一种检测白血病融合基因BCOR/RARa的试剂和试剂盒制造技术

本发明专利技术是一种检测白血病融合基因BCOR/RARa的试剂和试剂盒，包括检测融合基因的上下游引物以及探针。本发明专利技术所述试剂和试剂盒特异性好，灵敏度高，通量大，适用于大批量样本的融合基因BCOR/RARa筛查。合基因BCOR/RARa筛查。合基因BCOR/RARa筛查。

【技术实现步骤摘要】
一种检测白血病融合基因BCOR/RARa的试剂和试剂盒


[0001]本专利技术属生命科学和生物
，具体涉及一种白血病融合基因BCOR/RARa检测的引物，方法和试剂盒。
技术背景
[0002]急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia，APL)是(acute myeloid1eukemia,AML)的一个特殊亚型M3型，约占AML的15％，发病年龄以20岁以上中青年为主，病程凶险，有较高的出血倾向和早期死亡率。95％以上的APL患者可见其15号染色体和17号染色体易位，形成特征性的t(15；17)(q22；q21)，即PML
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RARa融合基因，是APL特征性遗传学标志。
[0003]PML
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RARa融合基因编码的PML
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RARa蛋白可与RXRa形成二聚体，竞争野生型的RARa与RXRa的结合，阻止粒细胞分化和成熟，同时异常早幼粒细胞凋亡不足，从而在骨髓中堆积大量的异常早幼粒细胞。全反式维甲酸(ATRA)和亚砷酸(ATO)是APL的主要治疗方案，两者联合应用可使APL的完全缓解率(CR)达到90％以上。研究发现ATRA可靶向降解PML
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RARa融合蛋白，恢复野生型RARa和PML基因功能，重新诱导粒细胞分化成熟。ATO可作用于PML，诱导PML
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RARa融合蛋白和野生型PML蛋白快速降解。两种药物协同作用且无交叉耐药，治疗效果好，使APL成为临床可治愈的急性髓细胞白血病。
[0004]虽然95％以上APL患者均具有PML
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RARa融合基因，但仍有约5％的患者缺乏该融合基因，称为不典型APL患者。不典型APL患者中发现RARa与其它伙伴基因的融合，目前研究报道共有13种，分别为NPM1
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RARa、PLZF
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RARa、BCOR
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RARa、FIP1L1
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RARa、NuMA
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RARa、PRKAR1A
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RARa、OBFC2A
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RARa、STAT5B
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RARa、GTF2I
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RARa、IRF2BP2
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RARa、TBLR1
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RARa、FNDC3B
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RARa和TFG
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RARa融合基因。尽管这些融合基因均与RARa相关，但由于其伙伴基因不同，它们对ATRA和ATO治疗的反应性不一，其中伴有PLZF
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RARa和STAT5B
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RARa融合基因的APL患者对ATRA治疗不敏感或耐受，整体治疗效果不佳，预后不良。伴有BCOR
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RARa融合基因的APL患者对ATRA敏感但对ATO耐受。
[0005]实时荧光PCR综合生物学、酶学和荧光化学于一体，从扩增到结果分析均在封闭状态下的PCR反应管中进行，其结果用Ct值表示，与普通PCR比较，具有特异度好，灵敏度高，操作简单，结果更直观等优点，被认为是目前微量融合基因检测的首选方法。实时荧光PCR中常见的方法有SYBR GreenI染料法，双探针杂交法以及Taqman技术等。其中SYBR GreenI由于是非饱和染料，特异性不如双探针杂交法以及Taqman法，必须通过观察溶解曲线来判断其特异性，而双探针法杂交法成本又较为昂贵。因此本试剂盒采用实时荧光PCR结合Taqman探针检测融合基因BCOR/RARa。

技术实现思路

[0006]本专利技术设计了检测内参/目的基因用引物、探针，采用实时荧光PCR技术，检测内参基因ABL、目的基因BCOR/RARa的表达情况。试剂盒通过调整内参/目的基因的引物探针比
例，以及PCR反应条件，使扩增效率和速率均达到最佳。
[0007]用于检测白血病融合基因BCOR/RARa的试剂，包括扩增目标基因的上下游引物和探针，对应的核苷酸序列如下：
[0008]BCOR/RARa
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F:TGAAAATGACCCACAGTGAAC
[0009]BCOR/RARa
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R:GTGGTAGCCTGAGGACTTGT
[0010]BCOR/RARa
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Probe:FAM
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AGACCCAGAGCAGCAGTTCTGAAGAGA
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TAMRA
[0011]所述试剂还包括用于内参基因扩增的ABL上游引物、下游引物和探针。
[0012]ABL
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F:GATACGAAGGGAGGGTGTACCA
[0013]ABL
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R:CTCGGCCAGGGTGTTGAA
[0014]ABL
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Probe:FAM
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GCTTCTGATGGCAAGCTCTACGTCTCCT
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TAMRA。
[0015]用于BCOR/RARa的检验试剂盒中包括红细胞裂解液、TRIzol、氯仿、无水乙醇、ReverTra Ace qPCR RT Kit(TOYOBO公司)、检测体系PCR反应液、阳性对照品和阴性对照品。
[0016]检测体系PCR反应液包括THUNDERBIRD qPCR MIX(TOYOBO，QPS
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101)、检测目的基因用上下游引物分别为：BCOR/RARa
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F,BCOR/RARa
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R；探针为BCOR/RARa
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Probe，检测内参基因ABL用引物为ABL
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F，ABL
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R，探针为ABL
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Probe。其中，
[0017]BCOR/RARa
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F:TGAAAATGACCCACAGTGAAC
[0018]BCOR/RARa
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R:GTGGTAGCCTGAGGACTTGT
[0019]BCOR/RARa
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Probe:FAM
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AGACCCAGAGCAGCAGTTCTGAAGAGA
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TAMRA
[0020]ABL
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F:GATACGAAGGGAGGGTGTACCA
[0021]ABL
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R:CTCGGCCAGGGTGTTGAA
[0022]ABL
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Probe:FAM
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GCTTCTGATGGCAAGCTCTACGTCTCCT
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TAMRA
[0023]进一步地，所述阳性对照品分别为含有基因BCOR/RARa的溶液；所述阴性对照品为无基因BCOR/RARa的溶液。
[0024]本专利技术采用实时荧光PCR技术结合T本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测白血病融合基因BCOR/RARa的试剂，包括扩增目标基因的上游引物、下游引物和探针，分别为：BCOR/RARa
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F:TGAAAATGACCCACAGTGAACBCOR/RARa
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R:GTGGTAGCCTGAGGACTTGTBCOR/RARa
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Probe:FAM
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AGACCCAGAGCAGCAGTTCTGAAGAGA
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TAMRA。2.根据专利要求1所述的试剂，其特征在于，还包括扩增内参基因A...

【专利技术属性】
技术研发人员：王淑一，何咏梅，
申请(专利权)人：杭州艾迪康医学检验中心有限公司，
类型：发明
国别省市：