2a(100、200和400μg/mL)对ARPE
‑
19细胞中高糖诱导的细胞凋亡标志物Bax水平的影响。
具体实施方式
[0025]本专利技术采用H2O2和高糖诱导的人视网膜上皮细胞试验，发现了一种具有良好防治老年性黄斑变性和糖尿病引起的视网膜病变作用的新型的、结构均一的枸杞多糖。
[0026]该枸杞多糖的制备方法，是将枸杞的水提取液进行离心，然后将上清液先用分子
量为10kDa和5kDa的超滤膜进行超滤分离。
[0027]将截留液进行冷冻干燥后，再用蒸馏水进行复溶；溶液进行脱除蛋白和脱除色素处理后，再进行透析；将纯化后的产物进行柱层析分离，依次使用蒸馏水和氯化钠溶液洗脱，收集组分，收集的组分再次进行透析，透析产物冷冻干燥后再次溶于蒸馏水中，用葡聚糖凝胶层析柱本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种枸杞多糖，其特征在于，所述的枸杞多糖的结构式如下所示：2.如权利要求1所述的枸杞多糖，其特征在于，所述的枸杞多糖采用凝胶渗透色谱测定的分子量为13720Da。3.如权利要求1所述的枸杞多糖，其特征在于，所述的枸杞多糖中鼠李糖：阿拉伯糖：半乳糖：葡糖糖：半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸的摩尔比为39.1:7.4:22.5:8.3:13.7:4.0。4.如权利要求1所述的枸杞多糖，其特征在于，所述的枸杞多糖的制备方法包括如下的步骤：将枸杞的水提取液进行离心，然后将上清液先用分子量为10kDa和5kDa的超滤膜进行超滤，将截留液进行冷冻干燥后，再用蒸馏水进行复溶；溶液进行脱除蛋白和脱除色素处理后，再进行透析；将纯化后的产物进行柱层析分离，依次使用蒸馏水和氯化钠溶液洗脱，收集组分，收集的组分再次进行透析，透析产物冷冻干燥后再次溶于蒸馏水中，用葡聚糖凝胶层析柱...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘建飞，邸多隆，
申请(专利权)人：中国科学院兰州化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：