一种非小细胞肺癌脑转移和脊髓转移的动物模型构建方法技术

本发明专利技术提出一种非小细胞肺癌脑转移和脊髓转移的动物模型构建方法，涉及生物医学技术领域。该方法通过脑立体定位仪在裸鼠脑部注射经羧甲基纤维素钠溶液固定后的PC

【技术实现步骤摘要】
一种非小细胞肺癌脑转移和脊髓转移的动物模型构建方法


[0001]本专利技术涉及生物医学
，具体而言，涉及一种非小细胞肺癌脑转移和脊髓转移的动物模型构建方法。

技术介绍

[0002]肺癌(Lung cancer)是肺部的恶性肿瘤，是指由肺组织细胞异常生长，并可能侵袭邻近组织器官，转移扩散到身体其他部位的疾病。常见症状有咳嗽、咳血、体重减轻、气短和胸痛等。肺癌根据其组织病理分型，可大致分为非小细胞肺癌(NSCLC，Non
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small cell lung cancer)和小细胞肺癌(SCLC,Small cell lung cancer)。其中，非小细胞肺癌大约占全部肺癌患者的85％，且其5年相对存活率仅有23.3％，已经成为我国社会医疗的重大负担。
[0003]由于脑部结构和脊髓结构具有特殊性，肿瘤接种困难，且检测方式有限，因此，构建动物模型十分必要。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种非小细胞肺癌脑转移和脊髓转移的动物模型构建方法，其能够建立可靠的动物模型，使用价值较高。
[0005]本专利技术解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。
[0006]本专利技术提出一种非小细胞肺癌脑转移和脊髓转移的动物模型构建方法，主要包括以下步骤：
[0007]将PC
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9Luc细胞培养至对数生长期，经消化后，制得细胞悬液；将细胞悬液离心后，与羧甲基纤维素钠溶液混合，制得备用品；将裸鼠麻醉后，以脑立体定位仪对裸鼠的颅骨位置注射备用品，然后饲养裸鼠，对裸鼠进行小动物活体成像荧光信号检测；然后收集裸鼠脑组织和脊椎，切片观察裸鼠脑部和脊髓的肿瘤转移。
[0008]本专利技术实施例的非小细胞肺癌脑转移和脊髓转移的动物模型构建方法至少具有以下有益效果：
[0009]本专利技术提出一种非小细胞肺癌脑转移和脊髓转移的动物模型构建方法，该方法通过脑立体定位仪在裸鼠脑部注射经羟甲基纤维钠溶液固定后的PC
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9Luc细胞，建立非小细胞肺癌脑部转移和脊髓转移的动物模型，准确度较高的同时，可靠性较好。
附图说明
[0010]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
[0011]图1为本专利技术实施例提供的颅骨注射位置在颅骨右下侧的荧光信号检测图；
[0012]图2为本专利技术实施例提供的颅骨注射位置在颅骨右上侧的荧光信号检测图；
[0013]图3为本专利技术实施例提供的裸鼠颅骨注射位置为右下侧的脑部转移结果；
[0014]图4为本专利技术实施例提供的裸鼠颅骨注射位置为右下侧的脊椎转移结果；
[0015]图5为本专利技术实施例提供的裸鼠颅骨注射位置为右上侧的脑部转移结果；
[0016]图6为本专利技术实施例提供的裸鼠颅骨注射位置为右上侧的脊椎转移结果。
具体实施方式
[0017]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0018]需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将参考具体实施例来详细说明本专利技术。
[0019]本专利技术提供一种非小细胞肺癌脑转移和脊髓转移的动物模型构建方法，主要包括以下步骤：将PC
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9Luc细胞培养至对数生长期，经消化后，制得细胞悬液；将细胞悬液离心，加入培养基制成混悬液；将混悬液离心后，与羧甲基纤维素钠溶液混合，制得备用品；将裸鼠麻醉后，以脑立体定位仪对裸鼠的颅骨位置注射备用品，然后饲养裸鼠，对裸鼠进行小动物活体成像荧光信号检测；然后收集裸鼠脑组织和脊椎，切片观察裸鼠脑部和脊髓的肿瘤转移。
[0020]具体地，本申请选择的细胞株为肺腺癌PC
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9Luc细胞作为注射细胞进行培养。当将肺腺癌PC
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9Luc细胞注射到小动物体内时，能够通过荧光检测的方式对细胞的转移位置进行检测，以此可有效验证通过脑立体定位仪注射建立非小细胞肺癌脑转移和脊髓转移动物模型的可靠性。
[0021]本申请中，将获得的PC
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9Luc细胞进行细胞培养。具体如下：将PC
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9Luc细胞培养于含有胎牛血清和潮霉素B的RPMI 1640培养基中，并将PC
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9Luc细胞放置在36℃
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37.3℃和CO2饱和湿度的条件下培养。在上述条件下将细胞培养至对数生长期时，可使得细胞处于活性较高的水平，避免细胞在适应动物体内环境时出现大量死亡的现象，从而影响模型建立结果的可靠性。
[0022]将细胞培养至对数生长期后，加入0.25％的胰酶进行消化，并将细胞吹散，待培养基中细胞重新悬浮时，停止消化，避免细胞消化过度，影响注射细胞的活性，从而影响模型构建的结果。
[0023]制成细胞悬液之后，需将细胞悬液在800rpm
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1000rpm的条件下离心3min
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5min，并除去上清液后，加入培养基进行吹打，充分混悬后，制得混悬液。本申请中，以移液枪吸取培养基，然后吹出培养基，重复50次
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70次后，达到吹打效果。
[0024]制得混悬液后，取特定体积的混悬液，经计数后，与羧甲基纤维素钠混合，制得备用品。
[0025]本申请中，可取10μL
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20μL的混悬液进行计数，降低工作人员工作量的同时还可使得备用品中细胞量达到预期效果。
[0026]另外，本申请中，通过计数的方式确定备用品的细胞量，此时，可以备用品的细胞
量作为影响因子，研究备用品细胞量变化时，非小细胞肺癌的脑转移以及脊髓转移情况，从而建立更为准确的动物模型，实用价值更高。
[0027]本申请中，计数方式采用牛鲍计数板进行计数，达到预期的计数效果。
[0028]计数后，再次进行离心，并根据预设的细胞浓度进行制备备用品。
[0029]本申请中，可将离心后的混悬液与羧甲基纤维素钠溶液混合，获得预设细胞浓度的备用品。其中，羧甲基纤维素钠的水溶液具有粘性，并且其在pH为2至10的区间内可维持体系酸碱度平衡，因此，作为固定细胞的水溶液时具有较高的使用价值。
[0030]本申请中，为使得细胞的固定作用较好，羧甲基纤维素钠溶液的浓度为0.8wt％
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1.2wt％。当羟甲基纤维素溶液的浓度较大时，其水溶液的粘性较大，影响细胞的活性，而当羟甲基纤维素溶液的浓度较低时，其对细胞的固定效果达不到预期，使用效果不佳。
[0031]当细胞准备完本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种非小细胞肺癌脑转移和脊髓转移的动物模型构建方法，其特征在于，包括以下步骤：将PC
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9Luc细胞培养至对数生长期，经消化后，制得细胞悬液；将所述细胞悬液离心后，与羧甲基纤维素钠溶液混合，制得备用品；将裸鼠麻醉后，对所述裸鼠的目标位置注射所述备用品，然后饲养裸鼠，对裸鼠进行小动物活体成像荧光信号检测；然后收集裸鼠脑组织和脊椎，切片观察裸鼠脑部和脊髓的肿瘤转移。2.根据权利要求1所述的非小细胞肺癌脑转移和脊髓转移的动物模型构建方法，其特征在于，所述目标位置具体如下：以前囟为参照点，在颅骨右上侧或右下侧距前囟冠状缝1mm、矢状缝1.5mm处垂直钻孔，即为所述颅骨位置。3.根据权利要求2所述的非小细胞肺癌脑转移和脊髓转移的动物模型构建方法，其特征在于，所述备用品采用脑立体定位仪进行注射，所述脑立体定位仪的进针深度为2.9mm
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3.1mm。4.根据权利要求1
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3任一项所述的非小细胞肺癌脑转移和脊髓转移的动物模型构建方法，其特征在于，将所述细胞悬液在800rpm
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1000rpm的条件下离心3min
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5min。5.根据权利要求1所述的非小细胞肺癌脑转移和脊髓转移...

【专利技术属性】
技术研发人员：张耀帅，李姗姗，刘浩，张语涵，徐廉松，郭宇，
申请(专利权)人：蚌埠医学院，
类型：发明
国别省市：