含有抗PCSK9抗体的稳定制剂及其制备方法和用途技术

本发明专利技术涉及含有高浓度抗PCSK9抗体的稳定的制剂，该制剂包括治疗有效剂量的抗PCSK9抗体或其抗原结合片段、药学上可接受的缓冲剂、渗透压调节剂和/或表面活性剂，所述的制剂具有长期稳定性。当所述制剂为液体制剂或冻干制剂复溶后的液体制剂时，其具有低粘度和长期稳定性。本发明专利技术还提供了所述制剂的制备方法，及其在制备治疗、预防和/或改善任何与PCSK9相关疾病或症状的药物中的用途。疾病或症状的药物中的用途。

【技术实现步骤摘要】
含有抗PCSK9抗体的稳定制剂及其制备方法和用途
[0001]本申请主张2020.10.13日提交的中国申请号为CN202011092207.8、专利技术名称为含有抗PCSK9抗体的稳定制剂及其制备方法和用途的优先权。


[0002]本专利技术涉及医药领域，更具体的，本专利技术涉及一种含有抗PCSK9抗体的稳定制剂及其制备方法，以及该稳定制剂在用于治疗、预防或改善与PCSK9活性相关疾病的药物中的用途。

技术介绍

[0003]前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin型9(Proprotein convertase subtilisin/kexin type 9，PCSK9)，也称作神经细胞凋亡调节转化酶1(NARC
‑
1)，是丝氨酸蛋白酶的枯草杆菌蛋白酶(S8)家族中的激素原
‑ꢀ
前蛋白转化酶，其表达于具有增殖和分化能力的细胞中，包括肝细胞、肾间质细胞、回肠与结肠上皮细胞和胚胎端脑神经元等。研究发现PCSK9在肝细胞和神经细胞的分化中发挥作用，其不仅可以特异性作用于胆固醇生物合成或摄取，而且循环PCSK9可以直接与肝细胞表面低密度脂蛋白受体(LDLR)结合，与LDLR一起被肝细胞吞噬，促进LDLR在肝细胞中降解，阻碍LDLR的循环使用，从而增加血浆中 LDL胆固醇(LDL
‑
C)的含量，而LDL
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C表达升高与人类血脂异常及心血管相关疾病密切相关。由此可见，PCSK9是胆固醇稳态和循环低密度脂蛋白(LDL)水平的关键调节因子。此外，PCSK9具有多种突变体，包括S127R、N157K、F216L、R218S及D374Y，其中S127R、F216L及D374Y与常染色体显性高胆固醇血症(ADH)相关，该病症是遗传性代谢紊乱，其特征为血浆中LDL浓度和胆固醇水平显著增加，从而导致早发性心血管疾病。当PCSK9功能被抑制后，肝细胞表面的LDLR数量增加，以清除更多的循环LDL，并且血浆胆固醇水平也相应降低。因此，抑制PCSK9作用可有效降低血浆LDL水平，由此，PCSK9成为了治疗动脉粥样硬化、冠心病、高胆固醇血症及血脂异常等疾病的潜在靶标。
[0004]抗PCSK9单克隆抗体可特异性靶向结合PCSK9，通过抑制PCSK9与肝细胞表面的LDLR相互作用，减少LDLR的内吞和降解，可显著降低循环LDL
‑
C的浓度。抗PCSK9单抗具有特异性强、安全性好、用药方便等优势，在治疗高胆固醇血症、高血脂及其相关的心血管疾病等领域中具有重要的临床应用前景。
[0005]CN201710816808.0公开了一种新颖的针对前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶Kexin 9型(PCSK9)的单克隆抗体。
[0006]治疗性抗PCSK9抗体与其他大分子治疗剂一样，不仅需要配制为适合于给药的药物溶液，而且需要在制造、储存以及之后的使用过程中保持其稳定性。但是治疗性抗体溶液在制造或储存过程中会受到物理和化学不稳定因素(例如聚集、变性、交联、脱酰胺化、异构化、氧化和剪切等)的影响。因此，在配制抗体液体制剂的稳定性不仅取决于制剂中辅料的类型，还取决于有效治疗成分与辅料以及辅料之间的相对用量和比例。
[0007]心血管相关病症作为慢性疾病，其患者若能够在家自行用药的话，抗体药物皮下
注射便成为其首选的给药方式。
[0008]由于细胞外基质的存在，药物流动性受到限制，通常情况下皮下注射体积一般限定在1
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2mL，抗体制剂浓度需达到100mg/mL以上才能满足临床用药剂量的要求，但是高浓度抗体蛋白一方面会增加可溶性和不溶性蛋白质
‑
蛋白质聚集体和颗粒沉淀物，从而导致制剂稳定性差，同时蛋白构象的不稳定也会引起化学性质，如电荷异质性的显著变化，对下游工艺(例如，超滤和无菌过滤)和储存期间质量稳定性产生不良影响；另一方面，高浓度蛋白由于蛋白质作为大分子物质以及分子间相互作用，会导致蛋白粘度增加，限制了蛋白药物递送装置的选择以及对药物通过注射装置皮下给药所带来的诸如不易推注、注射疼痛和灼热感等诸多问题，从而影响了患者用药的依从性；第三方面，对于期望用于皮下施用的高浓度蛋白的液体制剂，需要添加高浓度的稳定剂(例如糖类、多元醇、氨基酸、络合剂、表面活性剂等)，以实现蛋白质长期稳定性。但是所得到的溶液制剂通常会因为组织损害而引起注射疼痛。
[0009]CN201380035382.5公开了一种稳定的制剂，其包含：至少一种特异性结合PCSK9的单克隆抗体，其中PCSK9包含所述专利技术专利SEQ ID NO.1的氨基酸，所述单克隆抗体的量为约40mg/ml至约 300mg/ml；及量为约0.05mM至约40mM的药学上可接受的缓冲剂；及量为约0.01％w/v至约20％w/v 的药学上可接受的表面活性剂；及约0.5％w/v至约10％w/v的至少一种药学上可接受的稳定剂，其中所述稳定的制剂的pH在约4.0至约6.0之间。
[0010]CN201280037861.6公开了一种医药配制剂，含有：(i)一种与人类前蛋白转化酶枯草溶菌素9(人PCSK9)特异性结合的抗体；(ii)一种pH值为6.0
±
0.3的缓冲剂；(iii)一种非离子型去污剂；以及(iv)一种稳定剂。
[0011]CN201710816808.0所记载的抗体由于物质特性与现有技术CN201380035382.5和CN201280037861.6 的抗体存在较大不同，采用相应制剂方案难以解决前述皮下注射液体制剂所存在的问题。
[0012]因此，亟需开发一种高浓度、低粘度、等渗、具有长期稳定性、制备工艺简单、易于质量控制以及方便患者皮下给予使用的抗PCSK9抗体制剂。

技术实现思路

[0013]本专利技术从解决现有技术的不足出发，提供了一种含有抗PCSK9抗体的稳定制剂，该制剂具有适于皮下注射给药的低粘度的高浓度抗体、具有长期稳定性以及患者依从性高等特点。
[0014]本专利技术的上述目的通过如下技术方案实现：
[0015]一方面，本专利技术提供一种含有抗PCSK9抗体的稳定的制剂，其包含：
[0016](1)浓度为50
‑
200mg/mL抗PCSK9抗体或其抗原结合片段；和
[0017](2)浓度为1
‑
50mmol/L(mM)的药学上可接受的缓冲剂；和
[0018](3)浓度为0
‑
0.1％w/w的药学上可接受的表面活性剂；和
[0019](4)浓度为100
‑
400mmol/L(mM)或1
‑
10％w/w的一种以上其他药学上可接受的赋形剂。
[0020]所述制剂可以是液体制剂，也可以是冻干等可以复溶为液体的制剂剂型；优选为液体制剂。
[0021]所述的抗PCSK9抗体或其抗原结合片段可特异性结合至PCSK9蛋白，可以是多克隆抗体，也可以是单克隆抗体，优选可以规模化生产具有均质性的单克隆抗本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种稳定的制剂，包含：(1)浓度为50
‑
200mg/mL抗PCSK9抗体或其抗原结合片段；和(2)浓度为1
‑
50mmol/L的药学上可接受的缓冲剂；和(3)浓度为0
‑
1％w/w的药学上可接受的表面活性剂；和(4)浓度为100
‑
400mmol/L或1
‑
10％w/w的一种以上其他药学上可接受的赋形剂；其中所述的抗PCSK9抗体或其抗原结合片段包含重链互补决定区(HCDRs)和轻链互补决定区(LCDRs)，其中HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列包含与SEQ ID NO:1,2和3所示的氨基酸序列具有至少85％,86％,87％,88％,89％,90％,91％,92％,93％,94％,95％,96％,97％,98％,99％或100％的同一性；LCDR1、LCDR2和LCDR3包含与SEQ ID NO:4，5和6所示的氨基酸序列具有至少85％,86％,87％,88％,89％,90％,91％,92％,93％,94％,95％,96％,97％,98％,99％或100％的同一性。2.如权利要求1所述的稳定的制剂，其特征在于，所述的抗PCSK9抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述的重链可变区包含与SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列具有至少85％,86％,87％,88％,89％,90％,91％,92％,93％,94％,95％,96％,97％,98％,99％或100％的同一性；所述的轻链可变区包含与SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列具有至少85％,86％,87％,88％,89％,90％,91％,92％,93％,94％,95％,96％,97％,98％,99％或100％的同一性。3.如权利要求1或2所述的稳定的制剂，其特征在于，所述的抗PCSK9抗体或其抗原结合片段包含重链恒定区和轻链恒定区，所述的重链恒定区选自人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4恒定区，优选地，IgG1或IgG4恒定区，更优选的是IgG4恒定区，其氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示；所述轻链恒定区选自人κ轻链恒定区或λ轻链恒定区，优选κ轻链恒定区，其氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示。4.如权利要求1
‑
3任一项所述的稳定的制剂，其特征在于，所述的抗PCSK9抗体或其抗原结合片段包含两条重链和两条轻链或由两条重链和两条轻链组成，所述的重链具有SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列，轻链具有SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列。5.如权利要求1
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4任一项所述的稳定的制剂，其特征在于，所述的每个重链互补决定区和/或每个轻链互补决定区根据Kabat定义、Chothia定义、Kabat定义和Chothia定义的组合、IMGT定义、AbM定义或CDR的接触定义来定义；优选地，每个CDR根据Kabat的CDR定义或Chothia的CDR定义或二者的组合来定义。6.如权利要求1
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5中任一项所述的稳定的制剂，其特征在于，所述的抗PCSK9抗体或其抗原结合片段的浓度为70
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200mg/mL。7.如权利要求1
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5中任一项所述的稳定的制剂，其特征在于，所述的药学上可接受的缓冲剂选自：组氨酸、醋酸盐、琥珀酸盐、或谷氨酸盐，所述的缓冲剂浓度为5
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50mmol/L，优选的是10
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30mmol/L；优选的缓冲剂是由L
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组氨酸和L
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组氨酸盐酸盐组成的组氨酸缓冲剂。8.如权利要求1
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5中任一项所述的稳定的制剂，其特征在于，所述的药学上可接受的表面活性剂为聚山梨醇酯80或聚山梨醇酯20，所述的表面活性剂的浓度为0.01
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0.05％(w/w)。9.如权利要求1
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5中任一项所述的稳定的制剂，其特征在于，所述的一种其他药学上可接受的赋形剂选自脯氨酸、蔗糖、氯化钠、山梨醇、甘露...

【专利技术属性】
技术研发人员：靳开远，邢亚非，阳勇，
申请(专利权)人：信立泰成都生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：