肝癌模型细胞、体外培养方法、应用及肝癌动物模型建立方法技术

本申请公开了肝癌模型细胞、体外培养方法、应用及肝癌动物模型建立方法。该肝癌模型细胞按照WB表达检测计，以β

【技术实现步骤摘要】
肝癌模型细胞、体外培养方法、应用及肝癌动物模型建立方法


[0001]本申请涉及肝癌模型
，尤其涉及肝癌模型细胞、体外培养方法、应用及肝癌动物模型建立方法

技术介绍

[0002]在大量的肝癌肿瘤药物研究中，建立大鼠肝癌模型显得尤为重要。常用的大鼠肝癌模型建立分为移植型和原发性两种。
[0003]原发性肝癌模型是利用化学致癌物质诱发大鼠肝癌缓慢发生，这种模型虽然时间较长，但可以观察到肝癌发生发展的主要阶段，有利于肝癌早期瘤前病变的检测。目前国内外有很多用DEN诱发原发性大鼠肝癌的模型，。该模型主要存在的问题是染毒剂量不准确，时间较长。另外，以二乙基亚硝胺为启动剂，藻毒素为促进剂，构建大鼠肿瘤促进模型，观察肝脏病理形态改变，分别运用免疫组化法、原位杂交法检测肝细胞中GST
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Pi蛋白和GST
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Pi mRNA表达情况，然而其得到的动物模型肿瘤体积有限，肿瘤增强、黏附和侵袭能力一般，不利于对肿瘤细胞耐药性进行全面研究。
[0004]移植型肝癌模型通常是将肝癌细胞注射到小鼠腹腔，抽取腹水后分离成细本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种大鼠肝癌模型细胞的体外培养方法，其特征在于，包括以下步骤：获得大鼠肝癌细胞系RH
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35细胞；制备明胶/聚乳酸/透明质酸的混合液，所述混合液是以20～100mg/mL的明胶溶液、2～15mg/mL透明质酸溶液和10～50mg/mL聚乳酸溶液按照1:(1～4):1的比例混合而成；三维培养，将所述RH
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35细胞接种至明胶/聚乳酸/透明质酸组成三维介质和3D培养混合液中培养7～15天，即得。2.根据权利要求1所述的体外培养方法，其特征在于，所述三维培养方法具体包括：第一培养，将所述RH
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35细胞接种至未成凝胶的明胶/聚乳酸/透明质酸混合液和3D培养混合液的培养体系中，浸润后观察细胞在培养皿中生长至70％～80％；及第二培养，收获所述第一培养中得到的细胞，清洗，消化，浓缩后，转移至铺设有明胶/聚乳酸/透明质酸成型的三维培养水凝胶支架和3D培养混合液的环境中培养，培养7～15天，即得。3.根据权利要求2所述的体外培养方法，其特征在于，所述3D培养混合液为包含全氟辛酸或全氟辛烷磺酸钾的高糖DMEM培养液。4.根据权利要求3所述的体外培养方法，其特征在于，所述3D培养混合液包含0.3～10mg/L全氟辛酸或0.3～10mg/L全氟辛烷磺酸钾。5.根据权利要求3所述的体外培养方法，其特征在于，所述高糖DMEM培养液包含116.6mg/L无水氯化钙、59.05mg/L L
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亮氨酸亚油酸、0.042mg/L亚油酸、0.0013mg/L五水硫酸铜、91.25mg/L L
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赖氨酸盐酸盐、0.105mg/L硫辛酸、0.05mg/L九水硝酸铁、17.24mg/L L
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蛋氨酸、8.1mg/L酚红、0.417mg/L七水硫酸亚铁、35.48mg/L L
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苯丙氨酸、0.081mg/L 1,4
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丁二胺二盐酸盐、311.8mg/L氯化钾、26.25mg/L L
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丝氨酸、55mg/L丙酮酸钠、28.64mg/L氯化镁、53.45mg/L L
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苏氨酸、0.0035mg/L维生素H、48.84mg/L无水硫酸镁、4.45mg/L L
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丙...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐博，赖世辉，刘晓萌，王洪权，
申请(专利权)人：广西医科大学，
类型：发明
国别省市：