肺癌类器官培养液及其培养试剂组合和培养方法技术

本申请涉及生物组织工程技术领域，公开一种肺癌类器官培养液及其培养试剂组合和培养方法，所述肺癌类器官培养液包括完全培养基和自源条件培养基；完全培养基包括条件培养基、基础培养基、复合抗生素和生长因子；自源条件培养基是利用肿瘤相关成纤维细胞培养基对肺癌组织提取的纤维细胞进行培养获得。培养液各组分之间协同作用，加快肺癌类器官细胞的形成和生长，增加细胞收获数量的同时还提高培养速度；而且体外培养的类器官更加仿生，能够适用于肺癌类器官的个性化培养，能够维持每一例病人原发组织的形体结构与病理特征。人原发组织的形体结构与病理特征。人原发组织的形体结构与病理特征。

【技术实现步骤摘要】
肺癌类器官培养液及其培养试剂组合和培养方法


[0001]本申请涉及生物组织工程
，例如涉及一种肺癌类器官培养液及其培养试剂组合和培养方法。

技术介绍

[0002]肺癌是我国的十大恶性肿瘤之一。目前，肺癌的病因尚未完全清楚，目前认为主要是环境因素与遗传因素综合作用的结果。肺癌类器官对研究具有很重要的意义。目前虽有一些肺癌类器官培养基的研究报道，但是其培养过程生长慢，增加时间投入成本；且仿生性低。
[0003]在实现本申请实施例的过程中，发现相关技术中至少存在如下问题：现有肺癌类器官的培养过程中，每次传代至少需要培养14天，甚至更多天，才达到传代要求。而且，获得的细胞量也非常少，为了收获更多的细胞，进行下游试验，需要时间更长，使得整个器官的构建过程缓慢，导致肺癌类器官研究的时间成本高，除此之外，更为重要的是，类器官体外培养一段时间后，会发生EMT转变，逐渐丧失体内的间质特性，跟体内真实的肿瘤特性差异会比较大。

技术实现思路

[0004]为了对披露的实施例的一些方面有基本的理解，下面给出了简单的概括。所述概括不是泛泛评述本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种肺癌类器官培养液，其特征在于，包括完全培养基和自源条件培养基，所述完全培养基与所述自源条件培养基的体积比为1～3﹕1；其中，所述完全培养基包括条件培养基、基础培养基、复合抗生素和生长因子；所述条件培养基与所述基础培养基的体积比为1～4﹕1；所述基础培养基包括Advanced DMEM/F12，HEPES 5～15 mM和Glutamax 0.5x～1.5x；所述复合抗生素包括Primocin 50～500μg/mL，青霉素
‑
链霉素0.5x～1.5x和甲硝唑2～10 μg/mL；所述生长因子包括：EGF 10～100 ng/mL，FGF
‑
10 10～100 ng/mL，N2 0.25x～1.5x，B27 0.25x～1.5x，n
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Acetylcysteine 1～2 mM， Nicotinamide 5～20 mM，Gastrin 5～20 nM，Prostaglandin E2 0.2～2 μM，Y
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27632 5～15 μM；所述条件培养基包括两种或三种蛋白条件培养基，其中所述蛋白条件培养基选自Wnt
‑
3a条件培养基，R
‑
spondin1条件培养基和Noggin条件培养基；自源条件培养基是利用肿瘤相关成纤维细胞培养基对肺癌组织提取的自源肿瘤纤维细胞进行培养获得；且所述自源条件培养基中至少包括自源生长因子、自源白介素因子、自源趋化因子，自源基质金属蛋白酶和自源其他因子；所述自源其他因子包括SDF1、VEGFA、TGFβ、PDGFα和PGE2。2.根据权利要求1所述的肺癌类器官培养液，其特征在于，所述生长因子包括：EGF 50 ng/mL，FGF
‑
10 50 ng/mL，N2 0.75x～1x，B27 0.75x～1x，n
‑
Acetylcysteine 1.25～1.5 mM，Nicotinamide 8～10 mM，Gastrin 8～10 nM，Prostaglandin E2 0.5～1 μM，Y
‑
27632 8～10 μM。3.根据权利要求1所述的肺癌类器官培养液，其特征在于，所述复合抗生素包括Primocin 100 μg/mL，青霉素
‑
链霉素1x和甲硝唑4 μg/mL。4.根据权利要求1、2或3所述的肺癌类器官培养液，其特征在于，所述条件培养基包括Wnt
‑
3a条件培养基，R
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spondin1条件培养基和Noggin条件培养基；且所述Wnt
‑
3a条件培养基、所述R
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spondin1条件培养基和所述Noggin条件培养基的体积比依次为0.1～0.8﹕1～2﹕1；或者，所述条件培养基包括R
‑
spondin1条件培养基和Noggin条件培养...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖荣荣，刘建闯，李珮文，孙艳廷，张晓会，周宇，
申请(专利权)人：北京大橡科技有限公司，
类型：发明
国别省市：