用于IGF-1基因重组表达的重组细胞和重组表达方法技术

本发明专利技术提供了用于IGF

【技术实现步骤摘要】
用于IGF
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1基因重组表达的重组细胞和重组表达方法


[0001]本专利技术属于基因工程
，具体涉及用于IGF
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1基因重组表达的重组细胞和重组表达方法。

技术介绍

[0002]胰岛素样生长因子(IGF)是一类广谱性促生长因子，其化学结构与胰岛素原类似，为同源的单链多肽，他们分子组成的氨基酸有70％是相同的。IGF在组织或血液中均与胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP)相结合，以复合物的形式存在。血清中含有多种IGF，但到目前为止，已提纯的还只有两种，分别命名为IGF
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I和IGF
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II。这两者占血清中可提取的胰岛素样生长因子总量的90％以上，并且他们在促组织细胞生长发育中起主要作用。机体多种组织器官可以合成分泌IGF
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1，但最主要的器官是肝脏，约合成血液中80％的IGF
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1。另外，骨组织、其他组织和细胞也能合成少量IGF
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1。血液循环中的IGF
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1主要由肝脏分泌，但是它的表达却分布在所本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于IGF
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1基因重组表达的重组细胞，其特征在于，所述重组细胞包含SP
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IGF1
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pET
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28b载体和质粒pATX
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4E，所述SP
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IGF1
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pET
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28b载体上包含有一种信号肽的基因，所述信号肽的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示；所述质粒pATX
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4E上包含有SurA、Trx、DsbA和DsbC的基因。2.根据权利要求1所述的重组细胞，其特征在于，所述SP
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IGF1
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pET
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28b载体的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。3.根据权利要求2所述的重组细胞，其特征在于，所述SP
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IGF1
‑
pET
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28b载体的构建方法包括以下步骤：A1、合成PCR扩增模板将无信号肽基因的IGF
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1基因插入到pET
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21a载体的NdeI/XhoI酶切位点之间，得到序列号如SEQ ID No.3所示的质粒IGF1
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pET
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21a作为PCR扩增模板；A2、构建载体用第一对引物扩增步骤A1中所述PCR扩增模板得到扩增产物P1；以P1为模板，用第二对引物对P1进行扩增得到扩增产物P2；以P2为模板，用第三对引物对P2进行扩增得到扩增产物P3；对P3进行无缝克隆，再插入到pET
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28b载体的NcoI/XhoI酶切位点之间，得到所述SP
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IGF1
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pET
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28b载体。4.根据权利要求1所述的重组细胞，其特征在于，所述质粒pATX
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4E的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。5.根据权利要求4所述的重组细胞，其特征在于，所述质粒pATX
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4E的构建方法包括如下步骤：B1、构建过渡质粒骨架pACYC用第四对引物扩增pACYCDuet
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1质粒得到扩增产物Q1，对Q1进行无缝克隆得到核苷酸序列如SEQ ID No.5所示的过渡质粒骨架pACYC；B2、构建质粒pATX
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1E用第五对引物扩增DsbA的基因及启动子，对得到的扩增产物Q2进行无缝克隆，再插入到所述过渡质粒骨架pACYC的XhoI/HindIII酶切位点之间，得到核苷酸序列如SEQ ID No.6所示的质粒pATX
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1E；B3、构建质粒pATX
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2E用第六对引物扩增包含有AmpR
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pelB
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Trx
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Myc基因的第一pUC57质粒，对得到的产物Q3进行无缝克隆，插入到所述质粒pATX
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1E的KpnI/EcoRI酶切位点之间，得到核苷酸序列如SEQ ID No.7所示的质粒pATX
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2E；B4、构建质粒pATX
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3E用第七对引物扩增带Myc标签的SurA基因，得到扩增产物Q4；用第八对引物扩增Q4，得到扩增产物Q5；对Q5进行无缝克隆，插入到所述质粒pATX
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2E的EcoRI酶切位点处，得到核苷酸序列号如SEQ ID No.8所示的质粒pATX
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3E；B5、构建质粒pATX
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4E用第九对引物扩增包含有Myc
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DsbC

【专利技术属性】
技术研发人员：肖水冰，秦伏波，万定一，鲁亮，张永霞，代腾飞，
申请(专利权)人：普健生物武汉科技有限公司，
类型：发明
国别省市：