一种分泌结冷胶裂解酶特异性降解结冷胶的基因工程菌及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种分泌结冷胶裂解酶特异性降解结冷胶的基因工程菌及应用，属于基因工程技术领域。本发明专利技术实现了来源于芽孢杆菌的结冷胶裂解酶在毕赤酵母中的异源表达，重组结冷胶裂解酶活力合成的纯度得到提高。在温度35～55℃反应0.5h后酶活为62～410U/mg，在pH 6.0～8.0反应0.5h后酶活为125～392U/mg，在含有金属离子的体系中反应0.5h后酶活为128～432U/mg。本发明专利技术生产出的结冷胶裂解酶具有产量和纯度较高的优点，是更为经济、环保、可持续的生产结冷胶寡糖的方式，更有利于推动生物法合成结冷胶裂解酶降解结冷胶制备结冷胶寡糖的工业化进程。的工业化进程。的工业化进程。

【技术实现步骤摘要】
一种分泌结冷胶裂解酶特异性降解结冷胶的基因工程菌及应用


[0001]本专利技术涉及一种分泌结冷胶裂解酶特异性降解结冷胶的基因工程菌及应用，属于基因工程


技术介绍

[0002]结冷胶寡糖具有益生元活性，酸水解是最常见的结冷胶寡糖制备方法，但存在目标聚合度(DP 2～6)寡糖产量低，污染严重等问题。结冷胶裂解酶是一种降解微生物多糖结冷胶的酶，该酶对结冷杂多糖，特别是脱乙酰结冷胶具有高度专一性。它通过重复的四糖结构的D
‑
葡萄糖
‑
D
‑
葡萄糖醛酸位点中的内在作用类型切割聚合物裂解结冷胶主链的糖苷键，并在非还原端与不饱和葡萄糖醛酸一起释放出(
△
GlcA
→
Glc
→
Rha
→
Glc)四糖单元。结冷胶裂解酶在革兰氏阴性细菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、芽孢杆菌等菌株中均有表达。已有文献公开在T7启动子控制下构建了带有结冷胶裂解酶基因编码的表达质粒，将其导入大肠杆菌，利用大肠杆菌质粒高拷贝特性，对带有目的基因的质粒进行扩增，将扩本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种编码结冷胶裂解酶的基因，其特征在于，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.携带权利要求1所述编码结冷胶裂解酶的基因的载体。3.表达权利要求1所述编码结冷胶裂解酶的基因或权利要求2所述载体的细胞。4.一种基因工程菌，其特征在于，以毕赤酵母为宿主，表达权利要求1所述编码结冷胶裂解酶的基因。5.根据权利要求4所述的基因工程菌，其特征在于，以质粒pPIC9K为表达载体；以毕赤酵母GS115为宿主。6.一种摇瓶发酵制备结冷胶裂解酶的方法，其特征在于，所述方法为将权利要求4或5所述基因工程菌的种子液以体积比20～60％的接种量接种于培养基中进行发酵，直至碳源耗尽，饥饿培养1.5～2.5h后，每隔20～30h补加甲醇，诱导60～80h。7.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：高敏杰，詹晓北，段飞扬，蒋芸，李志涛，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：