一种建立乳腺类器官或/和乳腺癌类器官的培养基及方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种建立乳腺类器官或/和乳腺癌类器官的培养基及方法和应用，属于生物医药技术领域，所述培养基为含有如下组分的DMEM/F12完全培养基：雌二醇、氢化可的松、R

【技术实现步骤摘要】
一种建立乳腺类器官或/和乳腺癌类器官的培养基及方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体涉及一种建立乳腺类器官或/和乳腺癌类器官的培养基及方法和应用。

技术介绍

[0002]乳腺癌是乳腺上皮细胞在多种致癌因子的作用下，发生增殖失控的现象。疾病早期常表现为乳房肿块、乳头溢液、腋窝淋巴结肿大等症状，晚期可因癌细胞发生远处转移，出现多器官病变，直接威胁患者的生命。乳腺癌常被称为“粉红杀手”，其发病率位居女性恶性肿瘤的首位，男性乳腺癌较为少见。目前抗乳腺癌的药物水平不均衡，有效的药物十分昂贵且治疗效果不太理想，药物筛选水平层次不齐，缺乏一个能够高度模拟体内微环境的评估系统，类器官培养越来越多地用于实验模拟人类癌症，以期定制个性化药物和预测药物反应。乳腺癌也不例外，但原发性乳腺癌尤其存在一些固有的困难，活检中经常存在残留的非恶性细胞，近来，类器官技术已被用于生成大量乳腺癌类器官，相较于2D的细胞培养，类器官的三维培养更能体现肿瘤组织在体内的生长环境，不管在结构、还是亚细胞种类都高度还原了肿瘤器官的原生态。
[0003]类器官是由多能干细胞或器官祖细胞分化，并自组装成有结构和功能的完整哺乳动物器官，类器官技术在研究广泛的对象方面潜力巨大，包括发育生物学、疾病病理学、细胞生物学、再生机制、精准医疗以及药物毒性和药效试验等。对于这些应用以及其他应用，类器官培养实现了对现有2D培养方法和动物模型系统的高信息量的互补，是二维培养和活体模型之间的重要桥梁，其较单层细胞培养模型更具生理学相关性，同时比活体模型更容易操纵监测信号通路和基因组编辑。类器官的价值在于它们能够自组织成最小的生物单位，表现出与原始组织相似的功能和复杂性。类器官的可操作性预示着类器官将为广泛的基础研究提供出色的模型系统，包括表达谱研究和体内难以获得的稀有细胞谱系的分析。
[0004]类器官在抗肿瘤药物筛选领域表现出了巨大的潜力，药物的筛选测试展示了药物对类器官最直观的表现，高度模拟了药物对器官的效果。因此，亟需一种可以加快乳腺癌细胞的增殖与自组装能力，加快类器官的建立以及提高类器官建立的成功率的培养方法，为乳腺癌类器官的培养提供了多样性。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术的目的之一在于提供一种建立乳腺类器官或/和乳腺癌类器官的培养基；本专利技术的目的之二在于基于所述培养基建立乳腺类器官或/和乳腺癌类器官的方法；本专利技术的目的之三在于提供所述培养基在乳腺癌类器官或/和乳腺类器官筛选抗乳腺癌药物中的应用。
[0006]为达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0007]1、一种建立乳腺类器官或/和乳腺癌类器官的培养基
[0008]所述培养基为含有如下组分的DMEM/F12完全培养基：雌二醇、氢化可的松、R
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Spondin3、Neuregulin 1、FGF7、FGF10、rh
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EGF、PDGF、Noggin、A83
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01、Wnt3a、Y
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27632、SB202190、B27、N
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乙酰半胱氨酸、烟酰胺、GlutaMax、胎牛血清、青霉素/链霉素双抗。
[0009]本专利技术优选的，所述组分的浓度如下：雌二醇10nM
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1000nM、氢化可的松0.1
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100μg/ml、R
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Spondin 3 100
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500ng/ml、Neuregulin 1 1
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10nM、FGF7 1
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10ng/ml、FGF10 10
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100ng/ml、rh
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EGF1
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10ng/ml、PDGF 1
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10ng/ml、Noggin 50
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500ng/ml、A83
‑
01 100
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1000nM、Wnt3a 1
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5nM、Y
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276321
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10μM、SB202190 100
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1000ng、B27 10ng/ml、N
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乙酰半胱氨酸1
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5nM、烟酰胺1
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10nM、GlutaMax 1
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5nM、胎牛血清体积分数10％、青霉素/链霉素双抗体积分数1％。
[0010]2、基于权利要求1或2所述培养基建立乳腺类器官或/和乳腺癌类器官的方法，包括以下步骤：
[0011](1)将获得的乳腺组织或乳腺癌组织制备成单细胞悬液；
[0012](2)将步骤(1)制备的单细胞悬液加入3D培养基质胶重悬，然后接种于培养装置中，加入权利要求1或2所述的培养基，培养箱中扩大培养。
[0013]本专利技术优选的，步骤(1)中，所述乳腺组织或乳腺癌组织的来源于哺乳动物。
[0014]本专利技术优选的，步骤(1)中，所述乳腺组织或乳腺癌组织制备成单细胞悬液具体过程是经过剪碎、研磨、过滤得到。
[0015]本专利技术进一步优选的，步骤(1)中，所述剪碎后组织大小为1cm
×
1cm。
[0016]本专利技术进一步优选的，步骤(1)中，所述过滤为使用200目的滤网过滤。
[0017]本专利技术优选的，步骤(2)中，扩大培养中每三天更换一次培养基。
[0018]3、所述培养基在乳腺癌类器官或/和乳腺类器官筛选抗乳腺癌药物中的应用。
[0019]本专利技术优选的，所述药物包含化疗药物、放疗或/和靶向药物。
[0020]本专利技术的有益效果在于：本专利技术公开了一种建立乳腺类器官或/和乳腺癌类器官的培养基及方法和应用，所述培养基为含有如下组分的DMEM/F12完全培养基：雌二醇、氢化可的松、R
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Spondin 3、Neuregulin 1、FGF7、FGF10、rh
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EGF、PDGF、Noggin、A83
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01、Wnt3a、Y
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27632、SB202190、B27、N
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乙酰半胱氨酸、烟酰胺、GlutaMax、胎牛血清、青霉素/链霉素双抗，所述培养基用于建立乳腺类器官或/和乳腺癌类器官，可以加快乳腺或/和乳腺癌细胞的增殖与自组装能力，提高类器官的建立以及提高类器官建立的成功率。
附图说明
[0021]为了使本专利技术的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本专利技术提供如下附图进行说明：
[0022]图1为配方1
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3的培养基培养乳腺癌类器官14天生长形态图(100倍)；
[0023]图2为配方1
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3的培养基培养乳腺癌类器官培养14天的生长曲线图；
[0024]图3为对比配方1不含重要生长因子PDGF的培养基培养乳腺癌类器官14天生长形态图(100倍)；
[0025]图4为本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种建立乳腺类器官或/和乳腺癌类器官的培养基，其特征在于：所述培养基为含有如下组分的DMEM/F12完全培养基：雌二醇、氢化可的松、R
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Spondin 3、Neuregulin 1、FGF7、FGF10、rh
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EGF、PDGF、Noggin、A83
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01、Wnt3a、Y
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27632、SB202190、B27、N
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乙酰半胱氨酸、烟酰胺、GlutaMax、胎牛血清、青霉素/链霉素双抗。2.根据权利要求1所述建立乳腺类器官或/和乳腺癌类器官的培养基，其特征在于，所述组分的浓度如下：雌二醇10nM
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1000nM、氢化可的松0.1
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100μg/ml、R
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Spondin 3100
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500ng/ml、Neuregulin 1 1
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10nM、FGF7 1
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10ng/ml、FGF10 10
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100ng/ml、rh
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EGF 1
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10ng/ml、PDGF 1
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10ng/ml、Noggin 50
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500ng/ml、A83
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01 100
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1000nM、Wnt3a 1
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5nM、Y
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【专利技术属性】
技术研发人员：黄璘，聂盼，万源，
申请(专利权)人：重庆嘉士腾生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：