一种甲状腺类器官培养基、甲状腺类器官培养及传代方法技术

本发明专利技术公开了一种甲状腺类器官培养基、甲状腺类器官培养及传代方法，甲状腺类器官培养基包括Advanced DMEM/F12培养基和如下组分：B

【技术实现步骤摘要】
一种甲状腺类器官培养基、甲状腺类器官培养及传代方法


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体涉及一种甲状腺类器官培养基、甲状 腺类器官培养及传代方法。

技术介绍

[0002]甲状腺是脊椎动物非常重要的腺体，属于内分泌器官。位于哺乳动物类的 颈部甲状软骨下方，气管两旁。甲状腺癌是最常见的甲状腺恶性肿瘤，约占全 身恶性肿瘤的1％，包括乳头状癌、滤泡状癌、未分化癌和髓样癌四种病理类 型。以恶性度较低、预后较好的乳头状癌最常见，除髓样癌外，绝大部分甲状 腺癌起源于滤泡上皮细胞。甲状腺癌的治疗方法主要取决于患者的年龄、肿瘤 的病理类型、病变的程度以及全身状况等，以手术为首选，术后辅以内分泌治 疗，必要时选用放、化疗在内的综合治疗方法。
[0003]类器官和3D培养系统正在成为重要的药物筛选模型以研究个性化医疗 和理解人体器官的发展。类器官是由多能干细胞或器官祖细胞分化，并自组装 成有结构和功能的完整哺乳动物器官。形成各种类器官往往需要培养基、基质、 生长因子和小分子化合物等等组分。目前国内外关于甲状腺类器官的研究报道 很少，尚未有人成功提出在体外长期稳定培养甲状腺类器官的模型，已有的培 养基和方法亦不能很好地培养得到甲状腺类器官。如何找到一种能够有效地培 养得到甲状腺类器官的培养基、高效的甲状腺类器官的培养及传代方法是目前 亟待解决的技术问题。

技术实现思路

[0004]为此，本专利技术提供一种甲状腺类器官培养基、甲状腺类器官培养及传代方 法，以解决现有技术无法有效培养得到甲状腺类器官的问题。<br/>[0005]为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0006]根据本专利技术的第一方面，本专利技术提供一种甲状腺类器官培养基，包括 Advanced DMEM/F12培养基和如下组分：B
‑
27、N
‑
乙酰半胱氨酸、烟酰胺、 R
‑
spondin1重组蛋白、头蛋白、Wnt
‑
3a、表皮细胞生长因子、A83
‑
01、促甲状 腺激素、氢化可的松、胰岛素、成纤维细胞生长因子
‑
10以及Y27632。
[0007]进一步地，所述甲状腺类器官培养基还包括FGF7和/或SB202190。
[0008]进一步地，所述B
‑
27的浓度为A(1x)，所述N
‑
乙酰半胱氨酸的浓度为 2
‑
3mM，所述烟酰胺的浓度为8
‑
12mM，所述R
‑
spondin1重组蛋白的浓度为 150
‑
250ng/mL，所述头蛋白的浓度为80
‑
120ng/mL，所述Wnt
‑
3a的浓度为 20
‑
40ng/mL，所述表皮细胞生长因子的浓度为40
‑
60ng/mL，所述A83
‑
01的 浓度为0.5
‑
1.5mM，所述促甲状腺激素的浓度为10
‑
20mIU/mL，所述氢化可的 松的浓度为3
‑
7μg/mL，所述胰岛素的浓度为7
‑
8μg/mL，所述成纤维细胞生 长因子
‑
10的浓度为50
‑
150ng/mL，所述Y27632的浓度为5
‑
15μM。
[0009]进一步地，所述B
‑
27的浓度为A(1x)，所述N
‑
乙酰半胱氨酸的浓度为 2.5mM，所述烟酰胺的浓度为10mM，所述R
‑
spondin1重组蛋白的浓度为 200ng/mL，所述头蛋白的浓度为
100ng/mL，所述Wnt
‑
3a的浓度为30ng/mL，所述表皮细胞生长因子的浓度为50ng/mL，所述A83
‑
01的浓度为1mM，所述促甲状腺激素的浓度为15mIU/mL，所述成纤维细胞生长因子
‑
10的浓度为100ng/mL，所述Y27632的浓度为10μM，所述氢化可的松的浓度为5μg/mL，所述胰岛素的浓度为7.5μg/mL。
[0010]进一步地，所述B
‑
27的浓度为A(1x)，所述N
‑
乙酰半胱氨酸的浓度为2
‑
3mM，所述烟酰胺的浓度为8
‑
12mM，所述R
‑
spondin1重组蛋白的浓度为150
‑
250ng/mL，所述头蛋白的浓度为80
‑
120ng/mL，所述Wnt
‑
3a的浓度为20
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40ng/mL，所述表皮细胞生长因子的浓度为40
‑
60ng/mL，所述A83
‑
01的浓度为0.5
‑
1.5mM，所述促甲状腺激素的浓度为10
‑
20mIU/mL，所述氢化可的松的浓度为3
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7μg/mL，所述胰岛素的浓度为7
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8μg/mL，所述成纤维细胞生长因子
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10的浓度为50
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150ng/mL，所述Y27632的浓度为5
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15μM，所述FGF7的浓度为45
‑
55ng/mL，所述SB202190的浓度为2.5
‑
3.5uM。
[0011]进一步地，所述B
‑
27的浓度为A(1x)，所述N
‑
乙酰半胱氨酸的浓度为2.5mM，所述烟酰胺的浓度为10mM，所述R
‑
spondin1重组蛋白的浓度为200ng/mL，所述头蛋白的浓度为100ng/mL，所述Wnt
‑
3a的浓度为30ng/mL，所述表皮细胞生长因子的浓度为50ng/mL，所述A83
‑
01的浓度为1mM，所述促甲状腺激素的浓度为15mIU/mL，所述成纤维细胞生长因子
‑
10的浓度为100ng/mL，所述Y27632的浓度为10μM，所述氢化可的松的浓度为5μg/mL，所述胰岛素的浓度为7.5μg/mL，所述FGF7的浓度为50ng/mL，所述SB202190的浓度为3uM。
[0012]根据本专利技术的第二方面，本专利技术提供一种甲状腺类器官的培养方法，包括如下步骤：
[0013]S1.将甲状腺组织用预冷的DPBS溶液洗净后剪碎至2
‑
3mm大小的组织块；
[0014]S2.将步骤S1得到的所述组织块用含有I型胶原酶和Dispase的AdvancedDMEM/F12溶液，依次在37℃下水浴振荡消化30min分钟、用移液枪吹打10
‑
20次和静置，待未消化的所述组织块自然沉降，收集上清液于15mLBD管；在所述AdvancedDMEM/F12溶液本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种甲状腺类器官培养基，其特征在于，包括Advanced DMEM/F12培养基和如下组分：B
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27、N
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乙酰半胱氨酸、烟酰胺、R
‑
spondin1重组蛋白、头蛋白、Wnt
‑
3a、表皮细胞生长因子、A83
‑
01、促甲状腺激素、氢化可的松、胰岛素、成纤维细胞生长因子
‑
10以及Y27632。2.根据权利要求1所述的甲状腺类器官培养基，其特征在于，所述甲状腺类器官培养基还包括FGF7和/或SB202190。3.根据权利要求1所述的甲状腺类器官培养基，其特征在于，所述B
‑
27的浓度为A(1x)，所述N
‑
乙酰半胱氨酸的浓度为2
‑
3mM，所述烟酰胺的浓度为8
‑
12mM，所述R
‑
spondin1重组蛋白的浓度为150
‑
250ng/mL，所述头蛋白的浓度为80
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120ng/mL，所述Wnt
‑
3a的浓度为20
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40ng/mL，所述表皮细胞生长因子的浓度为40
‑
60ng/mL，所述A83
‑
01的浓度为0.5
‑
1.5mM，所述促甲状腺激素的浓度为10
‑
20mIU/mL，所述氢化可的松的浓度为3
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7μg/mL，所述胰岛素的浓度为7
‑
8μg/mL，所述成纤维细胞生长因子
‑
10的浓度为50
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150ng/mL，所述Y27632的浓度为5
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15μM。4.根据权利要求3所述的甲状腺类器官培养基，其特征在于，所述B
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27的浓度为A(1x)，所述N
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乙酰半胱氨酸的浓度为2.5mM，所述烟酰胺的浓度为10mM，所述R
‑
spondin1重组蛋白的浓度为200ng/mL，所述头蛋白的浓度为100ng/mL，所述Wnt
‑
3a的浓度为30ng/mL，所述表皮细胞生长因子的浓度为50ng/mL，所述A83
‑
01的浓度为1mM，所述促甲状腺激素的浓度为15mIU/mL，所述成纤维细胞生长因子
‑
10的浓度为100ng/mL，所述Y27632的浓度为10μM，所述氢化可的松的浓度为5μg/mL，所述胰岛素的浓度为7.5μg/mL。5.根据权利要求2所述的甲状腺类器官培养基，其特征在于，所述B
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27的浓度为A(1x)，所述N
‑
乙酰半胱氨酸的浓度为2
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3mM，所述烟酰胺的浓度为8
‑
12mM，所述R
‑
spondin1重组蛋白的浓度为150
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250ng/mL，所述头蛋白的浓度为80
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120ng/mL，所述Wnt
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3a的浓度为20
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40ng/mL，所述表皮细胞生长因子的浓度为40
‑
60ng/mL，所述A83
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01的浓度为0.5
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1.5mM，所述促甲状腺激素的浓度为10<...

【专利技术属性】
技术研发人员：胥正敏，周春阳，温虎玲，何冠军，王玉泉，陈健，赵永生，雍玺，尤俊，卞娇娇，黄蓉，夏天琴，郭文，林鑫静，
申请(专利权)人：川北医学院，
类型：发明
国别省市：