一种以透明质酸为载体的植物硒蛋白产品制备方法技术

本发明专利技术公开了一种以透明质酸为载体的植物硒蛋白产品制备方法，将植物硒蛋白加入氢氧化钠稀溶液预处理，再用活性炭对预处理蛋白进行吸附、脱色，之后利用碳二亚胺法活化透明质酸，将预处理蛋白和活化的透明质酸共混反应，经过精制得到以透明质酸为载体的植物硒蛋白产品。本发明专利技术工艺简单，通过对植物硒蛋白进行初步水解，植物硒蛋白暴露更多的氨基、羧基残基，更利于后期进行修饰。另外通过活性炭吸附脱色，降低了例如平菇蛋白的异味及蛋白水解产生的色素，使最终产物的颜色感官舒适。本发明专利技术制备的以透明质酸为载体的硒植物蛋白，因透明质酸的靶向作用使得小分子植物硒蛋白更容易富集于炎症、肿瘤细胞。富集于炎症、肿瘤细胞。

【技术实现步骤摘要】
一种以透明质酸为载体的植物硒蛋白产品制备方法


[0001]本专利技术属于功能食品领域，具体是一种以透明质酸为载体的植物硒蛋白产品制备方法。

技术介绍

[0002]透明质酸是一种天然的糖胺聚糖，由葡萄糖醛酸和N
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乙酰葡萄糖的双糖单元反复交替连接而成，在细胞迁移、增殖、分化、黏附和基因表达等方面发挥着重要作用。透明质酸相对分子量分布较广泛(1～1x104)，小分子量透明质酸已被证明可诱导引发受体介导的细胞内信号。人体内有多种透明质酸受体，如CD44受体、透明质酸介导能动性受体、透明质酸内吞受体、淋巴管内皮细胞透明质酸受体等，其中CD44是涉及透明质酸最重要的一个受体，也是目前研究最为广泛、深入的。近年研究表明，CD44标准体(CD44S)及其拼接变异体(CD44V)在肿瘤的发生、发展中起到重要作用，与肿瘤的生长、炎症的发展密切相关，多种抗肿瘤和减少细胞损伤的药物、食物围绕透明质酸为载体进行开发。
[0003]硒是人体正常生理活动所必需的一种微量元素，参与机体重要的生理生化活动。硒在生物体内主要通过形成硒半胱氨酸的形式整合在各种硒蛋白的活性位点上，主要的有谷胱甘肽过氧化物酶，硫氧还蛋白还原酶，碘化酪氨酸脱氢酶等。以谷胱甘肽过氧化物酶为例，该酶可以还原机体代谢过程不断产生自由基，使机体内自由基水平维持动态平衡位于一种正常的无害水平。当机体内的硒含量较低时，造成机体对自由基的清除速度减慢，这些都会造成体内自由基水平过高，进而对机体组织细胞造成损伤，最终引发疾病的产生。该机制也是硒对某些类型肿瘤、炎症、心血管等疾病具有防护作用的重要理论依据。
[0004]现有技术下生产的硒产品，基本思路是采用天然农作物吸收无机硒再转化为有机硒，有的产品进一步提取农作物的蛋白，从而获得纯度较高的富硒植物蛋白。此类技术缺陷很多，例如富硒大米，硒含量总体较低。现有技术广泛采用的蘑菇富硒技术，其提取的蘑菇蛋白硒含量虽然较高，但蘑菇蛋白本身的难闻异味，使得其在食品添加领域应用受限，往往需要添加较多的酸味辅料掩盖蘑菇蛋白的异味。
[0005]现有技术生产的硒产品由于缺乏靶向作用，经人服用后硒广泛分布于人体组织中，并不能很好的富集于人体受损的部位，因此需要长期、大剂量的服用，而过多的硒摄入对人体存在潜在的副作用。现有技术也在积极探索具有靶向功能的载体系统来解决此类问题，在食品医药领域，透明质酸载体研究较多。
[0006]现有的技术方案鲜有报道采用预处理植物蛋白的方式来增强蛋白的可修饰性，本专利技术创造性的对几类易于修饰的植物蛋白进行初步水解处理，使其暴露更多活性基团，大大增强了植物蛋白的可修饰性，给开发以透明质酸为载体的硒产品设计提供了思路。
[0007]专利CN 111840315 A公布了一种纳米硒材料、制备方法及使用方法。其特征在于纳米硒材料在使用前加入交联剂，与透明质酸反应形成三维网络结构，包覆还原形成的纳米硒，而且能与氨基葡萄糖反应，当交联的透明质酸逐渐降解，其包覆的纳米硒逐步释放出来，延长纳米硒发挥作用的时间，减少一次性加入纳米硒的短暂高浓度导致的对人体的伤
害。该方法采用的硒源为亚硒酸钠，亚硒酸钠虽然可以用于食品添加，但其较高的毒性，早已被市场淘汰，此外该技术方案和本专利技术想要制备的植物硒蛋白作为附载物的技术方案有本质区别。
[0008]专利CN 109833329 A公布了一种透明质酸
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多孔纳米硒复合物及其制备方法与应用，该制备方法步骤繁琐，且反应过程中使用了较多的有毒、强腐蚀性溶剂，步骤繁琐，环保性较差，工艺不适用于功能食品生产。

技术实现思路

[0009]为了克服上述
技术介绍
中现有技术以透明质酸为载体的硒产品存在的问题，同时开发一种可以安全食用、无异味、既保留植物硒蛋白安全可靠的特性还能附带靶向功能的硒产品，本专利技术采用的工艺简单，条件温和，所有原料来源廉价易得，可以大批量制备。
[0010]为了达到上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：一种以透明质酸为载体的植物硒蛋白产品制备方法，先将含植物硒蛋白加入氢氧化钠稀溶液制备预处理，再用活性炭对预处理蛋白进行吸附、脱色，之后利用碳二亚胺法活化透明质酸，最后将预处理蛋白和活化的透明质酸共混反应，经过精制得到以透明质酸为载体的植物硒蛋白产品。
[0011]本专利技术进一步的改进在于，包含如下步骤：(1)将植物硒蛋白加入质量浓度0.5％
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10％NaOH溶液于40
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80℃下共热20分钟
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3小时。反应完毕后，调节PH至7，过滤洗涤得到预处理蛋白。植物硒蛋白和氢氧化钠溶液的质量比为1∶25
‑
1∶300。(2)将(1)中获得的预处理蛋白加入纯化水中，用酸调节PH至5，升温至70℃
‑
100℃后加入活性炭搅拌3小时，过滤，调节PH至7，浓缩过滤，用纯化水洗涤滤物3次。(3)将透明质酸溶于水中，于室温下加入N
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羟基琥珀酰亚胺和1
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐，用酸调节PH至5，保持室温1
‑
3小时，之后加入步骤(2)处理的植物蛋白，室温下反应12
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72小时，之后升温至70摄氏度反应5小时后降温，进行透析、冷冻干燥得产品。
[0012]本专利技术进一步的改进在于，所述步骤(1)所使用的植物硒蛋白为富硒平菇蛋白、富硒山药蛋白、富硒无花果蛋白，植物蛋白的分子量为20kDa
‑
80kDa，优选的采用富硒平菇蛋白。
[0013]本专利技术进一步的改进在于，所述步骤(1)所使用的植物硒蛋白若为富硒山药蛋白，则可以省略步骤(2)。
[0014]本专利技术进一步的改进在于，所述步骤(2)调节PH的酸为醋酸、柠檬酸、酒石酸、草酸，优选的采用质量浓度10％的柠檬酸。
[0015]本专利技术进一步的改进在于，所述步骤(3)中透明质酸溶液浓度为1％
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3％，透明质酸的分子量为5kDa
‑
100Kda。1
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐的加入量为透明质酸量的5％
‑
35％，1
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐与N
‑
羟基琥珀酰亚胺的物质的量比为1∶1
‑
1∶1.3。
[0016]本专利技术的有益效果：(1)本专利技术制备的预处理植物硒蛋白，通过对植物硒蛋白进行初步水解，植物硒蛋白暴露更多的氨基、羧基残基，相较之前高分子量的蛋白，更利于后期进行修饰。(2)本专利技术制备的预处理植物硒蛋白，通过活性炭吸附脱色，降低了例如平菇蛋白的异味及蛋白水解
产生的色素，使最终产物的颜色感官舒适。(3)本专利技术制备的以透明质酸为载体的硒植物蛋白，因透明质酸的靶向作用使得小分子植物硒蛋本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种以透明质酸为载体的植物硒蛋白产品制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将植物硒蛋白加入氢氧化钠溶液共热，调节pH至7，过滤洗涤得到预处理蛋白，将获得的预处理蛋白加入纯化水中，用酸调节pH至5，升温至70℃
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100℃后加入活性炭搅拌3小时，过滤，调节pH至7，浓缩过滤，用纯化水洗涤滤物，将透明质酸溶于水中，室温下加入N
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羟基琥珀酰亚胺和1
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐，用盐酸调节pH至5，保持室温1
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3小时，之后加入处理的植物蛋白，室温下反应12
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72小时，之后升温至70℃反应5小时后降温，进行透析、冷冻干燥得产品。2.根据权利要求1所述的一种以透明质酸为载体的植物硒蛋白产品制备方法，其特征在于：所述植物硒蛋白为富硒平菇蛋白、富硒山药蛋白、富硒无花果蛋白，所述活性炭为椰壳活性炭。3.根据权利要求1所述的一种以透明质酸为载体的植物硒蛋白产品制备方法，其特征在于：...

【专利技术属性】
技术研发人员：明松，
申请(专利权)人：江苏中农科食品工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：