一种中生菌素F组分母药及其制备方法技术

本发明专利技术一种中生菌素F组分母药及其制备方法，包括以下步骤：（1）配制生产试管斜面培养基，并在斜面上接入链霉菌，进行培养；当斜面培养基中长出单菌落时用接种针挑出单菌落进入下一步培养；（2）配制菌种发酵的种子培养基，并接种步骤（1）的单菌落进行培养，得到种子培养液；（3）配制发酵罐培养基，接入上步骤（2）得到的种子培养液，其中，种子培养液与发酵培养液体积比为10%

【技术实现步骤摘要】
一种中生菌素F组分母药及其制备方法


[0001]本专利技术属于农药领域，具体涉及一种中生菌素F组分母药及其制备方法。

技术介绍

[0002]中生菌素（zhongshengmycin）又名农抗751菌素、链丝菌素，属N
‑
糖苷类抗生素。根据文献报道，浅灰色链霉菌海南变种（Streptomyces lavendulae var heinanensis n.var）和秦岭链霉菌（Streptomyces qinlingnensis sp. nov）等多个链霉菌均能产生中生菌素。中生菌素抗菌谱广，能抗革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌、分枝杆菌、酵母菌及丝状真菌等，对昆虫也有一定的杀灭作用。其杀菌机理是能够抑制polyU引导的多肽合成，并能导致蛋白翻译中的错读，使细菌不能合成蛋白质而死亡。中生菌素在农业上偏重于水稻白叶枯、黄瓜细菌性角斑病、白菜软腐病、杆菌溃疡病等细菌性病害，也可用于苹果轮纹病、黄瓜霜霉病、灰霉病、白粉病和番茄晚疫病等真菌性病害的防治。中生菌素有多个有效组分，其中，中生菌素F组分是中生菌素中具有较高农药利用价值的组分之一。F组分结构如下（n=1）：由于具有显著且直接杀菌作用，因此产生中生菌素的链霉菌在自然界比较容易被发现并分离得到。本专利技术在长期的野外菌种采集分离中多次得到产生中生菌素的菌株。2003年从蒲城土壤中分离得到一株放线菌，公司菌株编号
Ⅱ‑
D190515，经形态、生理生化、细胞壁特征及分子生物学等特征判断为一株链霉菌。产物分离鉴定发现抑菌成分以中生菌素C、D、F组分为主，未发现报道的中生菌素A和X组分，且B、E组分含量低。随后陕西麦可罗生物科技有限公司菌种中心进行了长期持续不断的单一紫外诱变筛选，得到菌株ZS
‑Ⅱ‑
D190515（2019年经中科院微生物所鉴定，结果同为链霉菌），随后开展了培养基和培养条件优化，液体发酵，产物分离鉴定，活性测试等方面的研究，其具体表征如如图1
‑
3所示。在相关高校和科研单位的协助下，2015
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2020年开始采用10M3发酵罐，深层液体发酵试验，产物试样以乙腈+水+庚烷磺酸钠+磷酸氢二钠+磷酸为流动相，使用RP
‑
C18为填料的不锈钢柱和紫外检测器，在波长200nm对试样中各组分进行高效液相色谱分离，发现产物以中生菌素F为主，未发现A和X组分，同时BCDE等它组分含量低。

技术实现思路

[0003]为了解决现有技术中存在的上述技术问题， 本专利技术提供一种中生菌素F组分母药
及其制备方法。该方法可制造含有60.8
‑
78.7wt%的中生菌素F组分的母药，产品含量远高于目前农业部登记的12%中生菌素母药，溶解于水，不溶物小于0.2%，填补了高纯度中生菌素母药的空白，为混配制剂和含量高于12%农药产品生产开发提供了原料药。
[0004]为了实现专利技术目的，本专利技术采用如下技术方案：一种中生菌素F组分母药的制备方法，包括以下步骤：（1）配制生产试管斜面培养基，并在斜面上接入链霉菌，进行培养；当斜面培养基中长出单菌落时用接种针挑出单菌落进入下一步培养；（2）配制菌种发酵的种子培养基，并接种步骤（1）的单菌落进行培养，得到种子培养液；（3）配制发酵罐培养基，接入上步骤（2）得到的种子培养液，其中，种子培养液与发酵培养液体积比为10%
‑
15%；（4）将发酵液经过过滤、离子交换、洗脱、浓缩、脱色、降温、干燥步骤后得到中生菌素母药。
[0005]更为优选的，所述的制备方法包括以下步骤：（1）生产试管的斜面培养基采用玉米粉或者玉米淀粉作为碳源，用量3
‑
7%；采用尿素作为氮源，用量1
‑
3%；微量元素氯化钠，用量0.1
‑
0.2%；微量元素氯化镁用量0.1
‑
0.2%；磷源采用磷酸二氢钾，用量0.2
‑
0.4%；琼脂用量20g/L；用2mol/L盐酸或2mol/L氢氧化钠调pH值为7.0
‑
7.4；用自来水补足，配制时步骤如下：第一步，在40
±
2℃的自来水中依次加入氯化钠、氯化镁、磷酸二氢钾、尿素，搅拌充分溶解后，再加入玉米淀粉，搅拌至均匀无团块；该步用自来水为总配制用水量的70%，配制过程在水浴中完成；第二步，用第一步同样温度的自来水定容；第三步，用第二步定容好的溶液放置室温，等温度降至20℃如果pH高于7.4，用2mol/L盐酸调整；如果低于7.0，用2mol/L氢氧化钠调整pH；然后加入琼脂，搅拌均匀；第四步，以上调整好的培养基灭菌后制作斜面，并在37℃培养72小时，无杂菌落便可使用；第五步，在斜面上接入链霉菌，培养140
‑
150小时后，长出灰白色菌苔；（2）菌种发酵的种子培养基中采用玉米粉或者玉米淀粉作为碳源，用量2
‑
3%；冷榨大豆饼粉作为氮源，用量2%
‑
3；添加速效碳源葡萄糖0.5
‑
2%；添加速效氮源尿素1%
‑
2%；添加无机盐氯化钠、磷酸二氢钾和氯化镁，用量分别是氯化钠0.1
‑
0.2%，磷酸二氢钾用量0.1
‑
0.2%，氯化镁0.2
‑
0.4%；同时添加豆油作为消泡剂用量为0.3%
‑
0.5%；进行消毒，种子培养基体积与发酵培养基体积百分比为10
‑
15%，培养时通气量为300L/min；搅拌速度为120
‑
150rmp，培养温度28
±
2℃，pH值自然，培养周期24
‑
28h；（3）菌种发酵罐的培养基采用玉米粉或者玉米淀粉作为碳源，用量2
‑
3%；用冷榨大豆饼粉作为氮源，用量2%
‑
3%；添加速效氮源尿素1%
‑
2%；添加无机盐氯化钠、磷酸二氢钾和氯化镁，氯化钠的用量为0.1
‑
0.2%，磷酸二氢钾的用量为0.1
‑
0.2%，氯化镁的用量为0.2
‑
0.4%；同时添加豆油作为消泡剂用量为0.1%
‑
0.2%，进行消毒，种子培养基体积与发酵培养基体积百分比为10
‑
15%，培养时通气量为300L/min，搅拌速度为120
‑
150rmp，培养温度28
±
2℃，pH自然，发酵周期72
‑
90h，pH为7.2开始放罐；
（4）放罐时，发酵液中中生菌素F含量为3
‑
5g/L，发酵液生产中生菌素F母药的流程如下：第一步，将发酵液用草酸调节pH为3.5
±
0.3，然后采用超滤过滤；第二步，滤液以2BV/h的速度通过树脂进行离子交换，再用洗脱液洗脱，收集后的洗脱液调整pH值至3.5；第三步，采用减压浓缩将洗脱液至浓度为40
±
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种中生菌素F组分母药，其特征在于，中生菌素F组分的含量为60.8
‑
78.7wt%。2.根据权利要求1所述的中生菌素F组分母药的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）配制生产试管斜面培养基，并在斜面上接入链霉菌，进行培养；当斜面培养基中长出单菌落时用接种针挑出单菌落进入下一步培养；（2）配制菌种发酵的种子培养基，并接种步骤（1）的单菌落进行培养，得到种子培养液；（3）配制发酵罐培养基，接入上步骤（2）得到的种子培养液，其中，种子培养液与发酵培养液体积比为10%
‑
15%；（4）将发酵液经过过滤、离子交换、洗脱、浓缩、脱色、降温、干燥步骤后得到中生菌素母药。3.根据权利要求2所述的生产方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）生产试管的斜面培养基采用玉米粉或者玉米淀粉作为碳源，用量3
‑
7%；采用尿素作为氮源，用量1
‑
3%；微量元素氯化钠，用量0.1
‑
0.2%；微量元素氯化镁用量0.1
‑
0.2%；磷源采用磷酸二氢钾，用量0.2
‑
0.4%；琼脂用量20g/L；用2mol/L盐酸或2mol/L氢氧化钠调pH值为7.0
‑
7.4；用自来水补足，配制时步骤如下：第一步，在40
±
2℃的自来水中依次加入氯化钠、氯化镁、磷酸二氢钾、尿素，搅拌充分溶解后，再加入玉米淀粉，搅拌至均匀无团块；该步用自来水为总配制用水量的70%，配制过程在水浴中完成；第二步，用第一步同样温度的自来水定容；第三步，用第二步定容好的溶液放置室温，等温度降至20℃如果pH高于7.4，用2mol/L盐酸调整；如果低于7.0，用2mol/L氢氧化钠调整pH；然后加入琼脂，搅拌均匀；第四步，以上调整好的培养基灭菌后制作斜面，并在37℃培养72小时，无杂菌落便可使用；第五步，在斜面上接入链霉菌，培养140
‑
150小时后，长出灰白色菌苔；（2）菌种发酵的种子培养基中采用玉米粉或者玉米淀粉作为碳源，用量2
‑
3%；冷榨大豆饼粉作为氮源，用量2%
‑
3；添加速效碳源葡萄糖0.5
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2%；添加速效氮源尿素1%
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2%；添加无机盐氯化钠、磷酸二氢钾和氯化镁，用量分别是氯化钠0.1
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0.2%，磷酸二氢钾用量0.1
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0.2%，氯化镁0.2
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0.4%；同时添加豆油作为消泡剂用量为0.3%
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0.5%；进行消毒，种子培养基体积与发酵培养基体积百分比为10
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15%，培养时通气量为300L/min；搅拌速度为120
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150rmp，培养温度28
±
2℃，pH值自然，培养周期24
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28h；（3）菌种发酵罐的培养基采用玉米粉或者玉米淀粉作为碳源，用量2
‑
3%；用冷榨大...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨宏勃，郑鹏飞，潘忠成，田利明，李蒲民，
申请(专利权)人：陕西麦可罗生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：