本发明专利技术涉及一种用于预测甲状腺乳头状癌淋巴结转移的特异性基因及制备方法，其基因包括：III型胶原蛋白基因α1、I型胶原蛋白基因α1、神经纤维蛋白2、乳脂球表皮生长因子8、谷胱甘肽氧化还原酶4、前蛋白转化酶枯草溶菌素2、抑制素BB、钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶II抑制物1、G蛋白信号转导调节因子5、细胞外基质蛋白1、血小板衍生生长因子A。其制备方法为穿刺甲状腺体的病变组织，经过一系列步骤提取RNA后用定量PCR试剂盒以及所述基因的引物进行PCR反应，把所述目的基因片段扩增出来。本发明专利技术基因的检测能有效地用于临床上判断患甲状腺乳头状癌的病人是否发生淋巴结转移，以利临床专科医生对病人作出合理化治疗。专科医生对病人作出合理化治疗。
【技术实现步骤摘要】
用于预测甲状腺乳头状癌淋巴结转移的特异性基因及制备方法
[0001]本专利技术属于生物医学领域，具体涉及一种用于预测甲状腺乳头状癌淋巴结转移的特异性基因及制备方法。
技术介绍
[0002]分化型甲状腺乳头状癌是常见恶性肿瘤之一，每年新发病例在全球和中国的肿瘤数据库中排名约为第六。发病率高严重影响了广大患者的健康。因其起病隐匿，且容易发生淋巴结转移，主要治疗手段以手术为主。手术后结合病理情况以及是否存在甲状腺腺体外侵犯、淋巴结转移情况，结合ATA指南评价肿瘤风险等级，决定是否需要碘131同位素治疗，以及抑制TSH的标志值。
[0003]如前所述，甲状腺乳头状癌的转移以淋巴结转移为主，许多病例在发病早期即可发生颈淋巴结转移，然而淋巴结转移又是影响甲状腺乳头状癌预后的独立危险因素。目前由于没有能够准确预测甲状腺癌淋巴结转移的方法。有临床研究发现对甲状腺乳头状癌患者进行预防性中央区淋巴结清扫可以找到30～70％的隐匿性(查体和影像学均未发现的)淋巴结转移(病理学诊断)。
[0004]目前国内外对于预防性中央区淋巴结清扫的意见并不统一，国外由于缺少甲状腺专科医生，有研究报道对甲状腺乳头状癌患者进行预防性中央区淋巴结清扫会显著增加手术后并发症，影响患者生活质量，加上手术费用高昂，保险不予支付，因此国外大多数中心并不主张进行预防性中央区淋巴结清扫。而在国内，由于手术费不高，患者对于淋巴结转移影响疾病预后，以及和肿瘤复发相关，如果肿瘤在中央区复发转移，此时进行中央区淋巴结清扫，则会由于是二次手术所导致的局部并发症风险(术后出血、喉上或喉返神经损伤、旁腺损伤所致的低钙血症等)增加，严重危害患者的生活质量，因此患者更愿意在首次甲状腺切除术的同时进行预防性中央区淋巴结清扫，以期达到早期清扫潜在转移灶的目的。
[0005]尽管在一些患者的临床特征找到一些可能与淋巴结转移相关的患者特征，包括肿瘤较大，侵犯包膜，BRAFV600E突变等可能与预后不良、肿瘤复发和同位素治疗疗效不佳有关，但仍无法精准判断除此以外的其他情况是否也存在淋巴结转移，而在上述此类患者当中也有可能不伴有淋巴结转移。由于目前缺乏精准预测淋巴结转移的模型和方法，因此在国内外对于甲状腺乳头状癌患者是否应该接受预防性中央区淋巴结清扫在指南上都是保持谨慎推荐。对于临床评估淋巴结无转移的情况下(cN0)，只在特定条件下可以建议进行中央区淋巴结清扫。主要原因还是在于临床特征并不能达到精准医学的要求，影像学对于<0.5cm的淋巴结转移难以判断是否为恶性，也没有能够预测淋巴结转移的biomarker，即使是与甲状腺癌预后(复发转移风险)密切相关的BRAFV600E突变也不能预测淋巴结转移(图1)，临床特征等证据级别较低。
[0006]本专利技术的目的在于提供一种用于预测甲状腺乳头状癌淋巴结转移的特异性基因及制备方法。
[0007]本专利技术是这样实现的，一种用于预测甲状腺乳头状癌淋巴结转移的特异性基因，其基因包括：III型胶原蛋白基因α1(Collagen type III alpha 1chain,CoL3A1)、I型胶原蛋白基因α1(Collagen type I alpha 1chain,CoL1A1)、神经纤维蛋白2(neuronilin
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2,NRP2)、乳脂球表皮生长因子8(milkfatglobuleepithelialgrowthfactor 8,MFGE8)、谷胱甘肽氧化还原酶4(glutathioneoxidoreductase 4,GPX4)、前蛋白转化酶枯草溶菌素2(Proprotein Convertase Subtilisin/Kexin Type 2，PCSK2)、抑制素BB(inhibin BB,INHBB)、钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶II抑制物1(calcium/calmodulin
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dependent protein kinase II inhibitor 1,CAMK2N1)、G蛋白信号转导调节因子5(regulator of G protein signaling 1,RGS5)、细胞外基质蛋白1(Extracellular matrix protein 1,ECM1)、血小板衍生生长因子A(Platelet Derived Growth Factor SubunitA,PDGFA)。
[0008]一种用于预测甲状腺乳头状癌淋巴结转移的特异性基因之制备方法，其包括以下步骤：
[0009](1)穿刺甲状腺体的病变组织，在提取RNA前先置于RNA保存液冻存于
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20℃环境下保存；
[0010](2)用细胞裂解液、氯仿、DEPC水等试剂提取RNA后保存在
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20℃环境下，或直接进行逆转录反应，将RNA转成cDNA，cDNA可暂存在
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20℃环境下；
[0011](3)用定量PCR试剂盒以及III型胶原蛋白基因α1(Collagen type III alpha 1chain,CoL3A1)、I型胶原蛋白基因α1(Collagen type I alpha 1chain,CoL1A1)、神经纤维蛋白2(neuronilin
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2,NRP2)、乳脂球表皮生长因子8(milkfatglobuleepithelialgrowthfactor 8,MFGE8)、谷胱甘肽氧化还原酶4(glutathioneoxidoreductase 4,GPX4)、前蛋白转化酶枯草溶菌素2(Proprotein Convertase Subtilisin/Kexin Type 2，PCSK2)、抑制素BB(inhibin BB,INHBB)、钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶II抑制物1(calcium/calmodulin
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dependent protein kinase II inhibitor 1,CAMK2N1)、G蛋白信号转导调节因子5(regulator of G protein signaling 1,RGS5)、细胞外基质蛋白1(Extracellular matrix protein 1,ECM1)、血小板衍生生长因子A(Platelet Derived Growth Factor SubunitA,PDGFA)的引物(引物设计的转录本信息来源于Pubmed数据库，转录本信息见下表1)进行PCR反应，把上述目的基因片段扩增出来。
[0012][0013][0014]表1
[0015]本专利技术的优点：该基因的检测能有效地用于临床上判断患甲状腺乳头状癌的病人是否发生淋巴结转移，以利临床专科医生对病人作出合理化治疗；该制备方法结合肿瘤实质中各种不同成分细胞差异表达基因更精准的找到与甲状腺乳头状癌转移密切相关的基因，且这些基因在前期基础或转化研究都得到证实和肿瘤预后不良或转移相关。
附图说明
[0016]图1为对甲状腺结节患者手术前进行BRAFV600E基因突变的病例进行分析本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种用于预测甲状腺乳头状癌淋巴结转移的特异性基因，其特征在于基因包括：III型胶原蛋白基因α1(Collagen type III alpha 1chain,CoL3A1)、I型胶原蛋白基因α1(Collagen type I alpha 1chain,CoL1A1)、神经纤维蛋白2(neuronilin
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2,NRP2)、乳脂球表皮生长因子8(milkfatglobuleepithelialgrowthfactor 8,MFGE8)、谷胱甘肽氧化还原酶4(glutathioneoxidoreductase 4,GPX4)、前蛋白转化酶枯草溶菌素2(Proprotein Convertase Subtilisin/Kexin Type 2，PCSK2)、抑制素BB(inhibin BB,INHBB)、钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶II抑制物1(calcium/calmodulin
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dependent protein kinase II inhibitor 1,CAMK2N1)、G蛋白信号转导调节因子5(regulator of G protein signaling1,RGS5)、细胞外基质蛋白1(Extracellular matrix protein 1,ECM1)、血小板衍生生长因子A(Platelet Derived Growth Factor SubunitA,PDGFA)。2.一种用于预测甲状腺乳头状癌淋巴结转移的特异性基因之制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)穿刺甲状腺体的病变组织，在提取RNA前先置于RNA保存液冻存于
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20℃环境下保存；(2)用细胞裂解液、氯仿、DEPC水等试剂提取RNA后保存在
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20℃环境下，或直接进行逆转录反应，将RNA转成cDNA，cDNA可暂存在
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20℃环境下；(3)用定量PCR试剂盒以及III型胶原蛋...
【专利技术属性】
技术研发人员：张赟建，
申请(专利权)人：张赟建，
类型：发明
国别省市：
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